专利名称：一种lc-ms/ms联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法
技术领域：
本发明属于烟草和化学技术领域，具体地涉及一种高效液相色谱-串联质谱联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法。
背景技术：
氨基甲酸乙酯(Ethyl carbamate, EC又称尿烧)广泛存在于各种发酵食品中，是一种潜在的致癌物质，可导致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌等多种疾病，世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)将其归为2A类致癌物，美国国家毒理计划也将氨基甲酸乙酯列入“有理由预料引起癌症物质”名单，联合国粮农组织/世界卫生组织(FA0/WH0)食品添加剂联合专家委员会(JECFA)第64次会议建议，为了保障人类身体健康，应尽可能降低发酵饮料和食品中氨基甲酸乙酯的含量。·1991年，Hoffmann公布的43种烟气有害成分清单中，氨基甲酸乙酯名列其中，2001年Hoffmann与其研究者对1991年的有害成分清单进行了修订和补充，仍将氨基甲酸乙酯列为69种有害成分之一,2002年Rodgman和Green对烟气中已报道的有害成分进行了总结，也将氨基甲酸乙酯列为149种卷烟烟气有害成分之一，美国食品及药物管理局(FDA)将烟草中的氨基甲酸乙酯列为致癌物质(CA)和生殖系统/发育有毒物(RDT)，但截至目前，尚未发现国内外有采用高效液相色谱-串联质谱仪测定卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的任何专利和文献报道。中国专利200910099554. O公开“一种检测黄酒中氨基甲酸乙酯的方法”，该方法通过减压蒸懼一与盐酸及9-羟基吨溶液混合进行衍生化反应一利用高校液相色谱仪对组分进行分离，然后采用外标法计算氨基甲酸乙酯的含量。该方法可以有效检测黄酒中氨基甲酸乙酯。另外中国专利201110339615. 3和中国专利201110288339. 2分别公开了一种在蒸馏酒和饮料中氨基甲酸乙酯的检测方法。随着公众对吸烟与健康问题的日益关注，卷烟烟气有害成分一尤其是氨基甲酸乙酯的含量一成为人们关注的焦点问题，但是，酒类成分相对较为简单，基质干扰较小，而烟气的成分复杂，已经鉴定出来的就有近5000种，且氨基甲酸乙酯在烟气中为痕量组分，其余成分的干扰较为严重，上述专利方法并不适用于检测烟气中氨基甲酸乙酯的含量。因此，建立一种卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，并且该方法还需快速、准确、分离效果好、灵敏度高是烟草行业当前的一项迫切任务，对于研究和评价吸烟与健康问题也具有十分重要和迫切的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种前处理简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短、检测灵敏度高的高效液相色谱-串联质谱联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法。
—种LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，包括以下步骤利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取滤片，萃取液浓缩、稀释后经固相萃取小柱净化，用二氯甲烷洗脱，洗脱液用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用内标法得到卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯的含量。进一步地，所述内标法中采用的内标物为氘代氨基甲酸乙酯。进一步地，所述固相萃取小柱固定相为亲水亲脂平衡树脂。例如，HLB小柱(改性的苯乙烯二乙烯基苯共聚物)。进一步地，所述高效液相色谱仪条件为C18反相柱，检测温度30°C，进样量
Iμ L 10 μ L，流速O. 2 O. 4mL/min,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪条件为离子化模式为电喷雾；扫描模式为正离子；雾化气35 45L/min ;气帘气10L/min ;辅助加热气45 55L/min ;碰撞气5L/min ;离子源喷射电压5000 5800V ;离子源温度350 400。。。进一步地，所述高效液相色谱仪流动相A为含O. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序为
权利要求
1.一种LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，包括以下步骤利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取滤片，萃取液浓缩、稀释后经固相萃取小柱净化，用二氯甲烷洗脱，洗脱液用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用内标法得到卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯的含量。
2.根据权利要求I的LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述内标法中采用的内标物为氘代氨基甲酸乙酯。
3.根据权利要求I的LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述固相萃取小柱固定相为亲水亲脂平衡树脂。
4.根据权利要求I的LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪条件为C18反相柱，检测温度30°C，进样量I ii L 10 ii L，流速0. 2 0. 4mL/min，乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪条件为离子化模式为电喷雾；扫描模式为正离子；雾化气35 45psi ;气帘气IOpsi ;辅助加热气45 55psi ;碰撞气5psi ;离子源喷射电压5000 5800V ;离子源温度350 400°C。
5.根据权利要求4的LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪流动相A为含0. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序为:___
6.根据权利要求I的LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，包括以下步骤 1)将待测卷烟在GB/T16447-2004规定的烟草及烟草制品调节和测试的大气环境条件下平衡48h ； 2)采用吸烟机于标准抽吸条件下抽吸，利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的氨基甲酸乙酯，采用40mL含有约320纳克(ng)内标物的乙醇溶液萃取滤片，得到萃取液； 3)移取10 20ml萃取液于浓缩瓶中，蒸发浓缩至0.5mL左右，向浓缩液中加入IOmL蒸馏水，使乙醇的体积百分比降至10%以下，将稀释液转移至固相萃取小柱上净化，采用二氯甲烷进行洗脱，收集洗脱液； 4)洗脱液浓缩至干后用约Iml流动相溶解后采用高效液相色谱/质谱仪进行测定 所述高效液相色谱仪条件为C18反相柱，检测温度30°C，进样量I y L IOii L，流速.0.2 0. 4mL/min,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱； 所述质谱仪条件为离子化模式为电喷雾；扫描模式为正离子；雾化气35 45psi ;气帘气IOpsi ;辅助加热气45 55psi ;碰撞气5psi ;离子源喷射电压5000 5800V ;离子源温度350 400°C ； 5)配制10ng/mL 600ng/mL的氨基甲酸乙酯系列标准工作溶液,浓度梯度5个以上且均匀分布，各级标准溶液含有的内标物的浓度为300ng/mL左右；利用高效液相色谱-串联质谱仪对标准溶液进行检测，将得到的氨基甲酸乙酯峰面积与内标峰面积的比值作为纵坐标，氨基甲酸乙酯浓度与内标浓度比作为横坐标，绘制标准曲线并得到回归方程，然后在相同条件下对样品进行检测，将得到的氨基甲酸乙酯与内标的峰面积比值代入方程中，即可计算得出氨基甲酸乙酯的含量。
7.根据权利要求6的LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述氨基甲酸乙酯的定量离子对m/z为90. 0/62. 1，定性离子对m/z为·90. 0/44. 0，驻留时间为200ms，碰撞能为14. OV0
8.根据权利要求2的LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于，所述氘代氨基甲酸乙酯的定量离子对m/z为95. 0/63. 2，定性离子对m/z为·95. 0/44. 2，驻留时间为200ms，碰撞能为25. O。
全文摘要
本发明公开了一种LC-MS/MS联用检测卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法；利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取滤片，萃取液浓缩、稀释后经固相萃取小柱净化，用二氯甲烷洗脱，洗脱液用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用内标法得到卷烟主流烟气中氨基甲酸乙酯的含量；该方法前处理简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短、检测灵敏度高。
文档编号G01N30/88GK102788858SQ20121029232
公开日2012年11月21日 申请日期2012年8月16日 优先权日2012年8月16日
发明者刘献军, 庄亚东, 张媛, 张映, 朱怀远, 朱莹, 熊晓敏 申请人:江苏中烟工业有限责任公司