一种检测烟丝和卷烟烟气中nnal和nna的方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测烟丝或卷烟烟气中NNAL和NNA的方法。配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液，采用内标法分别建立NNAL和NNA的标准溶液工作曲线；然后向样品中加入NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室温震荡，取上清液，进行HPLC-MS-MS检测。该方法具有检测限低、稳定性好、快速准确等优点，检测结果受主观判断因素影响小，易于推广应用。
【专利说明】—种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于烟草化学检验【技术领域】，具体涉及一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA含量的方法。
【背景技术】
[0002]烟草特有的亚硝胺(TSNAs)是烟草内源性生物碱与硝酸盐和亚硝酸盐通过亚硝化作用而产生的，只存在于烟草、烟草制品和卷烟烟气中。近年来，随着吸烟与健康问题受到人们的广泛关注，国内外对于烟气中各种有害化学成分的研究也日益深入。据报道，目前已经从烟叶或卷烟烟气中鉴定出8种烟草特有亚硝胺，包括:N-亚硝基降烟碱(NNN)、4-(甲基亚硝胺基)-1_ (3-吡啶基)-1- 丁酮(NNK)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)、N-亚硝基新烟碱(NAT)、4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1_ 丁醇(NNAL)、4-(甲基亚硝胺基)_4_ (3-吡啶基)-1_ 丁醇(iso-NNAL)、4-(甲基亚硝胺基)-4-(3-吡啶基)丁酸(iso-NNAC)以及4-(甲基亚硝胺基)-4_ (3-吡啶基)-1-丁醛(NNA)。发现较早且研究最深入的4种烟草特有亚硝胺是NNN、NNK, NAB和NAT，其分析检测方法也较成熟。目前，NNAL主要被作为NNK的生物标志物进行研究，而iso_NNAL、NNA和iso-NNAC的检测和研究极少。1987年,Brunnemann等才在鼻烟和卷烟烟丝中鉴定出iso-NNAL，但在卷烟烟气中没有发现该物质的存在。随着人们对烟草中特有亚硝胺含量的重视，烟草行业以及公共卫生行业等迫切需要建立一种能准确检测烟草或烟气中NNAL和NNA的方法。
[0003]但由于卷烟烟丝和每支卷烟烟气中烟草特有亚硝胺的含量很低，加之烟草萃取物和烟气基质复杂，所以烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的检测非常困难，国内外许多相关行业都无法开展或未开展卷烟烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的检测工作。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，运用高效液相色谱-质谱-质谱联用方法，实现对NNAL和NNA含量的快速准确测定。
[0005]本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
[0006]除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为重量百分数。
[0007]一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，其特征在于:首先配制含有NNAL.NNA和NNA-甲基_d3的混合标准溶液，采用内标法分别建立NNAL和NNA的标准溶液工作曲线；然后将检测样品置于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，进行HPLC-MS-MS检测。
[0008]该方法具体包括以下步骤:
[0009]( I)标准曲线建立:
[0010]以乙腈为溶剂，分别配制NNAL、NNA和NNA-甲基_d3标准品单标溶液；以乙腈为溶齐U，配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基_d3的混合标准溶液；以HPLC-MS-MS色谱图中NNA的浓度与NNA-甲基-d3的浓度之比为横坐标，以色谱图中NNA的定量离子对峰面积与NNA-甲基-d3的定量离子对峰面积之比为纵坐标，建立NNA的标准溶液工作曲线；以同样方法建立NNAL的标准溶液工作曲线；
[0011](2)样品处理
[0012]①烟丝样品处理:准确称取烟丝于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用；
[0013]②烟气样品处理:烟支和剑桥滤片(CFP)在温度22°C、湿度60%的条件下平衡；使用前，每个剑桥滤片用抗坏血酸甲醇溶液处理，并在通风橱中风干后备用；用滤片捕集卷烟的主流烟气总粒相物进行检测；在捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片中加入的NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用；
[0014](3) HPLC-MS-MS 检测条件
[0015]液相条件:用C18色谱柱和甲酸铵水溶液-甲酸铵乙腈溶液对样品进行分离；
[0016]质谱条件:用正离子模式(ESI+)进行多反应检测(MRM)，分析物特征离子对如表I ;
[0017]表1分析物特征离子对
[0018]
【权利要求】
1.一种检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，其特征在于:首先配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合标准溶液，采用内标法分别建立NNAL和NNA的标准溶液工作曲线；然后将检测样品置于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，进行HPLC-MS-MS检测。
2.根据权利要求1所述的检测烟丝和卷烟烟气中NNAL和NNA的方法，其特征在于该方法具体包括以下步骤: (1)标准曲线建立: 以乙腈为溶剂，分别配制NNAL、NNA和NNA-甲基-d3标准品单标溶液；以乙腈为溶剂，配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基_d3的混合标准溶液；以HPLC-MS-MS色谱图中NNA的浓度与NNA-甲基-d3的浓度之比为横坐标，以色谱图中NNA的定量离子对峰面积与NNA-甲基-d3的定量离子对峰面积之比为纵坐标，建立NNA的标准溶液工作曲线；以同样方法建立NNAL的标准溶液工作曲线； (2)样品处理 ①烟丝样品处理:准确称取烟丝于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸铵水溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用； ②烟气样品处理:烟支和剑桥滤片在温度22°C、湿度60%的条件下平衡；使用前，每个剑桥滤片用抗坏血酸甲醇溶液处理，并在通风橱中风干后备用；用滤片捕集卷烟的主流烟气总粒相物进行检测；在捕集有主流烟气总粒相物的剑桥滤片中加入的NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室温震荡，取上清液，过水相滤膜，待用； (3)HPLC-MS-MS 检测条件 液相条件:用C18色谱柱和甲酸铵水溶液-甲酸铵乙腈溶液对样品进行分离；` 质谱条件:用正离子模式进行多反应检测，分析物特征离子对如表1 ; 表1分析物特征离子对
I分子量I定量离子对(m/z) I辅助定性离子对(m/z)
NNAL209.1 210 — 180210 — 149
NNA207.1 208 — 178208 — 206
NNAL-甲基-d3210.1 211 — 181 (4)实际检测:使用优化后的液相色谱分离条件，对处理好的烟丝样品溶液或烟气样品溶液进行HPLC-MS-MS检测，使用标准溶液工作曲线计算烟丝样品溶液或烟气样品溶液中的NNAL和NNA浓度，进而换算得到烟丝样品或烟气样品中NNAL和NNA的含量。
【文档编号】G01N30/88GK103776944SQ201410013061
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年1月13日 优先权日:2014年1月13日
【发明者】段焰青, 夏建军, 者为, 王文元, 蒋举兴, 党立志, 陈兴 申请人:红云红河烟草(集团)有限责任公司