复合维生素添加剂中维生素b12含量的检测方法
【专利摘要】一种复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。所述检测方法，包括以下步骤：（1）配制维生素B12浓度为1mg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的系列标准浓度的溶液，在一定的色谱条件下上机测定并计算回归方程及相关系数。（2）称取测试样品在相同的色谱条件下上机测定，根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度。本发明所述的检测方法，其测定精密度和准确度能满足乳制品分析的要求，具有准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低等特点，可作为常规检测方法应用。
【专利说明】复合维生素添加剂中维生素BI2含量的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。
【背景技术】
[0002]维生素B12是所有维生素中分子最大和最复杂的一种，但是人体对它的需要量也许是所有维生素中最少的一种，每天只需3徽克左右即可。过量的维生素B12也会产生副作用，大量维生素B12也可导致叶酸缺乏。维生素B12可以提高叶酸的利用率，若缺乏维生素B12，则叶酸的利用受到影响。维生素B12缺乏还可导致周围神经炎。小孩缺乏维生素B12的早期表现是精神情绪异常、表情呆滞、少哭少闹、反应迟钝、爱睡觉、手足无意识运动或头与肢体颤动，最后导致贫血。美国纽约的哥伦比亚大学和丹佛的科罗拉多大学的专家对323名缺乏维生素B12的人进行考察，发现其中将近半数的人(共141人)出现了程度不同的神经损伤及精神性症状。症状包括痴呆、抑郁、记忆障碍、平衡功能失调等，有的还有精神分裂症的表现。当医生给这些人补充维生素B12后，许多患者的精神性症状完全消失。
[0003]根据目前已报道的资料，测定维生素B12主要有四种方法:比色法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法及微生物法。微生物法是测定如食品中维生素B12的通用方法，该法灵敏度特别高，可测定出样液中0.01ng/ml的含量。但由于该法操作繁琐，检验周期长，技术难度大，影响因素多及重现性差、成本高等问题而不能广泛应用。特别是用此法测定添加剂等维生素B12含量高的样品，由于稀释倍数较大且难于掌握等使测定误差较大，不很适宜；而前三种方法大都用于药品类等含量较高的样品(一般含量mg/g级)。而奶粉专用复合维生素添加剂中的维生素B12含量一般为10μ g/g或更低(国标规定婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量为彡0.8 μ g/100g)。因此，现有的检测方法一般很难用于检测婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量。
[0004]因此研究一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量的检测方法很有必要。
【发明内容】
[0005]本发明旨在提供一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量的检测方法。
[0006]所述的复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，包括以下步骤:
(I)配制维生素B12浓度为lmg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0,2.0,3.0、
4.0,5.0 μ g/ml的系列标准浓度的溶液，进样量分别为20 μ L。在一定的色谱条件下上机测定并计算回归方程及相关系数。
[0007](2)称取测试样品1g放于125ml三角瓶中。加入30ml30-50°C的蒸馏水溶解后放入超声波中，10分静后取出，转入50ml容量瓶中加入10%硫酸锌溶液5ml定定容，混匀后用滤纸过滤，滤液通过0.45 μ m的滤膜后在相同的色谱条件下上机测定。根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度。
[0008]优选的，本发明所述的色谱条件为色谱柱为ODS色谱柱，色谱柱理论塔板数为2216 ;柱温为室温；流动相流速lml/min ;测定波长361nm ;流动相为磷酸二氢钠(10g/LpH=3.5):甲醇=70:30的混合液。
[0009]本发明所述的检测方法，得到的标准曲线为:
Y=-0.1340+0.0009592X,R=0.9976。结果表明:在测定范围内B12浓度与峰高间呈正相关，相关性好，可用于外标法进行定量测定。
[0010]本发明所述的检测方法，维生素B2含量的计算公式为: 维生素82含量(“8/10(^)=011\￥\0/012\111)\100，其中 hi 为测试样峰高(mm)，
h2为标准样峰高(mm), V为测试样液体积(mL),m为测试样质量(g), C为维生素B12标准溶液浓度(yg/ml)。
[0011 ] 本发明所述的检测方法中，采用高效液相色谱法测定复合维生素添加剂中维生素B12含量，由于样品中往往用有机物作载体，所以用蒸馏水直接溶解后即使通过滤膜也会出现混浊的现象，而用硫酸锌作沉淀剂时可有效把有机成分沉淀，待测液澄清，更有利于上机测定。经测定，方法回收率与精密度试验结果较好，回收率在90-102%间，平均为96.4%，样品重复测定12次的变异系数为0.54%，此方法检出限为4ng，计算可得婴幼儿配方奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的检出限为I μ g/g，可满足任何奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的测定。
[0012]本发明所述的检测方法，采用HPLC法测定婴幼儿配方奶粉专用维生素添加剂中维生素B12其测定精密度和准确度能满足乳制品分析的要求，具有准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低等特点，可作为常规检测方法应用。
【具体实施方式】
[0013]实施例一:
(I)配制维生素B12浓度为lmg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0,2.0,3.0、4.0、5.0 μ g/ml的系列标准浓度的溶液，进样量分别为20 μ L。在一定的色谱条件下(色谱柱为ODS色谱柱，色谱柱理论塔板数为2216 ;柱温为室温；流动相流速lml/min ;测定波长36Inm ;流动相为磷酸二氢钠(10g/L pH=3.5):甲醇=70:30的混合液)上机测定并计算回归方程及相关系数。得到的标准曲线为:
Y=-0.1340+0.0009592X,R=0.9976。结果表明:在测定范围内B12浓度与峰高间呈正相关，相关性好，可用于外标法进行定量测定。
[0014](2)称取测试样品1g放于125ml三角瓶中。加入30ml30-50°C的蒸馏水溶解后放入超声波中，10分静后取出，转入50ml容量瓶中加入10%硫酸锌溶液5ml定定容，混匀后用滤纸过滤，滤液通过0.45 μ m的滤膜后在相同的色谱条件下上机测定。根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度。
[0015]维生素B2含量的计算公式为: 维生素82含量(“8/10(^)=011\￥\0/012\111)\100，其中 hi 为测试样峰高(mm)，
h2为标准样峰高(mm), V为测试样液体积(mL),m为测试样质量(g), C为维生素B12标准溶液浓度(μ g/ml)。
[0016]实施例二:重复性试验、回收率试验以及检出极限试验
经测定，方法回收率与精密度试验结果较好，回收率在90-102%间，平均为96.4%，样品重复测定12次的变异系数为0.54%，此方法检出限为4ng，计算可得婴幼儿配方奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的检出限为I μ g/g，可满足任何奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的测定。
【权利要求】
1.复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，包括以下步骤: (1)配制维生素B12浓度为lmg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0,2.0,3.0、4.0,5.0 μ g/ml的系列标准浓度的溶液，进样量分别为20 μ L，在一定的色谱条件下上机测定并计算回归方程及相关系数； (2)称取测试样品1g放于125ml三角瓶中； 加入30ml30-50°C的蒸馏水溶解后放入超声波中，10分静后取出，转入50ml容量瓶中加入10%硫酸锌溶液5ml定定容,混勻后用滤纸过滤,滤液通过0.45 μ m的滤膜后在相同的色谱条件下上机测定，根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度。
2.如权利要求1所述的复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，其特征在于所述的色谱条件为色谱柱为ODS色谱柱，色谱柱理论塔板数为2216 ;柱温为室温；流动相流速lml/min ;测定波长361nm ;流动相为10g/L、pH=3.5的磷酸二氢钠:甲醇=70:30的混合液。
【文档编号】G01N30/06GK104330484SQ201410573261
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】李勇, 刘文斌 申请人:西安米亿生物科技有限公司