专利名称：一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法
技术领域：
本发明涉及参芎葡萄糖注射液，尤指参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法。
背景技术：
参芎葡萄糖注射液具有抗血小板凝集，扩张动脉，降低血液粘度，改善微循环，改善心肌供血供氧等作用，是临床常用药。参芎葡萄糖注射液收录于国家药品标准化学药品地标升国标第12册，原质量标准热原检查方法为家兔法，而家兔法检验结果的准确性与一致性取决于实验动物状况，故对饲养家兔的饲养环境、检测的条件及操作人员都有严格的要求，操作繁琐费时，又不能用于生产过程中的质量监控。
发明内容
本发明所解决的技术问题在于克服了家兔法检测方法中的不足之处，提供一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法。该方法快速、灵敏，能在保证检测准确的同时，减少检验成本、提高检验效率、方便生产过程监控及检验工作的开展。
本发明所解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，包括如下步骤(I)参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定步骤；(2)鲎试剂灵敏度复核步骤；(3)干扰试验预试验步骤，确定参芎葡萄糖注射液最小不干扰稀释倍数；(4)正式干扰试验步骤；(5)供试品细菌内毒素检测步骤。在所述步骤(I)中，参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定考虑联合用药， 确定限值为I. OEU · mL—1在所述步骤(3)中，干扰试验预试验中参芎葡萄糖注射液对应的最大有效稀释倍数为2 32倍。本发明依据现参照中国药典2010年版二部附录细菌内毒素检查法，对参芎葡萄糖注射液应用鲎试剂进行细菌内毒素检查的可行性做了研究。本发明的参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查法代替家兔热原检测方法，具有快速、灵敏的优点，能在保证检测准确的同时，减少检验成本、提高检验效率、方便生产过程监控及检验工作的开展。下面通过具体实施方式
进一步说明本发明。
具体实施例方式I、实验材料及仪器鲎试剂(TAL):湛江博康海洋生物有限公司，规格0. lmL，批号1012020，灵敏度0. 25EU · πιΓ1 ;湛江安度斯生物有限公司，规格0. ImL,批号1101181，灵敏度0.25EU · mL'细菌内毒素工作标准品(WSE):中国药品生物制品检定所，效价120EU/支，批号 150601 — 201072。细菌内毒素检查用水(BET):中国药品生物制品检定所，规格10mL，批号2008 —04。参芎葡萄糖注射液贵州景峰注射剂有限公司，规格lOOmL，批号1、2、3。仪器电热干燥箱、ET - 96细菌内毒素凝胶法测定仪、旋涡混合器、微量移液器、 无热原吸头、试管、试管架、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、砂轮。所用玻璃器皿均以250°C干烤I小时以上。2、方法和结果2. I细菌内毒素限值(L)的确定
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根据公式L = K/M，考虑到可能联合用药，最终确定限值为I. OEU · mL'2. 2鲎试剂灵敏度复核按照中国药典2010年版附录细菌内毒素检查法规定进行鲎试剂的标示灵敏度复核，2批鲎试剂经检查Ac与λ —致，结果均符合规定(见表I)。表I鲎试剂灵敏度复核结果
批U-标示灵敏度，入_内毒素浓度(EU/ml)_ 灵敏度，入c
(Ε /πι1)0.5 0.25 O. 125 0.0625 P/(性 (EU/ml)---
10120200.25++++ ++++ ————--0.25
1101181O. 25++++ ++++ --------———0.252. 3干扰试验预试验2. 3. I参芎葡萄糖注射液干扰试验稀释倍数的确定根据计算公式MVD=cL/X，其中L为参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素限值
1.OEU -πιΓ1, λ为鲎试剂标示灵敏度，目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在O. 5 O. 03EU -πιΓ1 之间，则参芎葡萄糖注射液对应的最大有效稀释倍数分别为2倍、6倍、12倍、32倍。2. 3. 2实验操作将参芎葡萄糖注射液(批号I)用BET水稀释为原液、2倍、6倍、12倍32倍的溶液，将此系列溶液记为NPC。另制备同样系列浓度的供试液，并使每一浓度的供试液中均含有2λ (O. 5EU / mL)浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。分别取两个厂家灵敏度为 O. 25EU / mL的鲎试剂，与上述NPC和PPC进行反应，每一浓度重复2管，并设阳性对照记为 PC和阴性对照记为NC，混匀后，置内毒素凝胶法测定仪60min，结果见表2。表2干扰预试验结果
权利要求
1.一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，其特征在于，包括如下步骤(1)参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定步骤；(2)鲎试剂灵敏度复核步骤；(3)干扰试验预试验步骤，确定参芎葡萄糖注射液最小不干扰稀释倍数；(4)正式干扰试验步骤；(5)供试品细菌内毒素检测步骤。
2.如权利要求I所述的参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，其特征在于，在所述步骤(I)中，参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定考虑联合用药，确定限值为 I. OEU · mL'
3.如权利要求I所述的参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，其特征在于，在所述步骤(3 )中，干扰试验预试验中参芎葡萄糖注射液对应的最大有效稀释倍数为2 32倍。全文摘要
本发明公开的一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，包括如下步骤(1)参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定步骤；(2)鲎试剂灵敏度复核步骤；(3)干扰试验预试验步骤，确定参芎葡萄糖注射液最小不干扰稀释倍数；(4)正式干扰试验步骤；(5)供试品细菌内毒素检测步骤。利用本发明的方法检测参芎葡萄糖注射液细菌内毒素检查，快速、灵敏、大大缩短了检测时间，降低检测成本，特别适合实验室进行的检测工作。
文档编号G01N33/15GK102721795SQ201210180839
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月4日 优先权日2012年6月4日
发明者叶湘武, 周光羽, 左红雨, 毕昌琼 申请人:贵州景峰注射剂有限公司