本发明涉及一种检测方法，具体是一种青霉素残留量检测方法。
背景技术：
青霉素是一种动物专用的大环内酯类抗生素，在临床中主要用于耐青霉素金黄葡萄球菌及其他敏感菌所致的各种感染，如肺炎、子宫炎、乳腺炎、败血症等。对鸡支原体病(慢性呼吸道病)和传染性鼻炎也有相当疗效。也可配成眼膏或软膏用于皮肤和眼部感染。对鱼类白头白嘴病、烂鳃病及肾脏病有良好的疗效。青霉素具有菌谱广、疗效显著、耐药性少，各种途径给药均易吸收和分布等特点，因而广泛用于医学临床。国外对青霉素的毒性以及在动物体内的药物动力学已有研究。据报道，青霉素在体内代谢早、排泄快，即使长时间使用也无蓄积性毒性。但对青霉素作为饲料添加剂使用，引起许多争论，认为其存在潜在危险：易引起胃肠道反应，可有恶心、呕吐、腹痛及腹泻，反应与剂量大小有关。过敏反应，可有荨麻疹及药物热。可引起肝脏损害，如血清丙氨酸氨基转移酶升高，出现黄疸等。静注或静滴乳糖酸青霉素可引起血栓性静脉炎，静注发生的可能性较多。肌注局部刺激性大，可引起疼痛及硬结，因此不宜肌注。由于青霉素的毒、副作用以及滥用抗生素给人带来的危害，世界各国对青霉素的使用和在食品中的残留量进行了规定。欧盟、美国和日本等主要国家(或组织)都制定了动物性食品中青霉素最高残留限量。中国农业部也颁布了《动物性食品中兽药最高残留限量》。
目前中国国内主要是采用液相色谱串联质谱法检测水产品中的青霉素。中华人民共和国国家标准GB/T20762-2006规定了畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、青霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素残留量的测定(采用液相色谱串联质谱法)；中华人民共和国国家标准GB/T22946-2008规定了蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、青霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素和交沙霉素残留量的测定(采用液相色谱-串联质谱法)；中华人民共和国国家标准GB/T22988-2008.中规定了牛奶和奶粉中螺旋霉素、吡利霉素、竹桃霉素、替米卡星、青霉素和泰乐菌素残留量的测定(采用液相色谱-串联质谱法)。由此可见液相色谱串联质谱法检测青霉素残留尤其是大环内酯一类药物残留的报道较多，上述三个国家标准都是确证方法，筛选方法相对较少，牛、羊、猪、禽的肌肉、脂肪、肝脏、肾脏及牛奶、鸡蛋中青霉素的残留检测HPLC筛选法未见报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种青霉素残留量检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种青霉素残留量检测方法，包括如下步骤：(1)将无青霉素的样品作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用1-10％的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为3-5，加入浓度为0.5-1.5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；(2)色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim-packVP-ODS，150×4.6mm，5μm；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40℃，流动相：0.5v/v％乙酸溶液：乙腈：甲醇＝75:20:5(V:V)，流速1.2mL/min，进样量20μL；（3）在偏碱性的磷酸二氢钾缓冲溶液中，用衍生化试剂 9-芴代甲氧苯酰氯在水浴条件下与含羟基的青霉素样品进行衍生化反应，生成青霉素的衍生产物，然后通过高效液相色谱方法进行分离检测；(4)计算分离出的残留青霉素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量。
作为本发明进一步的方案：步骤 (1) 中，所述离心条件是1100-2000r/min，离心条件为5-10min。
作为本发明进一步的方案：步骤 (1) 中，所述金属盐溶液为硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、硫酸锰溶液、硫酸镉溶液和醋酸铅溶液中的任意一种。
作为本发明再进一步的方案：在所述的衍生化反应体系中9-芴代甲氧苯酰氯与含羟基的青霉素药物的摩尔比为1∶5～10；pH值为7.5，反应温度为45℃，反应时间为60min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供一种反应快速高效、操作简便的动物性食品中青霉素残留量检测方法。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
本发明实施例中，一种青霉素残留量检测方法，包括如下步骤：(1) 将无青霉素的样品作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用1-10％的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为3-5，加入浓度为0.5-1.5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；(2)色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim-packVP-ODS，150×4.6mm，5μm；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40℃，流动相：0.5v/v％乙酸溶液：乙腈：甲醇＝75:20:5(V:V)，流速1.2mL/min，进样量20μL；（3）在偏碱性的磷酸二氢钾缓冲溶液中，用衍生化试剂 9-芴代甲氧苯酰氯在水浴条件下与含羟基的青霉素样品进行衍生化反应，生成青霉素的衍生产物，然后通过高效液相色谱方法进行分离检测；(4)计算分离出的残留青霉素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量。步骤 (1) 中，所述离心条件是1100-2000r/min，离心条件为5-10min。步骤 (1) 中，所述金属盐溶液为硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、硫酸锰溶液、硫酸镉溶液和醋酸铅溶液中的任意一种。在所述的衍生化反应体系中9-芴代甲氧苯酰氯与含羟基的青霉素药物的摩尔比为1：5～10；pH值为7.5，反应温度为45℃，反应时间为60min。
实施例1：
本发明青霉素残留量检测方法，包括如下步骤：(1) 将无青霉素的样品作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用1-10％的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为3，加入浓度为0.5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；(2)色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim-packVP-ODS，150×4.6mm，5μm；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40℃，流动相：0.5v/v％乙酸溶液：乙腈：甲醇＝75:20:5(V:V)，流速1.2mL/min，进样量20μL；（3）在偏碱性的磷酸二氢钾缓冲溶液中，用衍生化试剂 9-芴代甲氧苯酰氯在水浴条件下与含羟基的青霉素样品进行衍生化反应，生成青霉素的衍生产物，然后通过高效液相色谱方法进行分离检测；(4)计算分离出的残留青霉素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量。步骤 (1) 中，所述离心条件是1100r/min，离心条件为10min。步骤 (1) 中，所述金属盐溶液为硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、硫酸锰溶液、硫酸镉溶液和醋酸铅溶液中的任意一种。在所述的衍生化反应体系中9-芴代甲氧苯酰氯与含羟基的青霉素药物的摩尔比为1：5；pH值为7.5，反应温度为45℃，反应时间为60min。
本发明青霉素残留量检测方法，包括如下步骤：(1) 将无青霉素的样品作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用10％的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为5，加入浓度为1.5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；(2)色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim-packVP-ODS，150×4.6mm，5μm；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40℃，流动相：0.5v/v％乙酸溶液：乙腈：甲醇＝75:20:5(V:V)，流速1.2mL/min，进样量20μL；（3）在偏碱性的磷酸二氢钾缓冲溶液中，用衍生化试剂 9-芴代甲氧苯酰氯在水浴条件下与含羟基的青霉素样品进行衍生化反应，生成青霉素的衍生产物，然后通过高效液相色谱方法进行分离检测；(4)计算分离出的残留青霉素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量。步骤 (1) 中，所述离心条件是2000r/min，离心条件为10min。步骤 (1) 中，所述金属盐溶液为硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、硫酸锰溶液、硫酸镉溶液和醋酸铅溶液中的任意一种。在所述的衍生化反应体系中9-芴代甲氧苯酰氯与含羟基的青霉素药物的摩尔比为1：10；pH值为7.5，反应温度为45℃，反应时间为60min。
实施例3：
本发明青霉素残留量检测方法，包括如下步骤：(1) 将无青霉素的样品作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用8％的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为4，加入浓度为1.0g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；(2)色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim-packVP-ODS，150×4.6mm，5μm；SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40℃，流动相：0.5v/v％乙酸溶液：乙腈：甲醇＝75:20:5(V:V)，流速1.2mL/min，进样量20μL；（3）在偏碱性的磷酸二氢钾缓冲溶液中，用衍生化试剂 9-芴代甲氧苯酰氯在水浴条件下与含羟基的青霉素样品进行衍生化反应，生成青霉素的衍生产物，然后通过高效液相色谱方法进行分离检测；(4)计算分离出的残留青霉素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量。步骤 (1) 中，所述离心条件是1500r/min，离心条件为5-10min。步骤(1) 中，所述金属盐溶液为硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、硫酸锰溶液、硫酸镉溶液和醋酸铅溶液中的任意一种。在所述的衍生化反应体系中9-芴代甲氧苯酰氯与含羟基的青霉素药物的摩尔比为1：8；pH值为7.5，反应温度为45℃，反应时间为60min。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。