专利名称：一种lc-ms/ms联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法
技术领域：
本发明属于烟草和化学技术领域，具体地涉及使用高效液相色谱-串联质谱检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法。
背景技术：
卷烟在燃烧过程中，发生了蒸馏、干馏、热解、合成、冷凝等多种物理和化学反应，形成大量新生化合物，烟气成分非常复杂。侧流烟气是从卷烟燃烧锥直接释放到空气以及从卷烟纸扩散出来的烟气物质，大部分侧流烟气是在卷烟阴燃过程中发生的，也有一小部分是抽吸过程中生成，因此，主流和侧流烟气的化合物种类基本相同，但是含量有较大差另O。氨基甲酸乙酯在卷烟主流和侧流烟气中均有分布，是Hoffmann 43种烟气有害成分之 一，也被美国食品及药物管理局(FDA)列为烟草中的致癌物质(CA)和生殖系统/发育有毒物(RDT)。氨基甲酸乙酯是一种多位点致癌物，可导致肺癌、肝癌、皮肤癌和淋巴癌等多种癌症，在生物体内的代谢途径主要有两条，一条是酯酶代谢，另一条主要与细胞色素P450有关，进入生物体后，约O. 5%左右的氨基甲酸乙酯被细胞色素P450氧化为乙烯基-氨基-甲酸乙酯，随后形成乙烯基-氨基-甲酸乙酯环氧化物，该种环氧化物在体内形成DNA加聚物，造成DNA双链损坏，从而导致细胞癌变，约O. 1%的氨基甲酸乙酯被细胞色素P450氧化后形成的物质能够导致DNA双链复制时错配，从而造成基因的严重缺失或突变。氨基甲酸乙酯主要存在于发酵食品及酒类饮料中，加拿大卫生与福利组织对酒类中氨基甲酸乙酯含量的最高浓度做了相关规定，美国、日本等其他国家随后也有类似的规定。目前建立的氨基甲酸乙酯的检测方法主要集中于泡菜、酸奶、面包等发酵食品及黄酒、白兰地等酒类饮料行业。中国专利200910099554. O公开“一种检测黄酒中氨基甲酸乙酯的方法”，该方法通过减压蒸懼一与盐酸及9-羟基吨溶液混合进行衍生化反应一利用高校液相色谱仪对组分进行分离，然后采用外标法计算氨基甲酸乙酯的含量。该方法可以有效检测黄酒中氨基甲酸乙酯。另外中国专利201110339615. 3和中国专利201110288339. 2分别公开了一种在蒸馏酒和饮料中氨基甲酸乙酯的检测方法。随着公众对吸烟与健康问题的日益关注，卷烟烟气有害成分一尤其是氨基甲酸乙酯的含量一成为人们关注的焦点问题，但是，由于上述专利方法中的基质组成较为简单，干扰组分较小，而侧流烟气组成复杂，成分种类繁多，存在的检测干扰因素更多、更复杂、基质干扰严重，食品行业建立的检测方法能否适用于侧流烟气中氨基甲酸乙酯的测定尚未可知，而目前国内外尚没有检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯的任何文献报道和专利。环境烟草烟气(ETS)是重要的室内污染物，被动吸烟者感受的就是该种物质，而卷烟的侧流烟气是环境烟草烟气的主要来源，约占环境烟草烟气的85%。随着公众对吸烟与健康问题的日益关注，卷烟中有害成分释放量逐渐成为人们关注的焦点。目前，加拿大等一些国家和地区已经制定了相关的法律，要求卷烟生产商提供卷烟烟气中有害成分的释放量，有鉴于此，建立一种检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法对研究卷烟抽吸过程中氨基甲酸乙酯在卷烟主流和侧流烟气中的分布规律有着重要意义，也有利于客观评价卷烟危害性的大小。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简便、分离效果好、定性准确、样品分析时间短、检测灵敏度高的使用高效液相色谱-串联质谱LC-MS/MS检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法。本发明提供一种LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，包括以下步骤利用鱼尾罩和玻璃纤维滤片捕集卷烟侧流烟气中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取滤片和清洗鱼尾罩，萃取液稀释后经固相萃取小柱，用二氯甲烷洗脱，洗脱液用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用内标法得到卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯的含量。进一步地，所述内标物为氘代氨基甲酸乙酯。 进一步地，所述固相萃取小柱固定相为石墨化炭黑。进一步地，所述高效液相色谱仪条件为C18反相柱，检测温度30°C，进样量I μ L 10 μ L，流速O. 2 O. 4mL/min,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪条件为离子化模式为电喷雾；扫描模式为正离子；雾化气35 45psi ;气帘气IOpsi ;辅助加热气45 55psi ;碰撞气5psi ;离子源喷射电压5000 5800V ;离子源温度350 400°C。进一步地，所述高效液相色谱仪流动相A为含O. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序为
权利要求
1.一种LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，包括以下步骤利用鱼尾罩和玻璃纤维滤片捕集卷烟侧流烟气中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取滤片和清洗鱼尾罩，萃取液稀释后经固相萃取小柱净化，用二氯甲烷洗脱，洗脱液用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用内标法得到卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯的含量。
2.根据权利要求I所述的LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述内标物为氘代氨基甲酸乙酯。
3.根据权利要求I所述的LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述固相萃取小柱固定相为石墨化炭黑。
4.根据权利要求I所述的LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪条件为C18反相柱，检测温度30 V，进样量I y L 10 u L，流速0. 2 0. 4mL/min,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪条件为 离子化模式为电喷雾；扫描模式为正离子；雾化气35 45psi ;气帘气IOpsi ;辅助加热气45 55psi ;碰撞气5psi ;离子源喷射电压5000 5800V ;离子源温度350 40CTC。
5.根据权利要求4所述的LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪流动相A为含0. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序为__
6.根据权利要求I所述的LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，包括如下步骤 1)将待测卷烟在GB/T16447-2004规定的烟草及烟草制品调节和测试的大气环境条件下平衡48h ;确定和标记抽吸卷烟的烟蒂长度，按照YC/T185中侧流烟气抽吸方法，调节侧流吸烟机的抽吸流量为3000mL/min，抽吸3支卷烟，用鱼尾罩和玻璃纤维滤片捕集侧流烟气总粒相物； 2)抽吸完成后，将滤片置于IOOmL锥形瓶中，向其中加入IOmL含有约320纳克(ng)内标物的乙醇溶液,并用IOmL乙醇分2 3次清洗鱼尾罩，清洗液一并转移入锥形瓶中，锥形瓶置于振荡器上振荡30min ； 3)移取上述萃取液约IOmL于容器中，向其中加入IOOmL去离子水稀释，将稀释液转移至固相萃取小柱上，过柱速度约4mL/min，流出液弃去，抽干小柱3min后，采用二氯甲烷洗脱，收集洗脱液； 4)洗脱液于50°C条件下采用氮吹浓缩仪浓缩至干，用约ImL流动相重新溶解后，经高效液相色谱/串联质谱仪进行测定 所述高效液相色谱仪条件为C18反相柱，检测温度30°C，进样量I y L IOii L，流速.0.2 0. 4mL/min,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱； 所述质谱仪条件为离子化模式为电喷雾；扫描模式为正离子；雾化气35 45L/min ;气帘气10L/min ;辅助加热气45 55L/min ;碰撞气5L/min ;离子源喷射电压5000 .5800V ;离子源温度350 400°C ； . 5)配制10ng/mL 600ng/mL的氨基甲酸乙酯系列标准工作溶液,浓度梯度5个以上且均匀分布，各级标准溶液含有的内标的浓度为300ng/mL左右；利用高效液相色谱-串联质谱仪对标准溶液进行检测，将得到的氨基甲酸乙酯峰面积与内标峰面积的比值作为纵坐标，氨基甲酸乙酯浓度与内标浓度比作为横坐标，绘制标准曲线并得到回归方程，然后在相同条件下对样品进行检测，将得到的氨基甲酸乙酯与内标的峰面积比值代入方程中，即可计算得出氨基甲酸乙酯的含量。
7.根据权利要求6所述的LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述氨基甲酸乙酯的定量离子对m/z为90. 0/62. 1，定性离子对m/z为.90. 0/44. 0，驻留时间为200ms，碰撞能为14. OV。
8.根据权利要求2所述的LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述氘代氨基甲酸乙酯的定量离子对m/z为95. 0/63. 2，定性离子对m/z为.95. 0/44. 2，驻留时间为200ms，碰撞能为25. O。
全文摘要
本发明公开了一种LC-MS/MS联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法；利用鱼尾罩和玻璃纤维滤片捕集卷烟侧流烟气中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取滤片和清洗鱼尾罩，萃取液稀释后经固相萃取小柱净化，用二氯甲烷洗脱，洗脱液用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用内标法得到卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯的含量；该方法操作简便、分离效果好、定性准确、样品分析时间短、检测灵敏度高。
文档编号G01N30/08GK102809615SQ20121029145
公开日2012年12月5日 申请日期2012年8月16日 优先权日2012年8月16日
发明者朱怀远, 庄亚东, 张媛, 刘献军, 张映, 熊晓敏, 朱莹, 沈晓晨 申请人:江苏中烟工业有限责任公司