美花石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法与流程

技术特征：

1.一种美花石斛的化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述相关特征指纹图谱的建立方法包括：

1)对样本容量为n的样本分别进行色谱检测，获取以化学小分子成分夏佛托苷和/或柚皮素作为参照成分的检测数据，所述n取值为不小于10的整数；

2)对样本分别进行指纹图谱检测，获取以美花石斛的全化学成分的指纹图谱峰面积值；

3)以色谱数据中夏佛托苷和/或柚皮素的成分含量值作为响应变量，将指纹图谱中其它成分的峰面积值作为自变量建立分析模型，进行主成分提取和回归计算，建立小分子成分与指纹图谱线性回归模型，并得到回归方程；

4)通过变量相关系数指标(Correlation Coefficient)表征自变量对回归建模的贡献程度，对应的相关系数越大的自变量的重要程度越大，获得和小分子成分密切相关的指纹图谱特征峰群，建立化学小分子成分的相关特征指纹图谱。

2.如权利要求1所述的化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤1)所述的色谱检测还包括美花石斛样品处理方法：

所述样品处理方法包括：

精密称取美花石斛粉末，置100ml容量瓶中，每1g样品精密加体积比为75∶25的甲醇-水50ml，以250W功率、40kHz频率超声处理30分钟，冷却后过滤，将滤液旋蒸浓缩至干，每1g美花石斛粉末对应地用5ml体积比为75∶25的甲醇-水溶解，上清液过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得美花石斛的小分子成分含量测定样品。

3.如权利要求1或2所述的化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤1)所述的色谱检测的检测条件包括：

含量测定色谱条件：Grace Allitima C18色谱柱；流动相采用二元梯度洗脱系统，A相：0.2％醋酸-水，B相：乙腈；以波长290nm测定柚皮素，以波长334nm测定夏佛托苷，参比波长500nm，柱温30℃；流速1.0mL/min，进样量20μL；洗脱梯度为：

指纹图谱色谱条件：Grace Allitima C18色谱柱，优选为250mm×4.6mm，5μm规格的色谱柱；流动相：A相：0.4％乙酸+20mmol/L醋酸铵水溶液，B相：乙腈；梯度洗脱：0～12min：2％～15％B相，12～35min：15％～24％B相，35～45min：24％～36％B相，45～60min：36％～75％B相，60～80min：75％～95％B相；流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量20μL；检测波长280nm。

4.如权利要求1～3中任一项所述的化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤2)中所述的建立分析模型包括以下步骤：

a)当色谱数据呈现超高维情形时，采用以下SIS(Sure IndependenceScreening)方法通过式I将超高维降到d(d≤n)维；其中，d＝n或者

Mγ＝{1≤i≤p：|ωi|是前|γn|个比较大的}

式I

其中，M*＝{1≤i≤p：βi≠0}表示真模型中非零系数的下标集；s＝|M*|表示非零系数的个数；ω＝(ω1，ω2，...，ωp)^T＝X^Ty；当p＞n且对某个ξ有log p＝O(n^ξ)，M*与Mγ之间有以下联系：对于任意给定的γ∈(0，1)，ω的p个元素按绝对值从大到小排列并且定义；此时|γn|＜n，选取Mγ中下标对应的自变量；

b)在SIS方法降维之后，采用HTR(Hard Thresholding Rule)方法筛选变量。

5.根据权利要求4所述的化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述HTR方法是通过式II计算实现的：

其中，其中，p为样本的维数，n为样本容量；

β＝(β1，β2，...，βp)^T是一个p维的参数；

当p＞n时，存在其中λ≥0是一个惩罚参数；为惩罚函数；λ为调整参数，所述调整参数通过K折交叉验证法选择。

6.一种美花石斛质量评价的方法，其特征在于，通过根据权利要求1～5中任一项所述的方法获得的相关特征指纹图谱与供试品的指纹图谱进行相似度比对，相似度大于0.85为质量合格。

7.如权利要求6所述的美花石斛质量评价的方法，其特征在于，所述供试品的处理方法为：

精密称取美花石斛粉末，置100ml容量瓶中，每1g样品精密加体积比为75∶25的甲醇-水50ml，以250W功率、40kHz频率超声处理30分钟，冷却后过滤，将滤液旋蒸浓缩至干，每1g美花石斛粉末对应地用5ml体积比为75∶25的甲醇-水溶解，上清液过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得美花石斛的小分子成分含量测定样品。

8.如权利要求6或7所述的美花石斛质量评价的方法，其特征在于，所述供试品的色谱检测条件为：

Grace Allitima C18色谱柱，优选为250mm×4.6mm，5μm规格的色谱柱；流动相：A相：0.4％乙酸+20mmol/L醋酸铵水溶液，B相：乙腈；梯度洗脱；流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量20μL；检测波长280nm；所述梯度洗脱的洗脱条件为：

0～12min，2％～15％B相；

12～35min，15％～24％B相；

35～45min，24％～36％B相；

45～60min，36％～75％B相；

60～80min，75％～95％B相。

9.如权利要求6～8中任一项所述的美花石斛质量评价的方法，其特征在于，所述美花石斛为鲜品或干品。