一种新鲜烟叶切片及其制作方法与应用与流程

本发明属于农业技术领域，特别涉及一种新鲜烟叶切片及其制作方法与应用，尤其涉及一种使烟叶内部结构完整呈现的切片方法。

背景技术：

烟叶的内部结构的观察需要切片技术的协助，中国专利(公开号：CN104849110A)，一种植物组织的石蜡切片方法，是通过固定液固定、染色等制成的，这导致了叶片生理结构的变化，使切出来的材料失真，影响烟叶内部结构的观察。中国专利(公开号：CN103499477A)鲜叶切片及其制备方法和用途公开了一种新鲜叶片的切片方法，虽然操作简单、成本低廉，但由于人工徒手切片，不能保证每次切取的厚度一致，成功率较低。

因此，针对上述能否真实展现叶片内部结构和稳定连续切出目标样品等问题，改进新鲜叶片的切片方法显得尤为重要。

技术实现要素：

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种新鲜烟叶切片的制作方法。

本发明的另一目的在于提供通过上述方法获得的新鲜烟叶切片。

本发明的再一目的在于提供一种新鲜烟叶切片的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种新鲜烟叶切片的制作方法，包括以下制作步骤：

(1)新鲜烟叶采集；

(2)根据采集的烟草叶片选取有代表性的目标叶块1.2～2mm×3.5～5mm，用刀片切下；

(3)把目标叶块放入加热后的琼脂液进行包埋，然后冷却凝固；

(4)将凝固后含有目标叶块的琼脂块进行修饰，然后上台使用切片机进行切片；

(5)把切取的样品放在载玻片上盖上盖玻片制片。

为了更好的实现本发明，还包括如下步骤：

(6)进行显微观察烟草叶片内部结构；

(7)用image软件连接显微镜进行拍照。

所述的琼脂液是把琼脂粉加入水中进行微波加热2～4min，琼脂液的浓度为3％～5％，琼脂粉购于健阳生物科技有限公司，凝胶强度大于1300g/cm²。

所述的冷却凝固是把包埋后的含有目标叶块的琼脂进行低温冷藏，冷藏时间为0.5～2h。

所述的修饰是把琼脂块切成1～2cm³，其中，目标叶块长的叶边垂直于水平面。

所述的切片机是DOSAKA EM CO.,LTD.公司生产的ZERO1型号切片机；切片机刀片购于吉列公司。

所述的切片是把修饰后的琼脂块固定在切片台上，短的叶边平行于刀片放置进行叶片横切，根据不同的叶片硬度和叶龄调整切取的厚度，优选厚度40～80μm，将切下的薄片用湿润的毛笔转移至盛有蒸馏水的烧杯中。

所述的制片先把鲜样薄片边缘的琼脂用牙签剔除，再把鲜样薄片用牙签挑至滴有水的载玻片上，最后盖上盖玻片。

所述的显微观察使用的是OLYMPUS公司生产的BX43型号显微镜。

根据所拍照片中叶片内部结构变化、颜色以及测定出叶片的厚度，可以判断烟草需肥情况和采收时机。

一种新鲜烟叶切片，通过上述制作方法获得。

所述的新鲜烟叶切片在田间中的应用。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

采用本发明的方法切取的每个样品厚度均一，且厚度大小可随意调控，由于显微观测需要切片机切取厚度优选控制在40～80μm。本发明在不采用固定液固定、染色、不破坏叶片内部结构及生理变化的情况下，完整并真实的呈现叶片的内部结构，并且耗时较少，操作简单，使用试剂较少。

附图说明

图1是实施例1中烟草叶片鲜样切片。

图2是实施例2中烟草叶片鲜样切片。

图3是实施例3中烟草叶片鲜样切片。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

新鲜烟草叶片的切片制作步骤如下：

(1)新鲜烟叶采集，叶片样品采自华南农业大学网室盆栽烟草，在烟苗移栽后45天选取中部烟叶；

(2)把采集的中部烟草叶片带回实验室，选取第6～7叶脉之间的目标叶块用刀片切下，目标叶块的大小约为2mm×5mm；

(3)配制3％的琼脂液进行微波加热，微波加热3min，待稍微冷却后把目标叶块放入琼脂液中进行包埋，然后放入冰箱保鲜层进行冷却凝固；

(4)冷却1h后取出琼脂块，用刀片对其进行修饰，修饰成体积约为1cm×1cm×2cm(长×宽×高)的琼脂小块，目标叶块在其中间，然后上台使用切片机进行切片；

(5)把切取的样品放在载玻片上盖上盖玻片制片；

(6)进行显微观察烟草叶片内部结构。

(7)用image软件连接显微镜进行拍照，如图1。

从图1可知，烟草叶片的上表皮、下表皮清晰可见，栅栏组织排列紧密且规则、颜色浓绿均一，栅栏组织和海绵组织比例适中。

实施例2

新鲜烟草叶片的切片制作步骤如下：

(1)新鲜烟叶采集，叶片样品采自华南农业大学网室盆栽烟草，在烟苗移栽后45天选取中部烟叶；

(2)把采集的中部烟草叶片带回实验室，选取第6～7叶脉之间的目标叶块用刀片切下，目标叶块的大小约为1.2mm×4mm；

(3)配制4％的琼脂液进行微波加热，微波加热4min，待稍微冷却后把目标叶块放入琼脂液中进行包埋，然后放入冰箱保鲜层进行冷却凝固；

(4)冷却0.5h后取出琼脂块，用刀片对其进行修饰，修饰成体积约为1cm×1cm×1cm(长×宽×高)的琼脂小块，目标叶块在其中间，然后上台使用切片机进行切片；

(5)把切取的样品放在载玻片上盖上盖玻片制片；

(6)进行显微观察烟草叶片内部结构。

(7)用image软件连接显微镜进行拍照，如图2。

从图2可知，不仅能清晰的看到烟草叶片的上表皮和下表皮，还可清楚的展现叶脉和气孔，栅栏组织排列紧密且较长，海绵组织中还含有大量的叶绿体。

实施例3

新鲜烟草叶片的切片制作步骤如下：

(1)新鲜烟叶采集，叶片样品采自华南农业大学网室盆栽烟草，在烟苗移栽后45天选取中部烟叶；

(2)把采集的中部烟草叶片带回实验室，选取第6～7叶脉之间的目标叶块用刀片切下，目标叶块的大小约为1.6mm×3.5mm；

(3)配制5％的琼脂液进行微波加热，微波加热2min，待稍微冷却后把目标叶块放入琼脂液中进行包埋，然后放入冰箱保鲜层进行冷却凝固；

(4)冷却2h后取出琼脂块，用刀片对其进行修饰，修饰成体积约为1cm×1cm×1.5cm(长×宽×高)的琼脂小块，目标叶块在其中间，然后上台使用切片机进行切片；

(5)把切取的样品放在载玻片上盖上盖玻片制片；

(6)进行显微观察烟草叶片内部结构。

(7)用image软件连接显微镜进行拍照，如图3。

从图3可知，烟草叶片的栅栏组织排列略微疏松，且颜色有点发黄，在叶片中所占的比例不大。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。