一种ASE‑HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法与流程

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ase-hplc法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。
背景技术：
：《中国药典》2015年版一部制备供试品方法为：取本品约3g，剪成碎片，揉成絮状，取约2g，精密称定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷适量，加热回流6小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，再置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6小时提取液回收甲醇至适量，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。该方法萃取时间长达12小时，操作非常不便。专利申请号为“201510238784.6”的申请文件中所记载的制备供试品的方法为：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；将硅藻土和过筛后的粉末等重量比混合，装于10ml的萃取池中；在萃取池中加入正己烷静态萃取，正己烷萃取液舍弃；在萃取池中加入甲醇静态萃取，收集并采用甲醇定容至50ml，过滤，得到甲醇萃取液。也就是说，该对比文件采用正己烷使用ase萃取除杂。但是在该方法的使用过程中，杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。技术实现要素：针对上述不足，本发明旨在提供一种故除杂步骤同药典，仅使用ase替代提取过程以缩短前处理时间，同时保证了测定的准确率的ase-hplc法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。为了解决上述技术问题，本发明所提供的技术方案是这样的：一种ase-hplc法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ase萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ase萃取方法包括先在索氏提取器中采用三氯甲烷萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；步骤2：采用hplc法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤s1：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；步骤s2：装于索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6小时，三氯甲烷萃取液舍弃；步骤s3：将1g硅藻土和药渣混合，装于放有纤维滤膜的10mlase萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤s4：用甲醇萃取，收集并采用甲醇定容至10ml，过滤，得到甲醇萃取液。进一步的，所述的步骤s4中，萃取参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。进一步的，所述的ase萃取方法采用美国dionex公司的ase350快速溶剂萃取仪进行。进一步的，步骤2所述的hplc法的检测参数为：色谱柱为syncronisc18，柱温为40℃，流速为0.3ml/min，流动相为甲醇-水，检测波长为277nm。进一步的，所述的hplc法的检测仪器为agilent1290液相色谱仪。进一步的，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。进一步的，所述的流动相的甲醇-水的体积比为23:77。本发明所述的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1000。本发明的有益效果如下：本发明采用ase萃取方法萃取，通过采用三氯甲烷和甲醇分次萃取，先通过三氯甲烷萃取避免其他组分对检测的影响，使其他杂质的出峰不影响松脂醇二葡萄糖苷的出峰，同时避免了杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。另外通过甲醇精确高效的萃取松脂醇二葡萄糖苷，使测量更加准确。附图说明图1为松脂醇二葡萄糖苷对照品图谱图；图2为快速溶剂萃取样品图谱图；图3为药典方法样品图谱图；图4为浓度-峰面积进行线性回归。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。实施例1步骤1：取杜仲样品，剪成碎片，粉碎，过三号筛，取约1g，精密称定，按重量比1：1的比例加入硅藻土后混匀，装于10ml萃取池(装样前在萃取池底部加入适量的硅藻土，装样后用硅藻土填满萃取池)。步骤2：装于索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6小时，三氯甲烷萃取液舍弃，继续用甲醇进行静态萃取，回收甲醇提取液至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得甲醇萃取液，设备为美国dionex公司的ase350快速溶剂萃取仪；其中，甲醇进行静态萃取的参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。步骤3：将步骤2得到的甲醇萃取液采用hplc法进行检测，检测设备为agilent1290液相色谱仪；所述的hplc法的检测参数为：色谱柱为syncronisc18，3*100mm，3um；柱温为40℃，流速为0.3ml/min；流动相为体积比为23:77的甲醇-水；检测波长为277nm；进样量为1μl；理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1000。检测结果见图2。标准样品的检测：按照每1ml甲醇含0.6mg松脂醇二葡萄糖苷配置标准样品溶液，摇匀，即得；采用实施例1的步骤3所述的方法进行检测，检测结果见图1。按照药典的方法进行萃取并检测，检测结果见图3。按照下式计算：式中cr——对照品溶液浓度，单位为毫克每毫升(mg/ml)；ax——供试品的峰面积；ar——对照品峰面积。结果：线性关系：取松脂醇二葡萄糖苷对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，分别精密吸取该溶液0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、1.5μl进入lc测定，并依照上述步骤3所述的方法测定。以浓度-峰面积进行线性回归，详见图4。求回归方程：松脂醇二葡萄糖苷y＝1653.0034x+31.5609，r2＝1,松脂醇二葡萄糖苷在0.0611～0.9165μg内呈良好的线性关系，结果见表1：表1重复性试验：取相同批号的样品(批号：1511099)0.25g，共4份，精密称定，按ase提取方法提取供试品溶液，进样量为1μl，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中松脂醇二葡萄糖苷的含量见表2，rsd为2.4％，试验表明ase提取方法重复性良好。表2精密度试验：取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液(0.6mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积rsd为1.2％，表明仪器精密度良好。样品不同仪器提取结果详见表3，ase与药典提取结果比较见表4：表3表4ase提取溶剂的选择：《中国药典》采用三氯甲烷索式回流6小时除杂，耗材长，且三氯甲烷的毒性大，本实验曾采用正己烷使用ase萃取除杂，因杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，造成压力故障，故除杂步骤同药典，仅使用ase替代提取过程以缩短前处理时间。本实验提取溶剂参照《中国药典》采用甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间8min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果见表5，循环3次基本能提取完全。表5循环次数含量％10.15320.00730.001以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12