专利名称：一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板及试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板及试剂盒，属于免疫分析技术领域，用于含脂食品中的特异性辅解产物DiHT含量的检测。
背景技术：
食品辐照是一种非热力冷杀菌技术，它利用60Co、137Cs等核素衰变释放的Y射 线以及X射线等电离辐射线与物质作用产生的物理、化学和生物效应，由于辐照食品在减少食物传播疾病的发生率、降低农产品产后损耗、延长食品货架期等方面显示出优越性，已经被越来越多的国家所认可。辐照技术经过几十年的研究，作为一种高效、生态、安全的高新技术，对确保食品的卫生安全、减少产后损失、促进贸易与消费起着不可替代的作用。其应用已经被越来越多的国家所认可，据初步统计，全球已有38个国家和地区批准了 548种食品和调味品可用辐照处理(施培新.食品辐照加工原理与技术[M].北京中国农业科学技术出版社，2004. 1-2;陈殿华.中国辐照食品的产业化发展[J].核农学报.2004. 14(82) :81-88)。但是鉴于辐照食品的特殊性，CAC辐照食品的通用标准和很多国家的法规都规定对辐照食品要进行标识，CAC辐照食品的通用规则中规定，辐照食品的最大吸收剂量不应超过IOkGy,即使最终产品的辐照成分构成小于1%，也必须强制在标签上注明该产品已福照(Luckman, G. J. Food irradiation: regulatory aspects in theAsia and Pacific region[J]. Radiation Physics and Chemistry, 2002，63:285-288 ;Kim M. Morehouse. Food irradiation-US regulatory considerations[J]. RadiationPhysics and Chemistry, 2002，63:281-284)。至目前为止，CAC已经颁布了十种福照食品的鉴定方法，如热释光(TL)法、电子自旋共振(ESR)法和光释光(PSI)法、DNA彗星法等(Marc F. Desrosiers. Current status of the EPR method to detect irradiatedfood[J]. Applied Radiation and isotopes. 1996, 47:1621-1628 ；Ricardo A. Molins.Detection methods for irradiated foods[J]. Food irradiation, 2001，14:347-363 ;Bord, R. J. (Penn State University, University Park, PA) ; 0 ' Connor, R.E. . Who wants irradiated food Untangling complex public opinion[J]. FoodTechnology, 1989, 43:87-90 ；Henery Delince. Detection methods for irradiated foodsan-overview[J]. Radiation Physics and Chemistry, 2002，63:455-458 ;Humberto Cerda.Detection of irradiated frozen food with the DNA comet assay:interlaboratorytest [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 76, 3:435-442.)，为福照食品的监管提供技术支撑，但这些鉴定方法检测的时间长、前处理繁琐、需要昂贵的仪器设备和需要专业人员操作。随着辐照食品国际贸易的正常进行，各国对辐照食品鉴定技术的要求愈加迫切，然而各国间当前的食品辐照仍存在很多问题，加工和方法不尽相同，尤其是缺乏系统可行的辐照食品检测方法，在国际贸易中，尤其是海关和商检部门，需要鉴定的样品越来越多，急需建立简便、快速、特异、灵敏的鉴定方法。因而，研制一种灵敏度高，性能稳定，结构简单，使用方便，价格低廉，用于快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板及试剂盒是当前本领域的紧迫任务。
实用新型内容本实用新型根据上述领域的需求，提供一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板及试剂盒。本实用新型酶联免疫检测板及试剂盒采用酶联免疫方法，结合了免疫荧光法和放射免疫法技术，采用辐照食品特异性辐解产物DiHT衍生物制备多克隆抗体，对辐照含脂食品进行快速检测，精确度高，对操作技术要求较低并且所用检测时间较少，同时能实现多样本处理，在检测中具有很大的优势。
一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板，其特征在于，固相载体上包被有人工DiHT抗原，所述人工DiHT抗原为DiHT-COOH-BSA或DiHT-C00H_0VA。所述固相载体为96孔聚苯乙烯酶标板。所述盒内支架上设置有放置上述酶联免疫检测板的主凹槽，所述酶联检测板放置在主凹槽中。所述盒内支架上的主凹槽周围还设置有若干用于放置与检测相关的试剂瓶副凹槽，所述副凹槽中放置的试剂瓶分别为生物素标记的辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体管、浓缩辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体管、酶标二抗管、样本DNA提取液管、TMB底物显色剂管、H2O2显色剂管、浓缩洗涤液管、样品稀释液管、封闭液管、浓缩抗体管，浓缩复溶液管、底物缓冲液管、终止液管。本实用新型主要采用酶联免疫法(EIISA)来快速检测辐照食品特异性辅解产物DiHT。采用EIISA的技术主要有两个方面第一、特异性多克隆抗体的制备，第二、快速检测辐照食品特异性辅解产物DiHT的EIISA试剂盒的制备。欲制备辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体，首先要制备辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物人工抗原，所述人工抗原为辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物半抗原与牛血清蛋白的偶联产物，然后将偶联物免疫小鼠，即可得到辐照食品特异性辅解产物DiHT多克隆抗体。本实用新型试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板上预先包被有偶联抗原，在微孔中加入样本DNA提取物和辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与样本DNA提取物的DiHT含量成负相关，与标准曲线比较即可对待测辅解产物DiHT进行定性或定量分析。本试剂盒可同时检测辐照冷却肉、虾类、鱼类或其他含脂类食品，且与其它相关辐照食品无交叉反应。酶联免疫方法结合了免疫荧光法和放射免疫法技术，采用辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物制备多克隆抗体，对辐照含脂食品进行快速检测，精确度高，对操作技术要求较低并且所用检测时间较少，同时能实现多样本处理，在检测中有很大的优势。所述酶联免疫检测试剂盒，包括外盒、盒内支架，其特征在于，所述盒内支架上设置有放置酶联免疫检测板的主凹槽，所述酶联检测板放置在主凹槽中。主要是为了便于运输和保存，避免酶联检测板上包被的多克隆抗体脱落或被污染。为了进一步提供使用起来更便利的试剂盒，在所述盒内支架上的主凹槽周围还设置有若干副凹槽，便于放置与检测相关的试剂瓶，进一步完善了本实用新型试剂盒在辐照食品特异性辐解产物DiHT的快速检测。本实用新型试剂盒结构简单，主要试剂都采用了工作液形式，使用方便，成本低廉。用本实用新型试剂盒检测辐照食品特异性辐解产物DiHT，操作简便，简化了传统检测方法的步骤，缩短了检测时间，同时能实现多样本处理。采用本实用新型的试剂盒可以制作成板式酶标板以适应国内普及的检测设备，并且能保证检测灵敏度高，特异性高，精确度高，准确度高，稳定性好，结果准确。
图I为本实用新型快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板示意图 图2为放置有酶标板的快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测试剂盒内部结构俯视示意图图3为未放置酶标板的快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测试剂盒内部结构俯视示意图其中I-盒内支架，2-酶标板，3-反应孔，4-人工DiHT抗原，5-试剂管放置槽，6-外盒，7-主凹槽。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。本实用新型一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板，其特征在于，固相载体上包被有有人工DiHT抗原，所述人工DiHT抗原为DiHT-COOH-BSA或DiHT-COOH-OVA0所述固相载体优选为96孔聚苯乙烯酶标板。用于检测时，将检测样本与固定在聚苯乙烯酶标板2反应孔3中的抗辐照食品特异性辐解产物DiHT的衍生物多克隆抗体、蛋白载体与辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物偶联的抗原或抗辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物抗体接触和保温。将检测抗体与结合于抗辐照食品特异性辐解产物DiHT的衍生物多克隆抗体上的检测样本接触和保温，检测抗体为生物素标记的辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体。最后用酶标二抗特异性地捕捉结合于检测抗体的生物素，并用TMB底物显色剂进行显色，从而测定结合于捕捉抗体上的辐照食品特异性辅解产物DiHT水平。本实用新型还提供酶联免疫检测试剂盒，包括外盒6、盒内支架1，其特征在于，所述盒内支架I上设置有放置权利要求I或2所述的酶联免疫检测板2的主凹槽7，所述酶联免疫检测板2放置在主凹槽7中。主要是为了便于运输和保存，避免酶联检测板2上包被的多克隆抗体脱落或被污染。本实用新型进一步优选，在盒内支架I上的主凹槽7周围还设置有若干用于放置与检测相关的试剂瓶的副凹槽5，所述副凹槽5中放置的试剂瓶分别为生物素标记的辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体管、浓缩辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体管、酶标二抗管、样本DNA提取液管、TMB底物显色剂管、H2O2显色剂管、浓缩洗涤液管、样品稀释液管、封闭液管、浓缩抗体管，浓缩复溶液管、底物缓冲液管、终止液管。使用起来更加便利，进一步完善了本实用新型试剂盒在辐照食品特异性辐解产物DiHT的快速检测的功能。实施例I.本实用新型试剂盒的制备方法本实用新型主要采用酶联免疫法(EIISA)来快速检 测含脂食品中的特异性辅解产物DiHT。采用EIISA的技术主要有两个方面第一、特异性多克隆抗体的制备，第二、快速检测含脂食品中的特异性辅解产物DiHT的EIISA试剂盒的制备。含脂食品中的特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体的制备，首先要制备含脂食品中的特异性辅解产物DiHT的衍生物人工抗原，然后将偶联物免疫小鼠，得到二氢脱氧胸腺嘧啶多克隆抗体。其中人工抗原为含脂食品中的特异性辅解产物DiHT的衍生物半抗原与牛血清蛋白的采用混合酸酐进行偶联的产物(DiHT-COOH-BSA)，其中半抗原的结构为
权利要求1.一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板，其特征在于，固相载体上包被有人工DiHT抗原，所述人工DiHT抗原为DiHT-COOH-BSA或DiHT-C00H_0VA。
2.根据权利要求I所述一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板，其特征在于，所述固相载体为96孔聚苯乙烯酶标板。
3.一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测试剂盒，包括外盒、盒内支架，其特征在于，所述盒内支架上设置有放置权利要求I或2所述的酶联免疫检测板的主凹槽，所述酶联检测板放置在主凹槽中。
4.根据权利要求I所述的快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述盒内支架上的主凹槽周围还设置有若干用于放置与检测相关的试剂瓶副凹槽，所述副凹槽中放置的试剂瓶分别为生物素标记的辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体管、浓缩辐照食品特异性辅解产物DiHT的衍生物多克隆抗体管、酶标二抗管、样本DNA提取液管、TMB底物显色剂管、H2O2显色剂管、浓缩洗涤液管、样品稀 释液管、封闭液管、浓缩抗体管，浓缩复溶液管、底物缓冲液管、终止液管。
专利摘要本实用新型一种快速检测辐照食品特异性辐解产物DiHT的酶联免疫检测板及试剂盒，属于免疫分析技术领域，用于辐照食品特异性辐解产物DiHT含量的检测。本实用新型酶联免疫检测板，其特征在于，固相载体上包被有人工DiHT抗原，所述人工DiHT抗原为DiHT-COOH-BSA或DiHT-COOH-OVA。本实用新型酶联免疫检测试剂盒包括外盒、盒内支架，其特征在于，所述盒内支架上设置有放置上述的酶联免疫检测板的主凹槽，所述酶联检测板放置在主凹槽中。所述主凹槽周围还设置有若干副凹槽，用于放置与检测相关的试剂瓶。采用本实用新型的试剂盒可以制作成板式酶标板以适应国内普及的检测设备，并且能保证检测灵敏度高，稳定性好，结果准确。
文档编号G01N33/543GK202502097SQ201220060869
公开日2012年10月24日 申请日期2012年2月23日 优先权日2012年1月16日
发明者李淑荣, 李秉超, 潘家荣, 王志东, 王志伟, 王磊, 睢珂, 高美须 申请人:中国农业科学院农产品加工研究所, 中国计量学院