一种海洋生物及其制品的指纹鉴定方法
【专利摘要】本发明公开了一种海洋生物及其制品指纹鉴定方法，包括以下步骤：将收集到的海洋生物及其制品以及饵料的样品盛放于无稳定同位素干扰的器具中冷冻干燥后，用无稳定同位素干扰的器具研磨成粉末状；进行同位素检测：结果计算：通过所得结果建立不同海域不同种类海洋生物及制品稳定同位素指纹库。本发明通过结果建立稳定同位素指纹库，可以用来直接比对不同海域海洋生物及制品稳定同位素组成，进而判别生物种类。利用稳定同位素技术分析特定海域海洋生物及制品与其它海域之间的差异性，通过比较同一物种在不同区域的δ13C和δ15N的值，建立不同海域海洋生物及制品稳定同位素指纹库。本发明有助于检测不同海域海珍品及制品的差异性。
【专利说明】一种海洋生物及其制品的指纹鉴定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种海洋生物及其制品的鉴定方法，特别是一种海洋生物及其制品的指纹鉴定方法。
【背景技术】
[0002]近年来，由于盲目引进以及对引进品种的背景不清楚等原因，导致大连海珍品当地种孵化率和成活率降低、生长速度减慢、抗逆性变差等种质退化现象不断发生；再有许多商家利用海珍品形状、颜色等外观相似的特点，用其它劣质的品种来冒充大连海珍品进行谋取利益，这极大地损害了大连特色生物及制品的形象。目前对海洋生物的分类主要是针对蛋白质(酶)和DNA的多态性而进行的，利用DNA序列和遗传信息来判别海洋生物种类，尤其是近年来分子生物技术突飞猛进的发展，一系列分子遗传标记相继涌现，使人们在DNA水平得到更丰富的遗传信息，但无论是蛋白质标记还是分子标记，这种方法过程比较复杂，而且周期较长，花费也较高。
[0003]不同生物体由于食物来源的差异以及同位素分馏效应的影响而具有不同的同位素比值，可以用来判定不同区域生物体内某一组织器官的同位素组成，进而分析不同生物体之间稳定同位素组成的差异。稳定同位素技术以稳定、周期短且花费较少等优点，在海洋生物及制品的鉴定方面能够发挥重要作用，所以建立海洋生物及制品的稳定同位素指纹库势在必行。
【发明内容】
[0004]为解决现有技术存在的上述问题，本发明要设计一种检测过程简单、检测周期短、检测费用低的海洋生物及其制品指纹鉴定方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明的技术方案如下:一种海洋生物及其制品指纹鉴定方法，包括以下步骤:
[0006]A、前处理:将收集到的海洋生物及其制品以及饵料的样品盛放于无稳定同位素干扰的器具中冷冻干燥后，用无稳定同位素干扰的器具研磨成粉末状；
[0007]所述无稳定同位素干扰的器具为由玻璃材料制的器具；所述冷冻干燥温度为-60?_50°C,冷冻干燥时间以样品完全干燥为止；所述粉末的目数为过80目的孔径筛；
[0008]B、同位素检测:取出样品，用锡杯包好后经过自动采样器送到元素分析仪中，将样品中碳元素和氮元素转化为纯净的CO2气体和N2气体后，再经过稀释仪稀释净化，最后进入Delta V Advantage质谱仪进行检测,得到碳稳定同位素S13C和氮稳定同位素δ 15N的值，并建立海洋生物及制品稳定同位素指纹库和应用系统；
[0009]所述稳定同位素为碳和氮稳定同位素；碳和氮稳定同位素组成用于海洋生物及制品稳定同位素指纹库和应用系统的建立；所述的指纹库为不同海域海洋生物及制品的碳稳定同位素和氮稳定同位素指纹；
[0010]C、结果计算:[0011]国际公认的稳定碳和氮同位素的自然丰度表示为:
[0012]δ X= ([R样品/R标准]-1) XlO3
[0013]其中X代表13C或15N ;R代表13CZ12C或15Ν/14Ν ； δ 13C值是相对于PDB标准的自然丰度，δ 15N值是相对空气中氮气的丰度；分析精度δ 13C < 0.10%。，δ 15N < 0.20%。;稳定同位素丰度即为稳定同位素值；
[0014]D、测定结果:
[0015]按照步骤C的计算公式，由电脑对质谱仪的谱图结果按照既定程序进行计算，所得为碳、氮同位素组成的测定结果，通过所得结果建立不同海域不同种类海洋生物及制品稳定同位素指纹库。
[0016]本发明步骤B中各仪器的工作参数如下:
[0017]元素分析仪:氧化炉温度为950°C，还原炉温度为650°C，进样器氦气吹扫流量为300ml/min,氧气流量为180ml/min,参考气流量为250ml/min ；
[0018]ConFloIV型的稀释仪:氦气压力为0.6bar ；
[0019]Delta V Advantage 质谱仪:分析柱温度为 45°C ;用 USGS24 即 δ 13CPDB=-16.00%标定CO2钢瓶，用IAEANl即δ 15Nto=0.4%。标定N2钢瓶；用标定的钢瓶作为标准。
[0020]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
[0021 ] 1、本发明通过海洋生物样品烘干、研磨成粉,直接进行稳定同位素组成分析,样品烘干时间为24h，每个样品稳定同位素检测为lOmin，每个样品检测消耗约RMB 5?10。通过结果建立稳定同位素指纹库，可以用来直接比对不同海域海洋生物及制品稳定同位素组成，进而判别生物种类，不同生物体由于食物来源的差异以及同位素分馏效应的影响而具有不同的同位素比值，可以用来判定不同区域生物体内某一组织器官的同位素组成，进而分析不同生物体之间稳定同位素组成的差异。利用稳定同位素技术分析特定海域海洋生物及制品与其它海域之间的差异性，通过比较同一物种在不同区域的S 13C和δ 15N的值，建立不同海域海洋生物及制品稳定同位素指纹库。
[0022]2、本发明选用无稳定同位素干扰的玻璃研钵或刀，对海洋生物样品进行切割和磨碎，并以冷冻干燥代替60°C烘干的方法，以减少空气中稳定同位素与样品中相同稳定同位素的交换。本发明具有稳定、周期短且花费较少等优势，保证了监测信息的准确性和丰富程度，有助于检测不同海域海珍品及制品的差异性。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]本发明仅有附图1张，其中:
[0024]图1是本发明的流程图。
【具体实施方式】
[0025]下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。
[0026]将2011年7月于渤海营口海域和黄海黑石礁海域采集到的文蛤样品(分别为参考样品I和参考样品2)带回实验室，超纯水清洗干净，用玻璃刀片取所述样品肌肉组织，盛放于玻璃器皿后置于冷冻干燥机在_50°C下干燥，干燥完成后，将所述参考样品I和参考样品2放入玻璃研钵磨碎，使粉末过80目孔径筛，完成所述参考样品I和参考2的稳定同位素检测时的前处理操作。
[0027]将上述处理完毕的参考样品I和参考样品2，按照下述方法测定其中碳、氮稳定同位素组成。
[0028]1、测定程序:[0029]取2mg样品，锡杯包好后经过自动采样器送到元素分析仪(Flash EA1112型)中，在此样品中碳元素和氮元素转化为纯净的C02气体和N2气体后，再经过型号为ConFloIV型的稀释仪，最后进入Delta V Advantage质谱仪进行检测。
[0030]具体工作参数如下:
[0031]元素分析仪:氧化炉温度为950°C，还原炉温度为650°C，进样器氦气吹扫流量为300ml/min,氧气流量为180ml/min,参考气流量为250ml/min。
[0032]ConFloIV型的稀释仪:氦气压力为0.6bar。
[0033]Delta V Advantage 质谱仪:分析柱温度为 45°C ;用 USGS24 ( δ 13CPDB=-16.00%)标定CO2钢瓶，用IAEANl ( δ 15Nto=0.4%。)标定N2钢瓶。用标定的钢瓶作为标准。
[0034]2、结果计算:
[0035]国际公认的稳定碳、氮同位素的自然丰度表示为:
[0036]δ X= ( [R样品/R标准]_1) XlO
[0037]其中X代表13C或15N。R代表13C/12C或15Ν/14Ν。δ 13C值是相对于PDB标准的自然丰度，S 15N值是相对空气中氮气的丰度。分析精度S13C <0.10%。，δ 15N <0.20%。。
[0038]3、测定结果:
[0039]按照步骤2的计算公式，由电脑对质谱仪的谱图结果按照既定程序进行计算，所得碳、氮同位素组成的测定结果如表1所示。
[0040]表1、参考样碳、氮稳定同位素组成测定结果
[0041]
【权利要求】
1.一种海洋生物及其制品指纹鉴定方法，其特征在于:包括以下步骤: A、前处理:将收集到的海洋生物及其制品以及饵料的样品盛放于无稳定同位素干扰的器具中冷冻干燥后，用无稳定同位素干扰的器具研磨成粉末状； 所述无稳定同位素干扰的器具为由玻璃材料制的器具；所述冷冻干燥温度为-60?_50°C,冷冻干燥时间以样品完全干燥为止；所述粉末的目数为过80目的孔径筛； B、同位素检测:取出样品，用锡杯包好后经过自动采样器送到元素分析仪中，将样品中碳元素和氮元素转化为纯净的CO2气体和N2气体后，再经过稀释仪稀释净化，最后进入Delta V Advantage质谱仪进行检测,得到碳稳定同位素S13C和氮稳定同位素δ 15N的值，并建立海洋生物及制品稳定同位素指纹库和应用系统； 所述稳定同位素为碳和氮稳定同位素；碳和氮稳定同位素组成用于海洋生物及制品稳定同位素指纹库和应用系统的建立；所述的指纹库为不同海域海洋生物及制品的碳稳定同位素和氮稳定同位素指纹； C、结果计算: 国际公认的稳定碳和氮同位素的自然丰度表示为: δ X= ([R样品/R标准]-1) XlO3 其中X代表13C或15N ；R代表13C/12C或1W14N ； δ 13C值是相对于PDB标准的自然丰度，δ 15N值是相对空气中氮气的丰度；分析精度δ 13C < 0.10%。，δ 15N < 0.20%。；稳定同位素丰度即为稳定同位素值； D、测定结果: 按照步骤C的计算公式，由电脑对质谱仪的谱图结果按照既定程序进行计算，所得为碳、氮同位素组成的测定结果，通过所得结果建立不同海域不同种类海洋生物及制品稳定同位素指纹库。
2.根据权利要求1所述的一种海洋生物及其制品指纹鉴定方法，其特征在于:步骤B中各仪器的工作参数如下: 元素分析仪:氧化炉温度为950°C，还原炉温度为650°C，进样器氦气吹扫流量为300ml/min,氧气流量为180ml/min,参考气流量为250ml/min ； ConFloIV型的稀释仪:氦气压力为0.6bar ； Delta V Advantage 质谱仪:分析柱温度为 45°C ;用 USGS24 即 δ 13CPDB=-16.00%。标定CO2钢瓶，用IAEANl即δ 15Nto=0.4%。标定N2钢瓶；用标定的钢瓶作为标准。
【文档编号】G01N27/62GK103472124SQ201310388947
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年8月30日 优先权日:2013年8月30日
【发明者】刘瑀, 刘保占, 李颖 申请人:大连海事大学