养血清脑颗粒的高效液相色谱检测方法

养血清脑颗粒的高效液相色谱检测方法
【专利摘要】本发明提供了一种检测养血清脑颗粒中化学成分的方法，养血清脑颗粒的检测样品采用甲醇超声提取，采用高效液相色谱-质谱/质谱定性分析制剂的化学成分，采用高效液相色谱定量分析制剂的指标成分。本发明具有很好的线性、重复性、重现性和回收率，有助于更加全面控制养血清脑颗粒的质量。
【专利说明】养血清脑颗粒的高效液相色谱检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药、化学领域，具体涉及现代中药产品养血清脑颗粒中化学成分的检测方法。
【背景技术】
[0002]养血清脑颗粒是由当归、川芎、白芍、熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索、细辛11味中药组成的复方制剂，具有养血平肝、活络止痛的功效，主要用于治疗血虚肝亢所致的头 痛、眩晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等。是受国家重点保护的中药品种。
[0003]养血清脑颗粒虽然临床疗效确切，但对于该制剂的物质基础研究有待深入:目前文献中最多只定性了养血清脑颗粒中14种成分(李文博，韩建平，高钧，等.养血清脑颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究.分析化学，2011，39(3):387-391)，对于11味药的大复方，其基本的物质基础有待进一步研究，以进一步明确该制剂的组成成分。此外，对于养血清脑颗粒的质量控制有待完善:目前国家标准(YBZ29552005-2009Z)仅对芍药苷一个成分进行质量控制，不能实现多味药材多成分质量的同时控制。
[0004]为更加全面控制养血清脑颗粒质量，建立满足中药现代化的质量控制标准，需要一种可以同时定性养血清脑颗粒多种化学成分，并定量养血清脑颗粒中多种指标成分的分析方法。

【发明内容】

[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供了一种检测养血清脑颗粒中多种化学成分的方法。
[0006]根据本发明的养血清脑颗粒高效液相色谱检测方法，检测样品采用10%~50%的甲醇提取，色谱条件为采用C18色谱柱，流动相为磷酸溶液-乙腈，检测器为二极管阵列检测器。
[0007]在高效液相色谱-质谱/质谱定性分析制剂的化学成分的基础上采用高效液相色谱定量分析制剂的指标成分。
[0008]根据本发明实施方式之一，检测样品采用25%甲醇超声提取。发明人经试验证实，上述提取条件有效成分提取效率最闻。
[0009]根据本发明的实施方式之一，色谱流动相A相为0.01°θ.05%磷酸溶液，B相为乙腈。优选地，色谱流动相A相为0.02%磷酸溶液，B相为乙腈，梯度洗脱方法为:
[0010]O ~lOmin，5%B 相—10%B 相；
[0011]10 ~15min，10%B 相—12%B 相；
[0012]15 ~25min，12%B 相—15%B 相；
[0013]25 ~35min，15%B 相—18%B 相；
[0014]35 ~40min，18%B 相—19%B 相；
[0015]40 ~43min, 19%B 相。[0016]根据本发明的另一实施方式,色谱流动相流速为0.5-1.5mL/min,优选地,流动相流速为 0.9-1.2mL/min。
[0017]根据本发明的再一实施方式，柱温为25~35°C。优选地，柱温为30°C。发明人考察了柱温(不控温、251:、301:、35°0对分离效果的影响使用，结果表明柱温30°C的情况下，制剂中待测组分峰形对称，分离度高且分析结果稳定。
[0018]根据本发明实施方式之一， 色谱进样量为2.5~25 μ L。
[0019]根据本发明实施方式之一，采用二极管阵列检测器变波长扫描，色谱检测器波长为210-350nm。优选地，色谱检测器波长依次选择为280nm、320nm和230nm。
[0020]实验证明:没食子酸和原儿茶酸最佳吸收波长为280nm，绿原酸，咖啡酸，阿魏酸最佳吸收波长为320nm，芍药内酯苷和芍药苷最佳吸收波长为230nm。故采用二极管阵列检测器(DAD)变波长扫描，在一次分析中可以实现多个成分在最佳波长的检测。
[0021]根据本发明实施方式之一，在高效液相色谱检测之前，还进一步包括采用质谱对养血清脑颗粒中的化学成分进行检测的步骤，检测条件为:离子源为ESI源，喷雾电压设为4kV，鞘气压力为35psi，辅助N2流速为5L/min，加热毛细管温度为300°C，源内CID为10V，正负离子全扫m/z:100_1200。
[0022]根据本发明的检测方法，没食子酸，原儿茶酸，绿原酸，咖啡酸，阿魏酸，芍药苷，芍药内酯苷的含量测定结果分别为0.376-0.434mg.g'0.094-0.137mg.g-1、0.611-0.871mg.g'0.113-0.149mg.g'0.484-2.194mg.g'4.139-5.543mg.g_1 和0.261-0.326mg ^g10
[0023]本发明利用HPLC测定了养血清脑颗粒中7种指标成分的含量，相对于国家标准来说，可更加全面控制养血清脑颗粒质量。本发明具有很好的线性、重复性、重现性和回收率，有助于更加全面控制养血清脑颗粒的质量。由体内实验已经确定芍药苷和芍药内酯苷为入血成分，故上述测定方法可以为后期药代实验给药量的确定提供借鉴。
[0024]本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
【专利附图】

【附图说明】
[0025]本发明的上述和/或附加的方面和优点从下面结合附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中:
[0026]图1对照品的高效液相色谱图；
[0027]图2供试品的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0028]下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能解释为对本发明的限制。
[0029]实验例一方法学考察和样品测定
[0030]1仪器与试药
[0031]XS205DU电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，KQ_250VDB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，液相色谱-质谱联用仪:美国热电集团Finnigan Surveyor液相系统(包括四元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱恒温系统及DAD检测器)；FinniganLCQ离子讲质谱仪，型号为LCQ Advantage MAX, Agilentl200液相色谱仪，AgilentDAD检测器(美国Agilent公司)，没食子酸(批号:110831-200803)，原儿茶酸(批号:110809-200604)，绿原酸(批号:110753-200413)，咖啡酸(批号:110885-200102)，阿魏酸(批号:110773-200611)，芍药苷(批号:110736-200630，含量测定用)均由中国药品生物制品检定所提供，芍药内酯苷苷(批号:10081445，天津一方科技有限公司)，乙腈(色谱纯，Merck公司)，磷酸(色谱纯，天津光复精细化工研究所)，水为MilliQ制备超纯水。[0032]2溶液的制备[0033]2.1对照品溶液的制备[0034]精密称取没食子酸，原儿茶酸，绿原酸，咖啡酸，阿魏酸，芍药苷，芍药内酯苷对照品适量，加25%甲醇分别制成每Iml含没食子酸3.77 μ g、原儿茶酸1.63 μ g、绿原酸4.05 μ g、咖啡酸1.33 μ g、芍药苷29.36 μ g、芍药内酯苷12.95 μ g、阿魏酸2.43 μ g的混和溶液，即得。[0035]2.2供试品溶液的制备[0036]取养血清脑颗粒适量，研细，取约200mg，精密称定，置25ml量瓶中，加25%甲醇25ml，超声处理30分钟，放冷，加25%甲醇至刻度，摇匀，用0.22 μ m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。[0037]3质谱分析[0038]离子源为ESI源，喷雾电压设为4kV，鞘气(N2)压力为35psi，辅助气(N2)流速为5L/min，加热毛细管温度为300°C。源内CID为10V。正负离子全扫m/z: 100-1200。[0039]利用HPLC-DADMS/MS共鉴定出41种成分，见表1:[0040]表1化学成分定性表
【权利要求】
1.一种养血清脑颗粒的高效液相色谱检测方法，其特征在于检测样品采用10%~50%的甲醇提取，色谱条件为采用C18色谱柱，流动相为磷酸溶液-乙腈，检测器为二极管阵列检测器。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，检测样品采用25%甲醇超声提取。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于色谱流动相A相为0.01%-0.05%磷酸溶液，B相为乙腈。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于色谱流动相A相为0.02%磷酸溶液，B相为乙腈，梯度洗脱方法为: .O ~IOmin, 5%Β 相—10%Β 相； . 10 ~15min, 10%B 相—12%B 相； . 15 ~25min, 12%B 相—15%B 相； . 25 ~35min, 15%B 相—18%B 相； .35 ~40min, 18%B 相—19%B 相； . 40 ~43min, 19%B 相。
5.如权利要求1所 述的方法，其特征在于色谱流动相流速为0.5-1.5mL/min，优选为.0.9-1.2mL/min。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于色谱柱温为25-35°C。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于采用二极管阵列检测器变波长扫描，色谱检测器波长为210-350nm。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于色谱检测器波长依次选择为280nm、320nm和.230nm。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在高效液相色谱检测之前，还进一步包括采用质谱对养血清脑颗粒中的化学成分进行检测的步骤，检测条件为:离子源为ESI源，喷雾电压设为4kV，鞘气压力为35psi，辅助气N2流速为5L/min，加热毛细管温度为300°C，源内CID为10V，正负离子全扫m/z: 100-1200。
10.如权利要求1-9所述的方法，其特征在于，没食子酸，原儿茶酸，绿原酸，咖啡酸，阿魏酸，芍药苷，芍药内酯苷的含量测定结果分别为0.376-0.434mg.g'0.094-0.137mg.g'.0.611-0.871mg.g'0.113-0.149mg.g'0.484-2.194mg.g'4.139-5.543mg.g_1 和.0.261-0.326mg ^g10
【文档编号】G01N30/36GK103630614SQ201210301559
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年8月22日 优先权日:2012年8月22日
【发明者】陈晓鹏, 张兰兰, 周水平, 朱永宏 申请人:天士力制药集团股份有限公司