一种富集与检测低浓度蒽醌类有效成分的方法
【专利摘要】本发明提供了一种富集与检测低浓度蒽醌类有效成分的方法，该方法以四氧化三铁磁性石墨烯(rGO@Fe3O4)作为吸附剂，对低浓度的待检测样液进行萃取吸附，然后用解吸剂洗脱，洗脱液干燥后所得固体用溶解剂溶解，得到富集样液，富集样液用液质联用仪检测，通过标准曲线和富集倍数定量，检测得到低浓度的待检测样液中蒽醌类有效成分的浓度。本发明方法可用于检测大黄药材稀释液以及生物样本(大鼠尿样)中的低浓度蒽醌类有效成分。
【专利说明】一种富集与检测低浓度蒽醌类有效成分的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物提取及检测领域。它涉及一种中药及其生物样本的提取及检 测方法，具体地说，它涉及由四氧化三铁磁性石墨烯（rG0@Fe304)作为吸附剂，用来提取低 浓度中药大黄及其生物样本（鼠尿）样品中蒽醌类有效成分并检测其含量的新方法。
【背景技术】
[0002] 在天然产物生物样本的检测中，样品预处理在整个实验流程中至关重要。通过样 品的预处理，目标分子从复杂的生物基质中得以提取，可以排除生物基质对分析结果的干 扰。更为重要的是，在样品预处理的富集环节，可通过一系列技术手段将目标分子浓缩，提 高了实验的灵敏度，从而实现降低检测限这一目的。
[0003] 目前，中药生物样本的分析方法层出不穷。在其提取富集环节，主要以液-液 萃取和固相萃取为代表，此外还包括蛋白沉淀、微透析等。而固相萃取（Solid-Phase Extraction，简称SPE)，作为近年发展起来一种样品预处理技术，与传统的液-液萃取法相 t匕，分析物的回收率更高，分析物与干扰组分的分离更有效，操作简单、省时、省力。广泛地 应用在医药、食品、环境、商检、化工等领域。当然，柱形固相萃取也有其局限性：截面积小、 流量低、易堵塞、易产生缝隙降低提取效率、重复性差等。
[0004] 鉴于上述局限，诸多建立在液-液萃取和固相萃取基础上的新型提取富集方法， 也如雨后春笋般应运而生。包括分散液相微萃取、单滴液相微萃取、中空纤维液相微萃取、 基质分散固相萃取、分子印迹固相萃取、磁性固相萃取等。相比传统的液-液萃取和固相萃 取，这类新型富集方法具有的优势也更为明显，例如使用有机溶剂量少、富集倍数明显、富 集时间短等。其中具有代表性的就有磁性固相萃取（MSPE)。
[0005] 所谓磁性固相萃取（MSPE)是近年来国内外研究的一个热点领域。与常规的固相 萃取（SPE)柱填料相比，MSPE是一种以磁性或可磁化的材料作吸附剂基质的一种固相萃取 技术，在MSPE过程中，磁性吸附剂不直接填充到吸附柱中，而是被添加到样品的溶液或悬 浮液中，将目标分析物吸附到分散的磁性吸附剂表面，在外部磁场作用下，只需使用少量的 吸附剂和较短的平衡时间就能实现萃取分离。
[0006] 磁性固相萃取的核心因素是磁性吸附剂。吸附剂种类的选择将直接影响实验效 果。近年来的磁性纳米材料也是日新月异。目前选作磁性固相萃取的吸附剂通常包括：磁 性碳材料、磁性分子印迹材料、金属-有机框架材料等。四氧化三铁磁性石墨烯（rG0@Fe 304) 这种纳米材料更是受到诸多专家学者的青睐。该材料同时具备了氧化石墨烯和四氧化三铁 的优异特性：既具备了氧化石墨烯的多孔、比表面积大等优越的吸附特性，又具备了四氧化 三铁的磁性。这就使得该材料在诸多领域都有广泛的应用。
[0007] 大黄（Radixetrhizoma Rhei)为寥科植物掌叶大黄（Rheum Palmatum L)，唐古 特大黄（Rheum tanguticum Maxim, ex Balf)或药用大黄（Rheum officinale Bail 1)的干 燥根和根茎。大黄在中药复方中应用相当广泛，有"泻热通畅、凉血解毒、攻积导滞、利胆退 黄、逐瘀通经"之功效，《神农本草经》称大黄"主下瘀血、血闭、寒热、破症瘕积聚、留饮、宿 食、荡涤肠胃、通利水谷、调中化食、安和五藏"。随着人们对大黄的研究日益加深，各类活 性成分相继被发现。大黄中的有效成分有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、有机酸、留醇、鞣质类、 色原酮类等多种成分，起主要疗效的是大黄中含有的蒽醌类成分。具有代表性的蒽醌类成 分主要有芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。在诸多学者对大黄开展的研 究中，以磁性固相萃取作为预处理，并且结合超高效快液相-四级杆飞行时间液质联用仪 (UHPLC-Q-TOF/MS)作为其检测手段的案例尚未见报道。
[0008] 截止目前，以四氧化三铁磁性石墨烯（rG0@Fe304)作为吸附剂在中药及其生物体 液的磁性固相萃取方面应用偏少。该方法在中药或其生物样本的提取、富集环节尚未见报 道，对于中药大黄这一研究领域更是一片空白。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于寻求一种比以往更加快速灵敏的提取检测技术，使其应用于大 黄药材稀释液及其生物样品的提取检测。发明要点在于将磁性纳米材料制备成为纳米分散 液，并应用在磁性固相萃取领域，巧妙地结合了磁性富集技术和固相萃取技术。磁性纳米材 料分散液作为吸附剂与大黄药材或其生物体液中的目标分子吸附结合，使得目标分子快速 提取、富集。最终可以达到360-924倍的富集效果。
[0010] 本发明具体提供了一种以四氧化三铁磁性石墨烯（rG0@Fe304)作为吸附剂，通过 萃取吸附等步骤，富集复杂体系中目标分子的方法。可用于提取检测低浓度的大黄药材提 取液或生物样本（大鼠尿样）中的蒽醌类有效成分。
[0011] 本发明采用的技术方案是：
[0012] 一种富集与检测低浓度蒽醌类有效成分的方法，所述蒽醌类有效成分为芦荟大 黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚中的一种或两种以上，所述方法包括以下步骤： (1)反应容器中加入含有低浓度蒽醌类有效成分的待检测样品溶液，并加入四氧化三铁磁 性石墨烯（rG0@Fe304)配成混合液，使混合液中四氧化三铁磁性石墨烯的浓度为0. 0125mg/ mL-0. 4000mg/mL，混合液的pH值为4-8,震荡富集1?lOmin后，静置，将磁铁置于反应容器 底部吸附固体，弃去液体，残留固体烘干后用解吸剂进行洗脱，所述解吸剂为甲醇、含体积 分数1 %乙酸的乙醇、含体积分数1 %乙酸的乙腈、含体积分数1 %乙酸的乙酸乙酯或含体 积分数1?4%乙酸的甲醇，收集洗脱液、洗脱液干燥、所得固体用溶解剂溶解，得到富集样 液，所述溶解剂为甲醇，富集样液离心，取上清液用液质联用仪（UHPLC-Q-TOF/MS)检测，得 到富集样液中蒽醌类有效成分的总离子流色谱图和各成分的提取离子色谱图；
[0013] (2)以芦荟大黄素的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照富集样液同样条件 用液质联用仪检测，获得芦荟大黄素对照品的提取离子色谱图，以芦荟大黄素对照品溶液 的提取离子色谱图中色谱峰的峰面积为横坐标，以芦荟大黄素对照品的进样量为纵坐标制 作芦荟大黄素标准曲线，按同样方法制作大黄酸标准曲线、大黄素标准曲线、大黄酚标准曲 线、大黄素甲醚标准曲线；根据富集样液的各成分的提取离子色谱图中色谱峰的峰面积及 各成分的标准曲线，计算得到富集样液中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚 的含量，
[0014] ⑶计算富集倍数：
[0015] 取芦荟大黄素对照品，配制成浓度为0. 25μ g/mL的芦荟大黄素稀释液，按照步骤 (1)的相同的方法条件，加入四氧化三铁磁性石墨烯进行富集检测，得到芦荟大黄素稀释液 富集后的样液的提取离子色谱图，并将芦荟大黄素稀释液以相同条件用液质联用仪检测， 得到芦荟大黄素稀释液的提取离子色谱图，芦荟大黄素稀释液富集后的样液的提取离子色 谱图中芦荟大黄素色谱峰的峰面积与芦荟大黄素稀释液的提取离子色谱图中芦荟大黄素 色谱峰的峰面积之比，即为芦荟大黄素的富集倍数；
[0016] 按照上述方法分别计算大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的富集倍数；
[0017] (4)根据芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚各自的富集倍数，富集 样液中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量除以各自的富集倍数，换算 得到待检测样品溶液中蒽醌类有效成分的含量。
[0018] 本发明所述四氧化三铁磁性石墨烯（rG0@Fe304)可于市场上直接购买获得，本发 明实施例中所用的四氧化三铁磁性石墨烯购于Nanoinnova Technologies公司。
[0019] 所述低浓度蒽醌类有效成分是指待检测样品溶液中的蒽醌类有效成分中至少有 一种成分的浓度在〇. 25 μ g/mL以下，用常规液质联用仪直接进样难以检测得到。具体的， 所述低浓度蒽醌类有效成分是指芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚中至少 一种成分的浓度在〇. 25 μ g/mL以下时，常规液质联用仪直接进样就难以检测定量了。本发 明方法的检测下限一般为0. 5pg/mL。
[0020] 所述步骤（1)中，所述混合液中四氧化三铁磁性石墨烯的浓度为〇.〇125mg/ mL-0. 4000mg/mL，优选 0· 0250 ?0· 0500mg/mL，最优选 0· 0500mg/mL。
[0021 ] 所述混合液中调pH值为4-8,优选为5?6,最优选pH值为6。一般可用磷酸或氢 氧化钠调节pH值。
[0022] 所述震荡富集的时间为l-10min，优选为5?lOmin，最优选5min。
[0023] 所述解吸剂优选为甲醇、含体积分数1%乙酸的乙醇、含体积分数1%乙酸的乙 腈、含体积分数1%乙酸的乙酸乙酯或含体积分数1?4%乙酸的甲醇，最优选含体积分数 1 %乙酸的甲醇。
[0024] 所述解吸剂的体积用量优选与待检测样品溶液的体积比为1 :100?1000,最优选 1 :400。
[0025] 所述解吸剂洗脱的次数优选1-5次，更优选洗脱3次。洗脱时可用超声、涡旋等方 法促进洗脱完全，优选第一次洗脱时超声l〇s，第二次第三次洗脱时涡旋20s。
[0026] 所述溶解剂的体积用量优选与待检测样品溶液的体积比为1 :1000?8000,更优 选为 1 :4000。
[0027] 所述将磁铁置于反应容器底部吸附固体，一般将磁铁置于反应容器底部吸附5? 10min，保证吸附完全。
[0028] 所述残留固体烘干一般可于70°C烘干。
[0029] 所述洗脱液干燥一般于80°C干燥。
[0030] 所述所得固体用溶解剂溶解，溶解时可用超声方式辅助加快固体溶解。
[0031] 所述富集样液的离心优选在13000rpmin离心5min。
[0032] 进一步，本发明方法的步骤（1)优选按以下步骤操作：
[0033] 反应容器中加入含有蒽醌类有效成分的待检测样品溶液，并加入四氧化三铁磁性 石墨烯（rG0@Fe 304)配成混合液，使混合液中四氧化三铁磁性石墨烯的浓度为0. 05000mg/ mL，混合液的pH值为6,震荡富集5min后，静置，将磁铁置于反应容器底部吸附固体，弃去 液体，残留固体烘干后用解吸剂进行洗脱，所述解吸剂为含体积分数1 %乙酸的甲醇，洗脱 3次，收集洗脱液、洗脱液干燥、所得固体用溶解剂溶解，得到富集样液，所述溶解剂为甲醇， 富集样液离心，取上清液用液质联用仪（UHPLC-Q-TOF/MS)检测，得到富集样液中蒽醌类有 效成分的总离子流色谱图和各成分的提取离子色谱图；所述解吸剂的体积用量与待检测样 品溶液的体积比为1 :400 ;所述溶解剂的体积用量与待检测样品溶液的体积比为1 :4000 ; [0034] 所述的富集效果，通过超高效快速液相-四级杆飞行时间液质联用仪 (UHPLC-Q-TOF/MS)测定大黄药材或其生物样本中有效成分的含量来表征该富集方法的有 效性。
[0035] 本发明方法可检测低浓度的大黄药材提取液或生物样本（如大鼠尿样）中的蒽醌 类有效成分，检测限可达芦荟大黄素〇· 2573pg/ml，大黄酸0· 2315pg/ml，大黄素0· 0028pg/ ml，大黄酚0· 5230pg/ml，大黄素甲醚0· 5899pg/ml，对低浓度样品具有很好的富集效果。
[0036] 本发明的优点在于：
[0037] 1.本发明方法将氧化石墨烯磁性材料用于磁性固相萃取，并且首次应用于大黄药 材及其生物样本（鼠尿样品）的检测，具有独创性。目前大黄药材的生物体液检测手段， 大多以常规的液相为主，以超高效快速液相-四级杆飞行时间液质联用仪（UHPLC-Q-T0F/ MS)作为检测器的案例较为少见，本发明采取超高效快速液相-四级杆飞行时间液质联用 仪（UHPLC-Q-TOF/MS)作为检测器，不仅具备了超高效液相的快速、稳定、重现性良好的特 点，更是具备了质谱灵敏度高、精确的分子量可用来定性、二级碎片再次可用来定性目标分 子的特点，这就大大提高了本发明的灵敏度。本发明的富集倍数可达360-924倍。
[0038] 2.本方法在富集环节充分结合了纳米材料的吸附特性以及磁性材料的磁性，使得 在外加磁场下，吸附剂能迅速汇聚，同时保证了吸附程度，达到吸附效果高、时间短的特点。
[0039] 3.本方法应用范围广泛，不论是大黄药材稀释液还是富含生物基质的大黄鼠尿样 本，均可采用本方法进行检测，且本发明所述的测定大黄药材和鼠尿样本这两个方面的研 究属首例。
[0040] 4.本发明所涉及的试剂，以及四氧化三铁磁性石墨烯（rG0@Fe30 4)，均具备一系列 优异突出的的物理化学性质：化学稳定性和热稳定性良好，对人体无毒、不污染环境，不易 燃。且本发明中起至关重要的因素--四氧化三铁磁性石墨烯（rG0@Fe 304)，可反复进行试 验使用，节约了实验成本，提高了经济效益。
[0041] 5.本发明提供的实验富集倍数高，耗时短，且操作环境安全，操作步骤简洁明了， 操作人员无需额外培训即可进行试验操作。
[0042] 即本发明提供了一种新的提取检测方法，该方法利用磁性固相萃取技术，能便捷 高效地测定大黄药材及其生物样本（鼠尿）中的低浓度蒽醌类有效成分。
【专利附图】
【附图说明】
[0043] 图1为本发明检测方法的工艺流程图。
[0044] 图2为考察不同吸附剂浓度下的富集效果折线图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄 中不同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲 醚。
[0045] 图3为考察不同富集时间下的富集效果折线图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄中 不同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲醚。
[0046] 图4为考察不同稀释液pH下的富集效果柱状图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄中 不同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲醚。
[0047] 图5为考察不同种类解吸剂下的富集效果折线图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄 中不同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲 醚。A、B、C、D、E代表不同的解吸剂，分别为：A :含1%乙酸的乙醇；B :含1%乙酸的乙腈； C :含1 %乙酸的乙酸乙酯；D :含1 %乙酸的甲醇；E :含1 %乙酸的正己烷。
[0048] 图6为考察不同体积溶解液的富集效果折线图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄中 不同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲醚。
[0049] 图7为考察解吸剂中不同乙酸含量的富集效果柱状图。图中，1、2、3、4、5分别代表 大黄中不同的有效成分，分别为：1 :芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄 素甲醚。
[0050] 图8为考察不同洗脱次数的富集效果折线图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄中不 同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲醚。
[0051] 图9为大黄对照品的液相色谱-质谱图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄中不同的 有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲醚。A为总 离子色谱图，B、C、D为提取离子色谱图。
[0052] 图10为大黄药材富集样液的液相色谱-质谱图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄中 不同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲醚。 A为总离子色谱图，B、C、D为提取离子色谱图。
[0053] 图11为大黄鼠尿富集样液的液相色谱-质谱图。图中，1、2、3、4、5分别代表大黄中 不同的有效成分，分别为:芦荟大黄素、2 :大黄酸、3 :大黄素、4 :大黄酚、5 :大黄素甲醚。 A为总离子色谱图，B、C、D为提取离子色谱图。
【具体实施方式】
[0054] 通过以下实例来对本发明所提供的检测方法进行更为详细的描述。由于其应用范 围广，故具体实施方案也多，下面将结合几个实例的讨论对本发明的内容作进一步的阐述。
[0055] 大黄对照品溶液的制备方法参照药典2010版，具体步骤为：分别取芦荟大黄素、 大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的对照品适量，精密称定，将固体混合至同一个棕色量 瓶中，加甲醇制成每lmL含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均为50μ g的 溶液，即得。
[0056] 实施例1
[0057] 1配制200mL芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚浓度均为 0. 25 μ g/mL的对照品稀释液，pH = 6,并加入不同量的rG0@Fe304纳米颗粒，得到不同吸附 剂浓度的混合液，具体配制方法为：取6个干净200mL具塞锥形瓶，编号1、2、3、4、5、6,均加 入50 μ g/mL对照品混合液lmL, 1号加入2mg/mL的rG0@Fe304纳米颗粒分散液40mL和pH =6的水159mL，2号加入2mg/mL的rG0@Fe304纳米颗粒分散液20mL和pH = 6的水179mL， 3号加入2mg/mL的rG0@Fe304纳米颗粒分散液10mL和pH = 6的水189mL，4号加入2mg/mL 的rG0@Fe304纳米颗粒分散液5mL和pH = 6的水194mL，5号加入2mg/mL的rG0@Fe304纳米 颗粒分散液2. 5mL和pH = 196. 5mL，6号加入2mg/mL的rG0@Fe304纳米颗粒分散液1. 25mL 和pH = 6的水197. 75mL，制得1-6号混合液，其中对照品浓度均为0. 25 μ g/mL并且1-6 号混合液中吸附剂的浓度依次为：〇· 4000mg/mL、0. 2000mg/mL、0. 1000mg/mL、0. 0500mg/mL、 0· 0250mg/mL、0. 0125mg/mL。
[0058] 2将装有混合液的锥形瓶均放入回旋振荡器，震荡5min。静置，将磁铁置于锥形瓶 底部5min，进行吸附富集。
[0059] 3富集结束，将磁铁紧贴锥形瓶底部，倾倒弃去水层，将装有残留固体的锥形瓶置 于70°C烘箱内30min，将残留固体表面的水分烘干。取出，放冷。
[0060] 4往冷却后的残留固体加入含有体积分数1%乙酸的甲醇溶液洗脱3次，每次 500 μ L，第一次洗脱时超声10s，第二次第三次洗脱时涡旋20s。
[0061] 5取6个1.5mL规格离心管，编号1-6,将3次的洗脱液合并于离心管内，将离心管 置于80°C干式恒温器中干燥。
[0062] 6往离心管内加入50yL甲醇并超声5min，将干燥后的残留固体溶解， 13000rpmin离心5min，装样，用UHPLC-Q-T0F/MS分析结果。实施例所用仪器为 八 8116扯1290册^：-66530〇-1'0卩/]^。色谱柱48丨161^58-(：18(1.8以111，2.1\50臟），进样量 ： 2.0^，柱温：301：，流速0.4111171^11，流动相4:0.1￥%甲酸水溶液，8:乙腈。梯度洗脱 ： 0 ?lmin，10%?50v%流动相 B ;1 ?2min，50%?70v%流动相 B ;2 ?3min，70%?85v% 流动相B ;3?5min，85%?100ν%流动相B ;5?8min，100%?100ν%流动相B ;8?9min， 100%?10ν%流动相B。
[0063] 质谱条件：电喷雾电离；负离子模式；全扫描模式监测（TIC);干燥气温度：350°C ; 干燥气流量：12L/min ;喷雾器压力：45psig ;毛细管电压：3500V，碰撞电压：175V ;电离电 压：65V ;采样率：lspetra/s ;质量数扫描范围：100-1100m/z。
[0064] 实验结果如下表1，表1中的数据为峰面积。
[0065] 表 1.
[0066]
【权利要求】
1. 一种富集与检测低浓度蒽醌类有效成分的方法，所述蒽醌类有效成分为芦荟大黄 素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚中的一种或两种以上，其特征在于所述方法包括以 下步骤： (1) 反应容器中加入含有低浓度蒽醌类有效成分的待检测样品溶液，并加入四氧 化三铁磁性石墨烯配成混合液，使混合液中四氧化三铁磁性石墨烯的浓度为0. 〇125mg/ mL-0. 4000mg/mL，混合液的pH值为4-8,震荡富集1?lOmin后，静置，将磁铁置于反应容器 底部吸附固体，弃去液体，残留固体烘干后用解吸剂进行洗脱，所述解吸剂为甲醇、含体积 分数1%乙酸的乙醇、含体积分数1%乙酸的乙腈、含体积分数1%乙酸的乙酸乙酯或含体 积分数1?4%乙酸的甲醇，收集洗脱液、洗脱液干燥、所得固体用溶解剂溶解，得到富集样 液，所述溶解剂为甲醇，富集样液离心，取上清液用液质联用仪检测，得到富集样液中蒽醌 类有效成分的总离子流色谱图和各成分的提取离子色谱图； (2) 以芦荟大黄素的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照富集样液同样条件用液 质联用仪检测，获得芦荟大黄素对照品的提取离子色谱图，以芦荟大黄素对照品溶液的提 取离子色谱图中色谱峰的峰面积为横坐标，以芦荟大黄素对照品的进样量为纵坐标制作芦 荟大黄素标准曲线，按同样方法制作大黄酸标准曲线、大黄素标准曲线、大黄酚标准曲线、 大黄素甲醚标准曲线；根据富集样液的各成分的提取离子色谱图中色谱峰的峰面积及各成 分的标准曲线，计算得到富集样液中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含 量， (3) 计算富集倍数： 取芦荟大黄素对照品，配制成浓度为0. 25 μ g/mL的芦荟大黄素稀释液，按照步骤（1) 的相同的方法条件，加入四氧化三铁磁性石墨烯进行富集检测，得到芦荟大黄素稀释液富 集后的样液的提取离子色谱图，并将芦荟大黄素稀释液以相同条件用液质联用仪检测，得 到芦荟大黄素稀释液的提取离子色谱图，芦荟大黄素稀释液富集后的样液的提取离子色谱 图中芦荟大黄素色谱峰的峰面积与芦荟大黄素稀释液的提取离子色谱图中芦荟大黄素色 谱峰的峰面积之比，即为芦荟大黄素的富集倍数； 按照上述方法分别计算大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的富集倍数； (4) 根据芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚各自的富集倍数，富集样液 中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量除以各自的富集倍数，换算得到 待检测样品溶液中蒽醌类有效成分的含量。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述混合液中四氧化三铁磁 性石墨烯的浓度为〇· 0500mg/mL。
3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述混合液中调pH值为6。
4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，震荡富集的时间为5min。
5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述解吸剂为含体积分数 1 %乙酸的甲醇。
6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述解吸剂的体积用量与待 检测样品溶液的体积比为1 :100?1000。
7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述解吸剂的体积用量与待 检测样品溶液的体积比为1 :400。
8. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述溶解剂的体积用量与待 检测样品溶液的体积比为1 :1〇〇〇?8000。
9. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述溶解剂的体积用量与待 检测样品溶液的体积比为1 :4000。
10. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，所述解吸剂洗脱的次数为 3次。
【文档编号】G01N30/08GK104090036SQ201410263538
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年6月13日 优先权日:2014年6月13日
【发明者】曹君, 胡帅帅, 曹婉, 庞潇卿 申请人:杭州师范大学