专利名称：赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试纸卡，尤其涉及一种赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡，应用免疫学原理，通过胶体金的免疫反应再借助免疫层析技术达到检测赛庚啶目的，应用于快速检测饲料中的赛庚啶。
背景技术：
赛庚啶在临床上常用作人用抗过敏药，对抗体内组胺对血管、支气管平滑肌的作用，从而消除过敏症状。赛庚啶还能对抗缓激肤和多巴胺的效应，也有一定的中枢镇静作用。由于赛庚啶具有增进食欲、中枢神经镇静的作用，近年发现在饲料产品中添加赛庚啶。但赛庚啶对人体健康具有一定的危害性，对儿童的作用更为明显，高浓度可直接引发昏迷、呼吸急促、全身无力等中毒症状，严重者则直接导致儿童死亡。因此农业部于2002年就明令禁止在饲料中添加赛庚啶。检测饲料中残留的赛庚啶的常用方法有高效毛细管电泳法、液相色谱-串联质谱法及高效液相色谱法。这几种方法灵敏度较高，检测周期长，需要专业的实验室和专业的技术人员，且由于其仪器昂贵，操作程序较繁琐，一般基层生产单位无法普及使用，因此适用性不强。
实用新型内容本实用新型要解决的技术问题是提供一种赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡，用来检测饲料和猪尿中赛庚啶的添加情况，是现今敏感度、特异性最好的赛庚啶残留筛查方法，而且不需要专门设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，适合基层生产现场的普及使用，该试纸卡具有操作简便、测试快速、反应灵敏、价格低廉、特异性强的特点。为解决上述技术问题，本实用新型提供一种赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡，所述试纸卡包括样品处理垫、聚酯纤维膜、吸水纸、层析膜和底板；在层析膜的起始端至末端依次叠合有样品处理垫，金标记抗赛庚啶抗体聚酯纤维膜，包被赛庚啶抗原的检测线，质控线，以及吸水纸；所述层析膜粘贴在底板上。进一步地，所述试纸卡还包括上外壳和下外壳，所述层析膜放置在上外壳和下外壳之间。进一步地，所述层析膜粘贴在底板中间。进一步地，所述上外壳上设有标签、层析窗口、加样孔；所述加样孔位于样品处理垫的位置上方；所述层析窗口位于检测线和质控线的位置上方。进一步地，所述聚酯纤维膜与样品处理垫的一端叠合。进一步地，所述层析膜与样品处理垫、聚酯纤维膜和吸水纸叠合处覆有具有粘性的材料，将层析膜与样品处理垫、聚酯纤维膜和吸水纸粘合在一起。本实用新型是通过以下技术方案和工作原理实现的。抗赛庚啶抗体标记在指示剂颗粒上，标记物附着在聚酯纤维膜上；将赛庚啶完全抗原包被并固定层析膜的检测线(T)上，层析膜粘贴在底板上，始端粘贴样品处理垫以处理样品，末端粘贴吸水纸助层析完成。将试纸条镶嵌入塑卡中，组成试剂盒。检测时，由于被测样本中赛庚啶抗原和复溶的金标记抗体发生了免疫反应，此时混合液层析到检测区上时包被抗原无法竞争到标记抗体，检测区内没有出现检测线，即阳性，相反如被测样本没有赛庚啶抗原，则标记的抗体层析到检测区时和包被膜上的抗原结合形成紫红线，即阴性。为了证明试剂有效性和易判读，分别在质控线(C)包被羊抗兔IgG为质控线，所以不管结果怎样质控线C始终出现。与现有技术相比，本实用新型的有益效果在于:本实用新型的赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡与仪器检测同样具有高灵敏度和高特异性，但不需要专门设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，检测成本低廉，适合饲料厂的普及使用。用免疫层析法生产赛庚啶快速检测试纸卡，用来检测饲料中赛庚啶的添加情况，是现今敏感度、特异性最好的赛庚啶添加筛查方法，本方法具有操作简便、测试快速、反应灵敏度高、价格低廉、特异性强、假阳性、假阴性率低的特点，无需特殊仪器及专业技术人员，检测快速，检测结果易于观察，检测费用低廉，贮存和运输方便等优点。十分适合各类检验机构及生产企业在现场快速筛查赛庚啶的违法添加情况。
图1是本实用新型的实施例的结构示意图。图2是本实用新型的实施例的检测结果示意图；其中，图2A代表检测结果为阴性的示意图；图2B代表检测结果为阳性的示意图；图2C代表检测结果为无效的示意图。图中附图标记说明如下:1.上外壳、2.下外壳、3.底板、4.标签、5.层析窗口、6.加样孔、7.吸水纸、8.样品处理垫、9.金标记抗赛庚啶抗体聚酯纤维膜、10.检测线、11.质控线、12.NC膜(即硝酸纤维素膜，nitrocellulose filter membrane, SP层析膜)。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型作进一步详细说明。实施例赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡在图1中，将NC膜12 (即层析膜)黏贴在底板3中间，在NC膜12上包被检测线10和质控线11，NC膜12的起始端粘贴样品处理垫8，依次再粘贴金标记抗赛庚啶抗体聚酯纤维膜9，NC膜12的末端粘贴吸水纸7。将粘贴完整的NC膜12放置在上外壳1，下外壳2之间盖紧。上外壳I上还设有标签4、层析窗口 5、加样孔6。加样孔6位于样品处理垫8的位置上方，用于加样；层析窗口 5位于检测线10和质控线11的位置上方，用于观察检测线10和质控线11的情况；标签4位于上外壳I的任意位置(例如，本实施例中如图1所示，标签4位于吸水纸7的位置上方)，用于标记该试纸条的用途等。本实用新型赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡的制备及检测方法，包括如下步骤:1.将一定浓度的赛庚唳偶联结合物(即赛庚唳抗原)和羊抗兔IgG分别包被于硝酸纤维素膜(即NC膜12)上的检测线T (即检测线10)和质控线C (即质控线11)的位置。例如，将赛庚唳单克隆抗体稀释至浓度lmg/ml,将羊抗鼠IgG稀释至浓度2mg/ml,将两种溶液划线于NC膜上的检测区和质控区，形成检测线T (即检测线10)和质控线C (即质控线11)。2.金标记抗赛庚啶抗体聚酯纤维膜的制备用柠檬酸三钠还原四氯化金(即氯金酸)制备粒径40 60nm胶体金，调节pH后每毫升胶体金和14 μ g抗赛庚啶抗体混合进行标记并在286nm下测0D。将OD稀释到2，并到聚酯纤维膜上烘干，聚酯纤维膜上即附着金标记抗赛庚啶抗体颗粒。3.将包被完成的硝酸纤维素膜(NC膜12)、样品处理垫8、金标记抗赛庚啶抗体聚酯纤维膜9、吸水纸7 —起依次粘贴在底板3上。并切成3mm的试纸条。4.将试纸条装配在试剂外壳底内(即装配在下外壳2内)，合上试剂外壳盖(即合上上外壳I)组装成赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡。5.检测步骤:a.饲料样本:称取一定量的饲料，用稀释液进行溶解，离心取上清液，即得待检样品。猪尿样本:直接取猪尿作为检测样本，若浑浊，则离心取上清液。b.取出试剂盒，平放在桌面上。c.用吸管吸取混合均匀的待检样品，滴加2-3滴于加样孔6中，并开始计时。d.在5分钟内读取结果。e.结果判定:图2中，阳性结果为质控线C位置出现红色线条，而检测线T位置不显示红色线条时，说明被检样品中有赛庚啶，判为阳性(见图2B);阴性结果为质控线C位置出现红色线条，检测线T位置也出现红色线条，说明被检样品中没有赛庚啶存在，判为阴性(见图2A);如果检测线T位置和质控线C位置均不显示红色线条，则判为检测无效(见图2C)。`7.性能指标灵敏度:应用本实施例，赛庚啶浓度在0.lng/ml以上为阳性。使用目的:本品用于筛查赛庚啶在用于饲料和猪尿的现场快速筛查，保障猪肉安全。
权利要求1.一种赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡，其特征在于，所述试纸卡包括样品处理垫、聚酯纤维膜、吸水纸、层析膜和底板；在层析膜的起始端至末端依次叠合有样品处理垫，金标记抗赛庚啶抗体聚酯纤维膜，包被赛庚啶抗原的检测线，质控线，以及吸水纸；所述层析膜粘贴在底板上。
2.如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述试纸卡还包括上外壳和下外壳，所述层析膜放置在上外壳和下外壳之间。
3.如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述层析膜粘贴在底板中间。
4.如权利要求2所述的试纸卡，其特征在于，所述上外壳上设有标签、层析窗口、加样孔；所述加样孔位于样品处理垫的位置上方；所述层析窗口位于检测线和质控线的位置上方。
5.如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述聚酯纤维膜与样品处理垫的一端叠入口 ο
6.如权利要求1或5所述的试纸卡，其特征在于，所述层析膜与样品处理垫、聚酯纤维膜和吸水纸叠合处覆有具有粘性的材料，将层析膜与样品处理垫、聚酯纤维膜和吸水纸粘合在一 起。
专利摘要本实用新型公开了一种赛庚啶免疫层析快速检测试纸卡，所述试纸卡包括样品处理垫、聚酯纤维膜、吸水纸、层析膜和底板；在层析膜的起始端至末端依次叠合有样品处理垫，金标记抗赛庚啶抗体聚酯纤维膜，包被赛庚啶抗原的检测线，质控线，以及吸水纸；所述层析膜粘贴在底板上。本实用新型不需要专门设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，适合养殖业和饲料厂的普及使用，该试纸卡具有操作简便、测试快速、反应灵敏、价格低廉、特异性强的特点。
文档编号G01N33/558GK203148947SQ201320090828
公开日2013年8月21日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者周中人, 史小月, 顾琳 申请人:上海快灵生物科技有限公司