离子色谱在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种离子色谱在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦，先将一定体积的待测样品与水以一定比例混合，超声萃取，使其中的草甘膦溶于水中，后进样用高效液相色谱反相柱在线除去水溶性有机物基质，无保留作用的离子被紧随其后的富集柱保留，柱切换后经淋洗液洗脱的离子在阴离子色谱柱中得到分离，并由抑制电导法进行检测。本发明对在线前处理系统的应用，去除转基因大豆油样品中的水溶性有机物，大豆油中草甘膦农药含量的测定具有广泛深远的意义，本方法改变现有前处理除有机物使用一次性C18柱的状态，减少了人力消耗，节省了样品前处理的时间和繁复的操作过程。
【专利说明】离子色谱在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种离子色谱柱切换系统，具体地说，是一种利用离子色谱柱切换法在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦的新方法。
【背景技术】
[0002]转基因食品是将某些生物基因利用现代分子生物学技术转移到其他物种中或以转基因生物为原料加工而成的食品。为了满足人们不同的需要，转基因技术使目标物种在营养品质、形状等方面进行转变，通过改造生物的遗传物质而改良了生物产品的消费品质。关于转基因食品的优越性及其可能存在的安全隐患和副作用，近年来得到了广泛的关注，引发了许多思考。
[0003]抗草甘膦转基因大豆是所有转基因植物中种植面积最大，产量最多的一种作物，中国作为全球最大的大豆进口国和消费国，目前食用的绝大多数为抗草甘膦转基因大豆[I]。转基因大豆本身是否存在营养价值的降低及更严重的致畸、致癌、致突变性留待时间的检验。我们可以预见到抗草甘膦转基因大豆对人体健康的影响，除了来源于转入的基因，也会来源于种植过程中普遍施用的除草剂--草甘膦。
[0004]草甘膦是一种非选择性、无残留灭生性除草剂，能有效去除多年生根杂草，是世界上应用最为广泛的除草剂[2]。此前有不少研究表明，极低浓度的草甘膦即可促进癌细胞生长，具有较强的 致癌作用。
[0005]豆油为大豆最主要的一种消费形式，与我们的生活息息相关，因此测定抗草甘膦转基因大豆油中草甘膦农药的残留问题成为人们非常关切的一个问题。离子色谱作为一种测定水溶液中的阴阳离子最常用的技术[3-4]，在应用过程中因大豆油中大量存在的有机物而产生瓶颈，本方法利用NGl反相色谱柱在线去除豆油中的有机物并与离子色谱联用，测定其中的草甘膦农药，方法简单，可操作性强，检测限低。
[0006]参考文献
[0007]I高效液相色谱法和离子色谱法测定转基因大豆中草甘膦含量的研究，张硕，2012
[0008]2Handbook of Chemical Products-Agricultural Chemical, Chemical IndustryPress of China, 1996，p.363
[0009]3H.Small, T.S.Stevens, W.S.Bauman, Novel 1n exchange chromatographicmethod using conductimetric detect1n, Anal.Chem.，47 (1975) 1801-1809
[0010]4P.E.Jackson, C.A.Pohlj Advances in stat1nary phase development insuppressed 1n chromatography, Trends Anal.Chem.，16 (1997) 393-400
【发明内容】
[0011]本发明的目的是在现有检测方法基础上进行进一步改进，能够在线去除样品中的水溶性有机物基质，同时利用阴离子交换色谱柱完成对草甘膦的分离，方法具有高度的集合性。所使用仪器设备简单，灵敏度高，可广泛应用于环境监测、食品安全、卫生防疫等各领域。
[0012]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0013]一种离子色谱柱切换法在线前处理测定转基因大豆油中草甘膦的方法，所述的系统包括进样器、六通阀、反相柱、十通阀、富集柱、阴离子分离柱、四源梯度泵、输液泵、电导检测器、废液瓶，进样器和六通阀连接，六通阀分别与四源梯度泵和反相柱连接，十通阀上连接富集柱，十通阀分别与输液泵，阴离子分离柱连接，所述的阴离子分离柱后依次连接抑制器、电导检测器和废液瓶。
[0014]该离子色谱柱切换法在线前处理测定转基因大豆油中草甘膦的方法，先将一定体积的待测样品与水以一定比例混合，超声萃取，使其中的草甘膦溶于水中，后进样用高效液相色谱反相柱在线除去水溶性有机物基质，无保留作用的离子被紧随其后的富集柱保留，柱切换后经淋洗液洗脱的离子在阴离子色谱柱中得到分离，并由抑制电导法进行检测。
[0015]作为进一步地改进，本发明将高效液相色谱反相柱与阴离子交换柱串联，利用反相柱对有机物的保留特性除去样品中存在的水溶性有机物，后利用阴离子交换柱对不同离子的不同的保留能力，将待测离子分离洗脱，用抑制电导法进行检测，实现了对样品中有机物的在线去除，节省了样品前处理的时间和繁复的操作过程。
[0016]一种将所述的方法应用于测定复杂机制体系中的草甘膦离子，用类似方案进行分析可提高灵敏度和改善检测限。
[0017]本发明的有益效果如下:
[0018]本发明对在线前处理系统的应用，去除转基因大豆油样品中的水溶性有机物，大豆油中草甘膦农药含量的测定具有广泛深远的意义，离子色谱作为一种测定溶液中离子的常用手段，却因豆油中大量存在的有机物而却步，本方法改变现有前处理除有机物使用一次性C18柱的状态，减少了人力消耗，节省了样品前处理的时间和繁复的操作过程，NGl的活化再生处理，较C18小柱一次性的使用特性也要更加的环保，另外国内外尚无此类检测方法。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1为本发明的离子色谱在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦的结构和工作示意图；
[0020]图1中，I一进样器；2—六通阀；3—反相柱；4一富集柱；5—十通阀；6—阴离子分尚柱；7—四源梯度泵；8—NaOH淋洗液；9—输液泵；10—电导检测器；11—乙腈；12—水；13—废液瓶；
[0021]图2转基因大豆油中草甘膦含量测定及加标的色谱图；
[0022]图2中，a—实际样品色谱图，b—实际样品加标0.2mg/L草甘膦色谱图，I—草甘膦在本方法系统中的色谱峰。
【具体实施方式】
[0023]本发明公开了一种离子色谱柱切换法在线前处理测定转基因大豆油中草甘膦的方法，系统包括进样器1、六通阀2、反相柱3、十通阀5、富集柱4、阴离子分离柱6、四源梯度泵7、输液泵9、电导检测器10、废液瓶13，进样器I和六通阀2连接，六通阀2分别与四源梯度泵7和反相柱3连接，十通阀5上连接富集柱4，十通阀5分别与输液泵9，阴离子分离柱6连接，所述的阴离子分离柱6后依次连接抑制器、电导检测器10和废液瓶13。
[0024]该离子色谱柱切换法在线前处理测定转基因大豆油中草甘膦的方法，先将一定体积的待测样品与水以一定比例混合，超声萃取，使其中的草甘膦溶于水中，后进样用高效液相色谱反相柱3在线除去水溶性有机物基质，无保留作用的离子被紧随其后的富集柱4保留，柱切换后经淋洗液洗脱的离子在阴离子分离柱6中得到分离，并由抑制电导法进行检测。
[0025]本发明将高效液相色谱反相柱3与阴离子分离柱6串联，利用反相柱3对有机物的保留特性除去样品中存在的水溶性有机物，后利用阴离子分离柱6对不同离子的不同的保留能力，将待测离子分离洗脱，用抑制电导法进行检测，实现了对样品中有机物的在线去除，节省了样品前处理的时间和繁复的操作过程。
[0026]将所述的方法应用于测定复杂机制体系中的草甘膦离子，用类似方案进行分析可提高灵敏度和改善检测限。
[0027]下面通过具体实施例，结合说明书附图对本发明的技术方案作进一步地详细说明:
[0028]本发明提供了一种测定转基因大豆油中草甘膦的新分析方法，利用一台ICS-2100离子色谱仪包含一个六通阀2、一个输液泵9、十通阀5、电导检测器10，以1nPacASll-HC为阴离子交换柱6，前处理柱3以水为流动相，流速为1.0mL/min，色谱纯的乙腈11为再生液，0.5mL/min,分析柱淋洗液流动相为23mmol/LNa0H，流速为1.0mL/min,进样量为100 μ L，抑制器抑制电流为52mA，电导检测器10进行检测。 [0029]本发明利用反相柱3在线除去样品中的水溶性有机物基质，阴离子交换柱6分离草甘膦，抑制电导法进行检测，装置图如图1所示，系统包括进样器1、六通阀2、反相柱3、富集柱4、十通阀5、阴离子分离柱6、四源梯度泵7、输液泵9、电导检测器10、废液瓶13，进样器I和六通阀2连接，六通阀2分别与四源梯度泵7和反相柱3连接，十通阀5上连接富集柱4，十通阀5分别与输液泵9，阴离子分离柱6连接，所述的阴离子分离柱后依次连接电导检测器10和废液瓶13。
[0030]图1为离子色谱在线前处理技术测定转基因大豆油中的草甘膦的结构和工作示意图。具体实施步骤为:通过四源梯度泵7，将充满定量环(100μ?的样品在水(流速为lmL/min)输送下，于反相柱3中在线去除水溶性有机物，经洗脱的溶液被保留在富集柱内，2min后切换阀5，富集柱4内的待测离子被输送至阴离子交换柱6中分离洗脱，采用抑制电导法进行检测，峰面积法定量。
[0031]图2为离子色谱在线前处理技术测定转基因大豆油中的草甘膦的色谱图。前处理方法为移取待测定大豆油5mL,加入5mL去离子水,在超声细胞粉碎仪中超声萃取约20min,使其充分混匀，转速12000r/min离心15min，收集下层水相经0.22 μ m尼龙滤膜过滤，待用。由图不难发现，本方法并未在实际样品中测到草甘膦，由加标实验可以看出，经过离子色谱柱的分离后，油中存在的其他离子不会干扰草甘膦的测定，同时方法具有高灵敏度，且方法可靠，实用性强的优点。
[0032]最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例子。显然，本发明不限于以上实施例子，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种离子色谱在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦的方法，其特征在于先将待测样品溶液进样，经过反相柱在线除去水溶性有机物，无保留作用的离子被紧随其后的富集柱保留，柱切换后经淋洗液洗脱的离子在阴离子色谱柱中得到分离，并由抑制电导法进行检测。
2.根据权利要求1所述的离子色谱在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦的方法，其特征在于，将高效液相色谱反相柱与阴离子交换柱串联，利用反相柱对有机物的保留特性除去样品中存在的水溶性有机物，实现了对样品中有机物的在线去除，节省了样品前处理的时间和繁复的操作过程。
3.根据权利要求1所述的离子色谱在线前处理测定转基因大豆油中的草甘膦的方法，其特征在于，利用离子色谱高效的分离能力，将样品中的草甘膦离子与其他离子分离，后利用抑制电导法进行定量检测。
4.一种由权利要求1或2或3所述的方法应用于测定复杂机制体系中的草甘膦。
【文档编号】G01N30/02GK104034817SQ201410275486
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月19日 优先权日:2014年6月19日
【发明者】贺婕, 朱岩 申请人:浙江大学