本发明涉及检验分析技术领域，特别的涉及一种酶联免疫检测法的显色系试剂。
背景技术：
酶联免疫检测法(elisa)是目前在医学检验和食品安全检测领域应用最广泛的检测技术，酶联免疫技术可以检测小到瘦肉精残留大到艾滋病毒抗体，应用于人类健康、食品安全领域的方方面面。
酶联免疫法目前常用的显色系统有两种，分别为辣根过氧化物酶(HRP)系统和碱性磷酸酶(ALP)系统。辣根过氧化物酶系统以HRP为催化剂以四甲基甲酰胺(TMB)和过氧化氢为底物以硫酸为终止液的系统；碱性磷酸酯酶系统以ALP为催化剂以对硝基苯磷酸酯(AP)为底物，以NaOH为终止液的系统。TMB是一种还原性物质，在储存过程中极易被氧化，商业试剂盒一般采用复杂的缓冲体系保存，且使用过程中开瓶不能放置太久。AP稳定性较TMB稳定，但是ALP显色反应速度很慢，一般需要30min以上，比较耽误时间。
为解决TMB或AP作为酶联免疫显色剂存在的问题，我们采用新型的胶体金显色系统，利用氯金酸与过氧化物的氧化还原反应产生红色胶体金溶液，该溶液在550nm处具有吸光度。该系统底物组分单一且稳定，反应时间短，无需终止液，且灵敏度与现有显色系统相当。
技术内容
一种基于胶体金的新型酶联免疫显色试剂该系统底物组分单一且稳定，反应时间短，无需终止液，且灵敏度与现有显色系统相当。
本发明通过以下技术方案实现：
一种基于胶体金的新型酶联免疫显色系统该系统由辣根过氧化物酶、氯金酸溶液和过氧化脲溶液组成。
所述辣根过氧化物酶是指标记与单抗或多抗上的辣根过氧化物酶。
所述氯金酸溶液为0.01％～0.2％的AuCl3溶液。
所述过氧化脲溶液为0.1％～5.0％的过氧化脲溶液。
所述氯金酸，其缓冲液选自磷酸盐、柠檬酸盐、Tris盐酸缓冲液，其pH为7.0.
所述过氧化脲，其缓冲液为pH7.0磷酸盐缓冲液。
应用本发明elisa方法显色的步骤如下：
按照常规的方法进行elisa操作至加显色液前一步。
依次加入氯金酸溶液50ul和过氧化脲溶液50ul。混匀，常温显色5min。
将显色后板条放入酶标仪，550nm波长读取吸光度值。
数据处理方法同常规elisa。
本发明显色的原理为：Au3+具有强氧化性，可以氧化过氧化脲产生金单质，如果过氧化脲过量则产生红色的胶体金溶液，反之，则产生蓝色胶体金溶液。同时显色体系中HRP可以催化过氧化脲分解，如果体系中含有大量HRP则催化多数的过氧化脲分解，从而产生蓝色胶体金溶液，反之，则产生红色胶体金溶液。
优点和积极效果
采用氯金酸为底物，避免了常规elisa试剂盒底物稳定性差的缺点，该底物可以稳定放置数年而不发生变化。同时显色时间较以往的方法短。无需终止液，减少了操作步骤，避免了强酸强碱等腐蚀性化学药品。
说明书附图
图1为该显色试剂的显色原理。
实施方式举例
实施例1新型酶联免疫显色系统试剂配制方法
显色系统由显色剂A和显色剂B组成。显色剂A为0.02％氯金酸，显色剂B为0.1％过氧化脲溶液。
显色剂A配制方法如下：以配制100ml为例，称取氯金酸0.02g加入到100ml纯水中，搅拌溶解，然后加入0.1ml吐温80，搅拌均匀。应为淡黄色透明溶液。
显色剂B配制方法如下：以配制100ml为例，称取醋酸钠2.8g，柠檬酸0.3g加入到100ml纯水中，搅拌溶解，称取0.1g过氧化脲加入到上述溶液中，搅拌溶解。应为无色透明溶液。
将配制好的显色剂A和显色剂B置于不透明塑料瓶中2～8℃保存。
实施例2新型显色系统的应用方法
试验材料：显色剂A：0.02％氯金酸溶液，显色剂B：0.1％过氧化脲溶液，采用市场上正常销售的人类免疫缺陷病毒(1+2)抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)(北京万泰生物药业有限公司生产，批号：20140923)酶标板、酶标抗体。
检测方法如下：
1.加样：将预包被板条固定于板架上。每次试验设阴性对照2孔、阳性对照2孔，分别加入阴、阳性对照100ul；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品100ul。
2.温育：置37℃温育60分钟。
3.洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液，扣干。重复洗5次。
4.加酶：空白对照孔不加酶，其余孔加入酶标记物100ul。
5.温育：置37℃温育30分钟。
6.洗涤：弃去孔内酶标记物，重复洗5次(同操作步骤3)。
7.显色：每孔加入显色剂A 50ul，再加入显色剂B 50ul，振荡混匀，置室温反应5分钟。
8.选择酶标仪测定波长550nm，用空白孔调零点，测定各孔OD值。也可选择630nm作为参考波长，用双波长测定。