分离循环肿瘤细胞的方法与流程

文档序号:15798918发布日期:2018-11-02 21:17阅读:来源:国知局

技术特征:

1.至少一种俘获结合蛋白在制备用于从患有前列腺癌的患者中分离、俘获或富集循环肿瘤细胞的方法的试剂盒中的用途,所述方法包括:

a) 从所述患者中获得生物样品;

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白,其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体,并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体;

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种;

d) 通过对样品施加外部磁场,从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体,从而分离、俘获或富集循环肿瘤细胞;和

e) 证实循环肿瘤细胞,其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测,其中如果DAPI染色为阳性,β-联蛋白表达为阳性,CD45表达为阴性,CD31表达为阴性,则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

2.至少一种俘获结合蛋白在制备用于测定或鉴定患有前列腺癌的患者的循环肿瘤细胞的方法的试剂盒中的用途,所述方法包括:

a) 从所述患者中获得生物样品;

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白,其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体,并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体;

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种;

d) 通过对样品施加外部磁场,从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体,从而测定或鉴定循环肿瘤细胞;和

e) 证实循环肿瘤细胞,其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测,其中如果DAPI染色为阳性,β-联蛋白表达为阳性,CD45表达为阴性,CD31表达为阴性,则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

3.至少一种俘获结合蛋白在制备用于从患有前列腺癌的患者中分离或俘获完整细胞的方法的试剂盒中的用途,其中所述细胞为β-联蛋白阳性、DAPI阳性和CD45阴性,所述方法包括:

a) 从所述患者中获得生物样品;

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白,其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体,并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体;

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与完整细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-完整细胞复合体的一段时间,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种;

d) 通过对样品施加外部磁场,从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-完整细胞复合体,从而分离或俘获完整细胞;和

e) 证实循环肿瘤细胞,其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测,其中如果DAPI染色为阳性,β-联蛋白表达为阳性,CD45表达为阴性,CD31表达为阴性,则所述循环肿瘤细胞证实并且具有间充质表型。

4.权利要求1-3中任一项的用途,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白。

5.权利要求1-3中任一项的用途,所述方法还包括测定至少一个前列腺癌特异性基因组事件的存在与否。

6.权利要求5的用途,其中所述至少一个前列腺癌特异性基因组事件选自雄激素受体扩增、磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)丧失、跨膜蛋白酶丝氨酸2 (TMPRSS2)基因和ETS相关(ERG)基因的基因融合,及其组合。

7.权利要求5的用途,其中所述测定步骤通过荧光原位杂交(FISH)进行。

8.权利要求1-3中任一项的用途,其中所述生物样品包括来自生物体的组织样品或流体样品。

9.权利要求1-3中任一项的用途,其中所述生物样品包括血液。

10.权利要求1-3中任一项的用途,其中所述固相是微粒。

11.权利要求10的用途,其中所述微粒是磁性或顺磁性的。

12.至少一种俘获结合蛋白在制备用于测定和治疗受试者的前列腺癌的方法的试剂盒中的用途,所述方法包括:

a) 从所述受试者中获得生物样品;

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白,其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体,并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体;

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种;

d) 通过对样品施加外部磁场,从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体;

e) 测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平;

f) 将循环肿瘤细胞的水平与循环肿瘤细胞的参比水平进行比较;

g) 如果循环肿瘤细胞的水平高于循环肿瘤细胞的参比水平,检测受试者的前列腺癌;和

h) 将抗前列腺癌疗法给予鉴定为患有前列腺癌的受试者;

其中测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平包括证实循环肿瘤细胞,其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测,其中如果DAPI染色为阳性,β-联蛋白表达为阳性,CD45表达为阴性,CD31表达为阴性,则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

13.至少一种俘获结合蛋白在制备用于监测进行治疗性治疗的受试者的前列腺癌进展的方法的试剂盒中的用途,所述方法包括:

a) 从所述受试者中获得生物样品;

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白,其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体,并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体;

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种;

d) 通过对样品施加外部磁场,从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体;

e) 测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平;

f) 使循环肿瘤细胞的水平与受试者的前列腺癌进展关联,其中如果与来自受试者的较早生物样品中的循环肿瘤细胞的水平相比循环肿瘤细胞的水平较高,则受试者鉴定为显示前列腺癌进展;和

g) 将抗前列腺癌疗法给予鉴定为显示前列腺癌进展的受试者;

其中测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平包括证实循环肿瘤细胞,其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测,其中如果DAPI染色为阳性,β-联蛋白表达为阳性,CD45表达为阴性,CD31表达为阴性,则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

14.至少一种俘获结合蛋白在制备用于测定受试者的前列腺癌预后的方法的试剂盒中的用途,所述方法包括:

a) 从所述受试者中获得生物样品;

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白,其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体,并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体;

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种;

d) 通过对样品施加外部磁场,从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体;

e) 测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平;

f) 将循环肿瘤细胞的水平与循环肿瘤细胞的参比水平进行比较;

g) 测定受试者的癌症预后,其中如果循环肿瘤细胞的水平高于循环肿瘤细胞的参比水平,则受试者鉴定为患有前列腺癌;和

h) 将抗前列腺癌疗法给予鉴定为患有前列腺癌的受试者;

其中测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平包括证实循环肿瘤细胞,其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测,其中如果DAPI染色为阳性,β-联蛋白表达为阳性,CD45表达为阴性,CD31表达为阴性,则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

15.至少一种俘获结合蛋白在制备用于预测患有前列腺癌的受试者对疗程的响应性的方法的试剂盒中的用途,所述方法包括:

a) 从所述受试者中获得生物样品;

b) 获得所述至少一种俘获结合蛋白,其中俘获结合蛋白与固相连接形成固相-俘获结合蛋白复合体,并且其中所述俘获结合蛋白为上皮-间充质转化(EMT)生物标志物俘获抗体;

c) 使生物样品与固相-俘获结合蛋白复合体接触足以使固相-俘获结合蛋白复合体与循环肿瘤细胞上的至少一种EMT生物标志物结合以形成固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体的一段时间,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白或N-钙黏着蛋白的至少一种;

d) 通过对样品施加外部磁场,从样品和未结合的磁性颗粒-俘获结合蛋白复合体中分离固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体;

e) 测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平;和

f) 将循环肿瘤细胞的水平与循环肿瘤细胞的参比水平进行比较;

其中测定固相-俘获结合蛋白-循环肿瘤细胞复合体中循环肿瘤细胞的水平包括证实循环肿瘤细胞,其中证实循环肿瘤细胞包括DAPI染色、β-联蛋白检测、CD45检测和CD31检测,其中如果DAPI染色为阳性,β-联蛋白表达为阳性,CD45表达为阴性,CD31表达为阴性,则所述循环肿瘤细胞得到证实并且具有间充质表型。

16.权利要求12-15中任一项的用途,其中所述EMT生物标志物是OB-钙黏着蛋白。

17.权利要求12-15中任一项的用途,所述方法还包括测定至少一个前列腺癌特异性基因组事件的存在与否。

18.权利要求17的用途,其中所述至少一个前列腺癌特异性基因组事件选自雄激素受体扩增、磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)丧失、跨膜蛋白酶丝氨酸2 (TMPRSS2)和ETS相关基因(ERG)的基因融合,及其组合。

19.权利要求17的用途,其中测定至少一个前列腺癌特异性基因组事件的存在与否通过荧光原位杂交(FISH)进行。

20.权利要求12-15中任一项的用途,其中所述生物样品包括来自生物体的组织样品或流体样品。

21.权利要求12-15中任一项的用途,其中所述生物样品包括血液。

22.权利要求12-15中任一项的用途,其中所述固相是微粒。

23.权利要求22的用途,其中所述微粒是磁性或顺磁性的。

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