本发明涉及一种生物实验器械和方法，具体地说，涉及一种用于不贴壁细胞免疫染色的染色管及染色方法。
背景技术：
细胞免疫染色是指用标记(一般采用荧光、冷光物质或者酶标记)的抗体对细胞或组织内的相应的抗原进行定性、定位或定量检测。不贴壁细胞由于漂浮在液体中很难进行免疫染色，一般使用细胞甩片的方法固定于玻片上才能进行免疫组织化学或免疫荧光染色，而甩片过程会影响细胞的自然形态，可能导致染色结果不准确。
中国专利文献cn102288471a，公开日2011.12.21，公开了一种悬浮细胞的免疫荧光染色方法，所述的染色方法包括以下步骤：先收集细胞于离心管中，800g离心收集细胞，然后分别加入多聚甲醛固定、triton-x100通透、1％bsa封闭，再依次加入一抗、二抗孵育，以上每步操作后都采用800g离心的方法进行洗涤，最后dapi染色后，滴至载玻片上封片观察。该发明优点在于免疫荧光染色的过程均在离心管中进行，避开了悬浮细胞难于爬片及试验过程容易脱落的问题，染色结果较好。
然而本申请发明人在长期的实验过程中，经过细致观察和总结，发现上述方法仍然存在一些弊端：1)离心过程中，细胞和处理溶液有较长时间的接触，处理溶液过长时间接触可能对染色结果产生不良影响；2)离心后处理溶液并不能被完全倒除，残余的处理溶液可能影响下一步的处理效果；3)经离心后细胞全部聚集于锥状的离心管管底，加入处理溶液后细胞很难全部与处理溶液充分接触；4)在移除处理溶液的过程中，难以保证细胞不被带出，造成细胞数量的损失；5)细胞由dapi染色后需要转移到载玻片上封片观察，操作繁琐。以上弊端将直接影响染色效果和结果的准确性，也给实验人员带来不便。
综上所述，亟需一种新的适用于不贴壁细胞的染色方法，以期获得更准确的染色结果和节省人力。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于不贴壁细胞免疫染色的染色管。
本发明的再一的目的是，提供一种用于不贴壁细胞的免疫染色方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种用于不贴壁细胞免疫染色的染色管，设有外管、内管和密封盖；所述的外管设有外管管体；所述的内管设有内管管体、支撑台和滤膜；所述的内管管体底面为开口状，内管管体包括隔离管体和位于隔离管体下方的染色管体，且内管管体的侧壁上设有通气窗；所述的支撑台位于内管管体的上端端面上，且外径大于内管管体的外径；所述的滤膜孔径为0.5-1.5μm且外缘固定在内管管体的内壁上；所述的密封盖设有连接部和盖体，所述的连接部一端连接外管，另一端连接盖体；装配状态下，所述的内管管体套接在外管管体内，所述的支撑台由外管管体的上端面支撑住，所述的隔离管体使染色管体与外管管体之间留有间隙，所述的通气窗连通内管管体与所述间隙，所述的盖体卡扣在内管管体上。
所述的透气窗设于隔离管体上。
所述的隔离管体为由上至下直径逐渐缩小的圆台柱状。
所述的透气窗围绕内管的纵向中心轴呈对称辐射状排布。
所述的外管管体的上端端面设有支撑台面，所述的支撑台面的外径大于外管管体的外径；装配状态下，所述的支撑台由所述支撑台面支撑住。
所述的外管管体上段为圆柱状，下段为圆锥状。
所述的连接部上设有弯折部。
所述的盖体上设有手柄。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
一种用于不贴壁细胞的免疫染色方法，所述的免疫染色方法使用了如上任一所述的染色管。
所述的免疫染色方法包括以下步骤：
a)将培养基中悬浮的细胞加入到内管管体中，离心去除培养基，移除废液；
b)向内管管体中加入固定液，固定细胞，完毕后离心去除固定液，移除废液；
c)向内管管体中加入triton溶液，打孔穿透细胞，完毕后离心去除triton溶液，移除废液；
4)然后封闭、一抗孵育、一抗洗涤、二抗孵育、二抗洗涤、dapi复染，每一步处理后均离心去除废液；
5)免疫染色完成后，拿出内管，直接置于细胞培养板，在细胞培养板中加入适量pbs缓冲液或甘油封片剂，使之覆盖内管底部的滤膜，放置在倒置显微镜下观察染色。
本发明优点在于：
1、使用本发明的染色管和染色方法对不贴壁细胞进行免疫荧光染色，能够避免常规染色方法甩片过程影响细胞自然形态的弊端，也可以避免cn102288471a所公开的染色方法的种种弊端，离心过程中，细胞和处理溶液在高速状态下接触时间短，溶液处理后去除彻底，同时避免了去除处理溶液过程中细胞的损失，特别适用于微量珍贵细胞的染色，离心后细胞不会过于聚集，能够与后续步骤的处理溶液充分接触，染色后可以直接观察，染色效果好，结果准确性高，操作简单，节省人力；
2、本发明的染色管结构简单，成本低廉，便于推广应用。
附图说明
图1是本发明的染色管结构示意图。
具体实施方式
本申请发明人在长期的实验过程中，经过细致观察和总结，发现中国专利文献cn201110211736.x所公开的染色方法存在着如前所述的种种弊端，基于此设计了本发明的新的染色方法及配套的染色管。
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
附图中涉及的附图标记和组成部分如下所示：
1.外管，11.外管管体，12.支撑台面
2.内管，21.内管管体，211.隔离管体，212.染色管体，22.支撑台，23.滤膜
3.密封盖，31.连接部，311.弯折部，32.盖体，33.手柄
4.通气窗
实施例1
请参见图1，图1是本发明的染色管结构示意图。所述的染色管设有外管1、内管2和密封盖3。所述的外管1设有外管管体11和支撑台面12；所述的外管管体11上段为圆柱状，下段为圆锥状；所述的支撑台面12位于外管管体11的上端端面上，其外径大于外管管体11的外径。所述的内管2设有内管管体21、支撑台22和滤膜23；所述的内管管体21底面为开口状，内管管体21包括隔离管体211和染色管体212，所述的隔离管体211位于染色管体212的上方，隔离管体211为由上至下直径逐渐缩小的圆台柱状，且侧壁上设有通气窗4，所述的通气窗4有四个，围绕内管2的纵向中心轴呈对称辐射状排布，所述的染色管体212为圆柱状；所述的支撑台22位于内管管体21的上端端面上，其外径大于内管管体21的外径；所述的滤膜23与内管管体21的底面齐平，且外缘固定在内管管体21的内壁上，滤膜23的孔径为0.5-1.5μm。所述的密封盖3设有连接部31、盖体32和手柄33；所述的连接部31的一端连接在外管1的支撑台面12的侧壁上，连接部31上设有弯折部311，连接部31的另一端连接盖体32；所述的手柄33连接在盖体上，并向外部延伸。
装配状态下，所述的内管管体21套接在外管管体11内，所述的支撑台22位于支撑台面12上方并由支撑台面12支撑住，进而使得内管2不会掉入外管1内部；所述的隔离管体211使染色管体212的外壁与外管管体11的内壁之间留有间隙，所述的通气窗4使内管管体21的内部与所述间隙相连通；所述的盖体32卡扣在内管管体21上，密封内管管体21的顶面。
需要说明的是：所述的外管管体11的下段为圆锥状，更便于废液被收集到底部。所述的支撑台面12用于支撑内管2的支撑台22，支撑台面12外径大于外管管体11的外径，能够形成较大的上表面，增加平衡稳固的支撑效果。所述的滤膜23孔径为0.5-1.5μm，细胞无法透过这层膜，液体在静止状态时由于表面张力也无法渗过这层膜，当在离心力作用下，液体得以透过这层膜掉入外管1管底，达到移除液体而不损失细胞的目的。滤膜23的材质可以是pe等。滤膜23与内管管体21可以是一体成型，也可以通过热塑等工艺将其边缘固定在内管管体21的下端并保证边缘呈密封状态。所述的染色管体212用于盛放细胞和染色用的溶液。所述的隔离管体211设计成由上至下直径逐渐缩小的圆台柱状，且侧壁上设通气窗4，作用是使染色管体212的外壁与外管管体11的内壁之间形成间隙，由通气窗4连通内管管体21的内部与所述间隙，更便于溶液被快速离心至外管1中，减少溶液在高速旋转状态下与细胞的接触时间。所述的通气窗4不仅限于四个，但优选为对称分布，可防止离心不平衡，透气窗4不仅限于设在隔离管体211上，也可以设在染色管体212上，但优选设在隔离管体211上，能防止加液时液体经透气窗4洒落到内管管体21外部。所述的弯折部311可以预塑成可弯折状态，如弯折部311的厚度较薄，可便于密封盖3的开合，且避免盖体32在连接部31的拉伸作用下不能平衡地卡扣在内管管体21上。所述的手柄33用于拇指和食指把持施力以打开或闭合密封盖3。
实施例2
一种不贴壁细胞的免疫染色方法，其应用实施例1所述的染色管完成免疫染色操作。更具体地，所述的免疫染色方法包括以下步骤：
1)将培养基中悬浮的细胞加入到内管管体21部分，低速离心去除培养基，移除废液；
2)向内管管体21中加入固定液，固定细胞，完毕后低速离心去除固定液，移除废液；
3)向内管管体21中加入triton溶液，打孔穿透细胞，完毕后低速离心去除triton溶液，移除废液；
4)然后封闭、一抗孵育、一抗洗涤、二抗孵育、二抗洗涤、dapi复染，以此类推，每一步均低速离心去除废液；
5)免疫染色完成后，去除内管2，直接置于细胞培养板，在细胞培养板中加入适量pbs缓冲液或甘油封片剂，使之覆盖内管2底部的滤膜23，放置在倒置显微镜下观察染色即可。
使用本发明的染色管和染色方法对不贴壁细胞进行免疫染色，能够避免常规染色方法中甩片过程影响细胞自然形态的弊端，也可以避免cn102288471a所公开的染色方法的种种弊端，离心过程中，细胞和处理溶液在高速状态下接触时间短，处理溶液去除彻底，同时避免了去除处理溶液过程中细胞的损失，特别适用于微量珍贵细胞的染色，离心后细胞不会过于聚集，能够与后续步骤的处理溶液充分接触，染色后可以直接观察，染色效果好，结果准确性高，操作简单，节省人力，且本发明的染色管结构简单，成本低廉，便于推广应用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。