专利名称：鸢尾科红葱属植物红葱及其提取物的质量检测方法
技术领域：
本发明属于药物的质量检测方法，尤其涉及一种红葱及其提取物的质量检测方法。
背景技术：
红葱，为鳶尾科植物红葱Eleutherine plicata Herb.的全草,原产西印度群岛，在我国分布于广西、云南等地，为民间药用植物。《中华本草》载其有清热凉血、活血通经、消肿解毒的作用。主治吐血、咯血、痢疾、经闭腹痛、风湿痹痛、跌打损伤、疮疖肿毒。民间本草载其可用于月经过多，红崩，衄血，胃肠出血，外伤出血，痢疾，风湿关节痛，跌打肿痛，疮毒；傣医将鱗茎用于刀伤，癫痫抽搐，关节疼痛，头晕，心慌，胸闷呕吐，全身疲乏无力。结合广西当地民间运用，概括红葱的功效作用集中在①妇科疾病:经闭腹痛、月经过多胃肠道疾病:胃肠出血、痢疾；③关节病变:风湿关节痛、跌打肿痛。根据现代药理学研究，红葱具有降血脂、降血糖、抗氧化和抗诱变、抗菌、増加冠状动脉血流量、抑制HIV、抑制人体拓扑异构酶II等多种药理活性。根据中国药典2010版的内容，没有针对红葱及其提取物的质量标准。由于红葱在临床上具有多方面的功效，因此，建立红葱及红葱提取物质量控制方法具有重要的意义。本发明的目的是从性状鉴别、薄层鉴别、含量測定等多个方面对红葱以及其提取物进行综合、全面的质量控制。
发明内容
本发明的目的在干，针对现有技术的不足，提供ー种简便、快捷的红葱及红葱提取物的质量检测方法，以有效地控制产品质量，从而保证临床疗效。本发明的质量控制方法包括红葱的性状鉴别、红葱以及红葱提取物的薄层鉴别和含量測定方法，其中含量的測定是对其所含的黄酮类化合物、蒽醌类化合物的測定。本发明目的是通过如下技术方案实现的:红葱药材性状鉴别:呈长圆状卵形或长椭圆形。鱗茎长卵圆形，鱗片肥厚，紫红色，无膜质包被。根柔嫩，红褐色。叶片卷曲，完整叶片展开后呈宽披针形或宽条形，长10-15cm，宽0.5-1.5cm,顶端渐尖，纵脉平行。气微，味淡。薄层鉴别方法:(I)取红葱及其提取物粉末适量，加30-90%こ醇加热回流，过滤，滤液蒸至无醇味，用石油醚振摇提取1-3次，合并石油醚液，水液备用。石油醚液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液点于硅胶G薄层板上，以石油醚-丙酮(7 12: I
5)展开，取出，晾干，喷以5-20%硫酸こ醇溶液，在90 120°C加热至斑点显色清晰。置365nm或254nm的紫外光灯下检视，可呈现9个明显的荧光斑点。(2)取鉴别(I)项下水液，继续用有机溶剂振摇提取1-3次，合并溶剂，水浴蒸干。残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液，点于硅胶G薄层板上，以石油醚-こ酸こ酷-丙酮-甲酸(3 8: I 5: 0.2 0.8: 0.1 0.5)展开，取出，晾干。置365nm或254nm的紫外光灯下检视，可呈现6个明显的荧光斑点。优选的检视波长为365nm。定性鉴别⑴项下提取时所用的石油醚优选为沸程在30-60°C的石油醚。定性鉴别(2)项下提取时所用的有机溶剂优选为三氯甲烷。定性鉴别⑴及⑵项下展开时所用的石油醚优选为沸程在60-90°C的石油醚。所述硫酸こ醇溶液的浓度优选为10%。总黄酮紫外分光光度含量測定法(I)对照品溶液的制备:取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成芦丁对照品溶液。(2)供试品溶液的制备:取红葱或红葱提取物适量，精密称定，置具塞容器中，カロ入30-95 %的こ醇溶液20-100ml，称定重量，加热回流0.5_3h，放冷，称重，溶剂补足重量，摇匀，过滤。取滤液l_3ml于蒸发皿中，加聚酰胺粉适量吸附，水浴挥去溶剤，井置于层析柱上。用甲苯洗脱，再用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，定容，作为供试品。(3)标准曲线的制备:精密量取一系列不同浓度的芦丁标准品溶液，置于比色皿中，在波长200-700nm内选择吸收波长，測定吸光度，并以吸光度(A)为纵坐标，溶液浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线。(4)精密量取供试品溶液，置于比色皿中測定吸光度值。根据标准曲线，计算红葱及(或)红葱提取物中总黄酮含量。所述的芦丁在120°C烘干至恒重。对照品溶液的制备优选:制成每ImL含0.1mg的溶液；总蒽醌紫外分光光度含量測定法(I)对照品溶液的制备:取大黄酸对照品适量，精密称定，加95%こ醇溶解，制成总蒽醌对照品溶液。(2)供试品溶液的制备:取红葱或红葱提取物适量，精密称定，置圆底烧瓶中，カロ入30-95%的こ醇溶液20-100ml，加热回流0.5_3h，放冷，过滤，定容，作为供试品。(3)标准曲线的制备:精密量取一系列不同浓度的大黄酸标准品溶液，加0.5%醋酸镁-甲醇显色，置于比色皿中，在波长200-700nm内选择吸收波长，測定吸光度，并以吸光度(A)为纵坐标，溶液浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。(4)精密量取供试品溶液，稀释，加0.5%醋酸镁-甲醇显色，置于比色皿中測定吸光度值。根据标准曲线，计算红葱及(或)红葱提取物中总蒽醌含量。所述的大黄酸在120°C烘干至恒重。对照品溶液的制备优选:制成每Im L含0.614mg的溶液；红葱及其提取物优选的鉴别方法包括如下:(I)取红葱及其提取物粉末，加50-70%こ醇加热回流提取，过滤，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30-60°C )振摇提取1-3次，合并石油醚液，水液备用。石油醚液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液点于硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90°C )_丙酮(7-12: 1-5)展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在100-110°C加热至斑点显色清晰。置365nm的紫外光灯下检视。
(2)取鉴别(I)项下水液，继续用三氯甲烷振摇提取1-3次，合并溶剂，水浴蒸干。残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液，点于硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90°C )_こ酸こ酷-丙酮-甲酸(3-8: 1-5: 0.2-0.8: 0.1-0.5)展开，取出，晾干。置365nm的紫外光灯下检视。红葱及其提取物优选的总黄酮紫外分光光度含量測定法包括如下:(I)对照品溶液的制备:取在120°C下烘干至恒重的芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每ImL含0.1mg芦丁的对照品溶液。(2)供试品溶液的制备:取红葱或红葱提取物约l_3g，精密称定，置具塞容器中，加入50-80%的こ醇溶液40-60ml，称定重量，加热回流l_2h，放冷，称重，溶剂补足重量。摇匀，取上清液l_5ml于蒸发皿中，加聚酰胺粉适量吸附，水浴挥去溶剤，井置于层析柱上。用甲苯洗脱，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，定容，作为供试品。(3)标准曲线的制备:精密量取一系列不同浓度的芦丁标准品溶液，置于比色皿中，在波长200-400nm内选择吸收波长，測定吸光度，并以吸光度(A)为纵坐标，溶液浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线。(4)精密量取供试品溶液，置于比色皿中測定吸光度值。根据标准曲线，计算红葱及(或)红葱提取物中总黄酮的含量。红葱及其提取物优选的总蒽醌紫外分光光度含量測定法包括如下:(I)对照品溶液的制备:取在120°C下烘干至恒重的大黄酸对照品适量，精密称定，加95%溶解，制成每ImL含0.614mg芦丁的对照品溶液。(2)供试品溶液的制备:取红葱或红葱提取物约10_15g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入50-80%的こ醇溶液80-100ml，，加热回流l_2h，过滤，定容到80_100ml，作为供试品。(3)标准曲线的制备:精密量取一系列不同浓度的大黄酸标准品溶液，加0.5%醋酸镁-甲醇显色，置于比色皿中，在波长200-700nm内选择吸收波长，測定吸光度，并以吸光度(A)为纵坐标，溶液浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。(4)精密量取供试品溶液，稀释18-22倍，加0.5%醋酸镁-甲醇显色，置于比色皿中測定吸光度值。根据标准曲线，计算红葱及(或)红葱提取物中总蒽醌含量。本发明相对现在技术的有益效果是:本发明从性状鉴别、薄层鉴别、含量測定等多个方面对红葱以及其提取物进行综合质量控制。本方法质量控制方法重现性好、检测成分低、精密度高、可操作性强，从而保证了红葱及其提取物的质量以及临床疗效。
图1是红葱药材2是红葱药材石油醚提取TLC3是红葱药材三氯甲烷提取TLC4是芦丁以及红葱提取物紫外扫描5是红葱提取物石油醚提取TLC6是红葱提取物三氯甲烷提取TLC图
具体实施例方式以下结合实施例对本发明进行详细说明。实施例1红葱药材性状以及薄层鉴别性状本品呈长圆状卵形或长椭圆形。鱗茎长卵圆形，鱗片肥厚，紫红色，无膜质包被。根柔嫩，红褐色。叶片卷曲，完整叶片展开后呈宽披针形或宽条形，长10-15cm，宽0.5-1.5cm，顶端渐尖，纵脉平行。气微，味淡。结果见说明书附图中的图1。鉴别(I)取红葱药材粉末1.5g，加60%こ醇溶液50ml，加热回流提取I小时，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 60°C)振摇提取3次，毎次20ml，合并石油醚液，水液备用，石油醚液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液3iU，点于硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_丙酮(9: 2)为展开剂(对槽放Iml甲酸)，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。置紫外光灯(365nm)下检视。结果见说明书附图中的图2。(2)取鉴别(I)项下水液，继续用三氯甲烷振摇提取3次，毎次20ml，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液3 yl，点于硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C )_こ酸こ酯-丙酮-甲酸(6: 3: 0.5: 0.1)为展开齐U，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。结果见说明书附图中的图3。实施例2红葱提取物薄层鉴别取红葱，加8倍量70%こ醇提取二次，每次I小时，合并提取液，滤过，滤液回收こ醇，浓缩至相对密度为1.30 1.40 (600C )的稠膏，真空干燥(60 70°C，-0.08mpa)，干膏粉碎成细粉,即得。本方法所述的质量控制方法包括:鉴别⑴取红葱提取物1.5g，研细，加60%こ醇溶液50ml，加热回流I小时，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 60°C)振摇提取3次，毎次20ml，合并石油醚液，水液备用，石油醚液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取红葱药材1.5g，カロ60%こ醇溶液50ml，同法制成红葱对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各3 u 1，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_丙酮(9: 2)为展开剂(对槽放Iml甲酸)，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同顔色的斑点。结果见说明书附图中的图5。(2)取⑴项下水液，继续用三氯甲烷振摇提取3次，毎次20ml，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取(I)项下红葱药材水液，同法制成红葱对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各3 ii I,点于同一娃胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C )-こ酸こ酯-丙酮-甲酸(6: 3: 0.5: 0.1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同顔色的斑点。结果见说明书附图中的图6。实施例3红葱药材含量测定1、仪器与试药(I)仪器:岛津UV-2550型紫外分光光度计。
(2)试药:试剂均为析纯。芦丁对照品(批号:10080-200707)购于中国药品生物制品检定所。2、实验条件(I)对照品溶液的制备精密称取在120°C干燥至恒重的芦丁对照品5mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得。(2)样品溶液的制备取红葱药材粉末约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60 %こ醇溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用60%こ醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取续滤液2ml，于蒸发皿中，加Ig聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去こ醇，然后转入层析柱。先用20ml甲苯洗脱，弃去甲苯液，后用甲醇洗脱，收集洗脱液，并用甲醇定容至25ml，摇匀，作为样品溶液。(3)最大吸收波长的选择取对照品溶液与样品溶液在200-700nm波长范围内扫描，结果二者在360±2nm处有最大吸收。结果见说明书附图中的图4。(4)线性关系考察精密吸取(I)项下对照品溶液(每Iml 含芦丁 0.1078mg)0.5、1、1.5、2、2.5,3ml,分别置于IOmL容量瓶中，分别加甲醇定容至刻度，摇匀。以甲醇为空白，按2010年版《中国药典》(一部)附录VA中紫外分光光度法，在360nm波长处测定吸收度。以吸收度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标做线性回归，得回归方程为=A = 0.02843-0.03108 (R2 = 0.99974)。结果表明，芦丁在5.39 3 2 .34 ug* mL-1浓度范围内与吸收度呈良好线性关系。(5)精密度试验取同一样品溶液，重复测定吸光度6次，其RSD = 0.42 %，说明方法精密度良好。结果见表I。表I精密度试验
权利要求
1.一种红葱及其提取物的质量检测方法，其特征在于:通过性状鉴别、薄层鉴别红葱不同极性提取物、测定红葱及其红葱提取物中总黄酮、总蒽醌含量的方法，控制红葱及其提取物的质量。
2.根据权利要求1所述的ー种红葱的质量检测方法，其特征在于包括下列的性状鉴另Ij:呈长圆状卵形或长椭圆形。鱗茎长卵圆形，鱗片肥厚，紫红色，无膜质包被。根柔嫩，红褐色。叶片卷曲，完整叶片展开后呈宽披针形或宽条形，长10-15cm，宽0.5-1.5cm,顶端渐尖，纵脉平行。气微，味淡。
3.根据权利要求1所述的ー种红葱及其提取物的质量检测方法，其特征在于包括下列的薄层鉴别方法: (1)取红葱及其提取物粉末，加30-90%こ醇加热回流，过滤，滤液蒸至无醇味，用石油醚振摇提取1-3次，合并石油醚液，水液备用。石油醚液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液点于硅胶G薄层板上，以比例为7 12: I 5的石油醚-丙酮展开，取出，晾干，喷以5-20%硫酸こ醇溶液，在90 120°C加热至斑点显色清晰。置365nm或254nm的紫外光灯下检视，可呈现9个明显的荧光斑点。
(2)取鉴别(I)项下水液，继续用有机溶剂振摇提取1-3次，合并溶剂，水浴蒸干。残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。吸取上述溶液，点于硅胶G薄层板上，以比例为3 8:1 5: 0.2 0.8: 0.1 0.5的石油醚-こ酸こ酷-丙酮-甲酸展开,取出，晾干。置365nm或254nm的紫外光灯下检视，可呈现6个明显的荧光斑点。
4.根据权利要求书2所述的ー种红葱及其提取物的质量检测方法，其特征在于所用的石油醚为60 90°C或30 60°C或90 120°C的石油醚。
5.根据权利要求书2所述的ー种红葱及其提取物的质量检测方法，其特征在于所用的有机溶剂选用三氯甲烷、ニ氯甲烷等低极性有机溶剤。
6.根据权利要求书I所述的ー种红葱及其提取物的质量检测方法，其特征在于采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，测定红葱及其提取物中总黄酮的含量。
其内容包括: 1)、对照品溶液的制备:取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成芦丁对照品溶液。
2)、供试品溶液的制备:取红葱或红葱提取物适量，精密称定，置具塞容器中，加入30-95 %的こ醇溶液20-100ml，称定重量，加热回流0.5_3h，放冷，称重，用溶剂补足重量。摇匀，取上清液l_5ml于蒸发皿中，加聚酰胺粉适量吸附，水浴挥去溶剤，井置于层析柱上。用甲苯洗脱，再用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，定容，作为供试品。
3)、标准曲线的制备:精密量取一系列不同浓度的芦丁标准品溶液，置于比色皿中，在波长200-700nm内选择吸收波长，測定吸光度，并以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。
4)、精密量取供试品溶液，置于比色皿中測定吸光度值。根据标准曲线，计算红葱及/或红葱提取物中总黄酮含量。
7.根据权利要求书I所述的ー种红葱及其提取物的质量检测方法，其特征在于采用紫外分光光度法，以大黄酸为对照品，测定红葱及其提取物中总蒽醌的含量。其内容包括: I)、对照品溶液的制备:取大黄酸对照品适量， 精密称定，加95%こ醇溶解，制成大黄酸对照品溶液。
2)、供试品溶液的制备:取红葱或红葱提取物适量，精密称定，置圆底烧瓶中，加入30-95%的こ醇溶液20-100ml，加热回流0.5_3h，放冷，过滤，用溶剂定容。
3)、标准曲线的制备:精密量取一系列不同浓度的大黄酸标准品溶液，加0.5%醋酸镁-甲醇显色，置于比色皿中，在波长200-700nm内选择吸收波长，測定吸光度，并以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。
4)、精密量取供试品溶液，稀释，加0.5%醋酸镁-甲醇显色，置于比色皿中測定吸光度值。根据标准曲线，计算红葱及/或红葱提取物中总蒽醌的含量。
8.根据权利要求书I所述的ー种红葱及其提取物的质量检测方法，其特征在于该方法中所述的红葱提取物包括:红葱提取后，所得的提取物按常规的提取物エ艺制成临床可接受的 任意剂型。
全文摘要
本发明公开了一种关于红葱及其提取物的质量检测方法，该方法包括红葱的性状鉴别、红葱及其提取物的薄层鉴别和总黄酮、总蒽醌的含量测定方法。具体是(1)性状红葱的性状、颜色、大小、气味等方面进行说明。(2)薄层鉴别对药材及其提取物的不同极性部位进行提取，用不同的展开体系对极性部位在硅胶板上展开。(3)含量测定包括对红葱及其提取物中总黄酮、总蒽醌的含量测定方法。采用紫外分光光度法，分别以芦丁、大黄酸为对照品，红葱或红葱提取物为供试品，测定供试品的含量。本发明的优点是方法简便快捷、检测方法针对性强；精密度、稳定性、重复性良好；准确度高。本发明可用于药材或提取物的质量控制。
文档编号G01N30/90GK103091445SQ20121030268
公开日2013年5月8日 申请日期2012年8月23日 优先权日2012年8月23日
发明者严超群, 王红星 申请人:广州白云华南生物科技有限公司