罗汉果止咳糖浆的质量检测方法
【专利摘要】本发明提供一种罗汉果止咳糖浆的质量检测方法，其是一种方法简化、省时节能的、可操作性强的质量控制方法，十分有利于工业化生产的应用。
【专利说明】罗汉果止咳糖浆的质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药的质量控制，具体涉及罗汉果止咳糖浆的质量控制方法。
【背景技术】
[0002]罗汉果止咳糖浆收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第二十册177页，标准代号为WS3-B-3882-98，具祛痰止咳的功能，用于感冒咳嗽及支气管炎。罗汉果止咳糖浆在临床上应用多年，取得比较令人满意的疗效。罗汉果止咳糖浆处方由中药材罗汉果46g、枇杷叶176g、桑白皮12g、白前18g、百部30g、桔梗12g、薄荷油0.2g组成，按以下工艺制成:以上七味，除薄荷油外，其余罗汉果等六味加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次I小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至约200ml，放冷，加入4倍量乙醇，搅拌，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖400g，加水煮沸使溶解，滤过，滤液与上述浓缩液混合，加入枸橼酸Ig及适量的薄荷油乙醇溶液、防腐剂和香精，再加水至1000ml,搅勻，即得。处方中罗汉果为葫芦科植物罗汉果Siraiti grosvenorii (Swin gle)C.Jeffrey ex A.Μ.Lu et Z.Y.Zhang的干燥果实；枇杷叶为蔷薇科植物枇杷Er1botryajaponica(Thunb.) I, indl.的干燥叶；桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮；白前为萝蘑科植物柳叶白前Cynanchum stauntonii (Decne.) Schltr.ex Levl.或芫花叶白前Cyn, anchum glaucescens (Decne.) Hand.-Mazz.的干燥根莖和根；百部为百部科植物直立百部 Stemona sessilifolia(Miq.)Miq.蔓生百部 Stemona japonica(Bl.)Miq.或对叶百部Stemona tuberosa Lour.的干燥块根；桔梗为桔梗科植物桔梗Platycodongrandiflorus(Jacq.)A.DC.的干燥根；薄荷油本品为无色或淡黄色的澄清液体，系唇形科植物薄荷Menthahaplocalyx Briq.的新鲜莖和叶经水蒸气蒸懼、冷冻、部分脱脑加工提取的挥发油，是薄荷的主要成分之一。
[0003]罗汉果止咳糖浆原质量标准仅用常规检查对产品质量进行控制，故需对其质量控制方法进行研究，制定确实可行的方法保证产品质量和临床疗效。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种方法简化、省时节能的、可操作性强的罗汉果止咳糖浆的质量控制方法，十分有利于工业化生产的应用。
[0005]本发明以如下技术方案解决上述技术问题:
[0006]罗汉果止咳糖浆的质量控制方法包括以下步骤中的一种或多种:
[0007]1、用薄层色谱法对药物中的罗汉果进行定性鉴别:
[0008]取本品50ml，用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水洗液，分取正丁醇层，蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取罗汉果对照药材lg，加水50ml，加热回流I小时，放冷，用棉花滤过，取滤液，自“用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4?8μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0009]2、用薄层色谱法对药物中的白前进行定性鉴别:
[0010]取本品50ml，用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水洗液，分取正丁醇层，蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取白前对照药材lg，加水50ml，加热回流I小时，放冷，用棉花滤过，取滤液，自“用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次”起，同法制成白前对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4?8μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(5: 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0011]3、用高效液相色谱法测定该药物中罗汉果特征成分罗汉果苷V的含量:
[0012]照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。
[0013]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(52: 48)为流动相；用蒸发光散射检测器检测。理论塔板数按罗汉果苷V峰计算应不低于 2000。
[0014]对照品溶液的制备取罗汉果苷V对照品适量，精密称定，加流动相制成每Iml分别含0.lmg、0.4mg的溶液，即得。
[0015]供试品溶液的制备精密量取本品15ml，通过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高1cm)，以水10ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇10ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀乙醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用流动相溶解，转移至1ml量瓶中，力口流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，即得。
[0016]测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20μ 1，供试品溶液5?20 μ I，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
[0017]本发明罗汉果止咳糖浆的质量控制方法，通过大量试验研究对比，是一种方法简化、省时节能的、可操作性强的罗汉果止咳糖浆的质量控制方法，十分有利于工业化生产的应用。
【具体实施方式】
[0018]本发明的质量控制方法是经过大量的试验筛选得到的最佳方案，以下试验研究为本发明的优选过程。
[0019]一、罗汉果的薄层色谱鉴别
[0020]供试品、对照药材溶液的制备同前文
【发明内容】
(以下简称“前文”)，阴性对照溶液是按处方比例称取除罗汉果外其余药味，按制法制成阴性制剂，再按前文供试品溶液的方法制备。展开及检视条件同前文。三批样品(5310001、5310002、5310003)试验结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的绿色斑点。薄层色谱分离效果好，斑点清晰，比移值适中(Rf = 0.27)，重现性和专属性好，阴性对照无干扰。
[0021]葫芦素烷三萜类皂苷是罗汉果的主要有效成分之一，约占干果的3%，试验中对以下提取纯化方法进行了对比:
[0022]①取本品20ml，用正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；
[0023]②取本品40ml，用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次30ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；
[0024]③取本品20ml，用正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加于DlOl型大孔吸附树脂柱(内径0.9cm,高15cm)上,用40%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液,蒸干,残洛加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；
[0025]④取③中用40%乙醇洗脱后的柱子继续用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；
[0026]⑤取本品50ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，取水液，用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去洗涤液，分取正丁醇层，蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。
[0027]结果方法①③杂质较多，背景深，方法④未能将特征斑点成分提取出来，方法②⑤与前文收载方法效果相当，因前文收载方法能与白前鉴别用同一供试液，故采用。
[0028]试用了以下展开系统和检视方法:
[0029]①正丁醇-乙醇-水(8: 2: 3)，喷以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；
[0030]②三氯甲烷-甲醇-水(13: 7: 2)的下层溶液，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视；
[0031]③正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上层溶液，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。
[0032]结果方法①③供试品色谱中背景较深，方法②重现性不好，特征斑点不够明显，而前文收载方法分离效果较好，特征斑点清晰，故采用。
[0033]二、白前的薄层色谱鉴别
[0034]供试品、对照药材溶液的制备同前文，阴性对照溶液是按处方比例称取除白前外其余药味，按制法制成阴性制剂，再按前文供试品溶液的方法制备。三批样品(5310001、5310002,5310003)试验结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄绿色荧光斑点(Rf = 0.55)。薄层色谱分离效果好，斑点清晰圆整，比移值适中，重现性和专属性好，阴性对照无干扰，故收入前文。
[0035]试验中还对以下提取方法进行了研究:
[0036]①取本品40ml，用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次30ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液(同上述罗汉果项下提取方法②)；
[0037]②取本品20ml，用氢氧化钠试液调节pH值至10，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；
[0038]③取本品30ml，加入0.1 %盐酸溶液20ml，摇匀，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。
[0039]结果方法③特征斑点不够明显，方法①②与前文收载方法相当，因前文收载方法能与罗汉果鉴别用同一供试液，故采用。
[0040]展开系统试用了:
[0041]①用1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板，正己烷-三氯甲烷-甲醇(5: 5: 0.2)；
[0042]②硅胶G薄层板，环己烷-乙酸乙酯-丙酮(5:1: 2)。
[0043]结果方法①比移动值偏低，边缘效应大，方法②与前文收载方法相当，但前文收载方法为二元展开剂，较简便，故采用。
[0044]三、罗汉果特征成分罗汉果苷V的含量测定方法研究
[0045]I仪器、试药与样品
[0046]仪器:日本岛津LC-1OAtvp高效液相色谱仪，威玛龙色谱工作站；美国奥泰ELSD2000ES蒸发光散射检测器；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(HypersilG0LD4.6X250mm)，菲罗门C184.0X3.0mm保护柱；梅特勒-托利多AB265-S电子天平；阿修罗AXLC1820超纯水机。
[0047]试药:罗汉果苷V化学对照品(含量测定用，批号:111754-200601，中国食品药品检定研究院提供)，纯度经检查符合含量测定用化学对照品的技术要求，含量为100%，纯度检查详见后；甲醇(色谱纯)，水(自制超纯水)，AB-8型大孔吸附树脂(天津市光复精细化工研究所)。
[0048]样品:罗汉果止咳糖浆(批号:5310001、5310002、5310003、101201)及不含罗汉果药材的阴性对照样品，广西灵峰药业有限公司。
[0049]2供试品溶液制备方法选择
[0050]2.1样品溶液的制备
[0051]对照品溶液的制备精密称取罗汉果苷V对照品9.92mg，置1ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀(0.992mg/ml);精密量取1.0ml,3.5ml分别置1ml量瓶，加流动相至刻度，摇匀，即得(99.2 μ g/ml、347.2 μ g/ml)。
[0052]供试品溶液的制备精密量取本品15ml，通过已处理好的AB_8型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高1cm)，以水10ml洗脱，再用20%乙醇10ml洗脱，弃去两次洗脱液，继续用稀乙醇10ml洗脱，收集稀乙醇洗脱液，蒸干，残渣用流动相溶解，转移至1ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，即得。
[0053]阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是按处方比例称取除罗汉果外其余辅料，按制法制成罗汉果阴性样品，再取此阴性样品按上述“供试品溶液的制备”方法制备不含罗汉果的阴性样品溶液。
[0054]在供试品溶液制备方法研究中，对水洗脱量、20%乙醇洗脱量进行了考察。结果以10ml水及100ml20%乙醇洗脱除杂为佳。
[0055]2.2色谱条件与系统适用性试验
[0056]色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Hypersil G0LD4.6X250mm)，菲罗门C184.0X3.0mm保护柱；流动相:甲醇-水(52: 48)，流速:lml/min ;漂移管温度:100°C，空气流速:2.5L/min ;柱温:室温。
[0057]分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20 μ 1，供试品溶液及不含罗汉果的阴性样品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，绘制色谱图。此条件下罗汉果苷V与其它组分达到基线分离，分离度R > 1.5，理论塔板数按罗汉果苷V计算大于2000，罗汉果苷V保留时间约为12分钟，见表1。阴性样品溶液在色谱相应位置无吸收峰，可见阴性无干扰。
[0058]表1理论塔板数、分离度、保留时间数据
[0059]
【权利要求】
1.一种具有祛痰止咳作用的罗汉果止咳糖浆的质量检测方法，其中该糖浆由中药材罗汉果46g、枇杷叶176g、桑白皮12g、白前18g、百部30g、桔梗12g、薄荷油0.2g组成,按以下工艺制成:以上七味，除薄荷油外，其余罗汉果等六味加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次I小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约200ml，放冷，加入4倍量乙醇，搅拌，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖400g，加水煮沸使溶解，滤过，滤液与上述浓缩液混合，加入枸橼酸Ig及适量的薄荷油乙醇溶液、防腐剂和香精，再加水至1000ml，搅匀，即得。该药物的质量检测方法其特征在于:该方法包括以下全部或部分内容:罗汉果的薄层色谱定性鉴别、白前的薄层色谱定性鉴别、罗汉果特征成分罗汉果苷V的含量测定。 a、罗汉果的薄层色谱定性鉴别: 取本品50ml，用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水洗液，分取正丁醇层，蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取罗汉果对照药材lg，加水50ml，加热回流I小时，放冷，用棉花滤过，取滤液，自“用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4?8μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丙酮-冰乙酸-水(4: I: 0.1: 4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 b、白前的薄层色谱定性鉴别: 取本品50ml，用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水洗液，分取正丁醇层，蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取白前对照药材lg，加水50ml，加热回流I小时，放冷，用棉花滤过，取滤液，自“用氨试液饱和的正丁醇振摇提取2次”起，同法制成白前对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4?8μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(5: 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 C、罗汉果特征成分罗汉果苷V的含量测定: 照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(52: 48)为流动相；用蒸发光散射检测器检测。理论塔板数按罗汉果苷V峰计算应不低于 2000。 对照品溶液的制备取罗汉果苷V对照品适量，精密称定，加流动相制成每Irnl分别含.0.lmg、0.4mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备精密量取本品15ml，通过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高10cm)，以水10ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇10ml洗脱，弃去洗脱液，继用稀乙醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用流动相溶解，转移至1ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，即得。 测定法分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各20 μ 1，供试品溶液5?20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
【文档编号】G01N30/90GK104034838SQ201310072531
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2013年3月7日 优先权日:2013年3月7日
【发明者】廖展苇, 陈晓军, 丘伟业, 黄园, 周凯华, 邓昶, 阮碧芳, 梁霞, 梁月钊 申请人:广西灵峰药业有限公司