血细胞分析仪用溶血剂及其制备方法与流程

【
技术领域：
】本发明涉及一种血细胞分析仪用溶血剂及其制备方法。
背景技术：
：由于临床上的需要，五分类仪器的需求越发明显，大多地方医疗机构都已经趋向使用五分类仪器，发达地区的乡镇医疗机构都已经投入使用。近几年国内市场血细胞分析仪厂家逐渐增多，如迈瑞、迪瑞、帝迈、深蓝、蓝韵、优利特、特康…等等厂家纷纷推出五分类仪器，激光组件设计大多相似，不同于目前主流的多角度激光和荧光染色技术，大多都是仿照国外较早设计的结构，采用高低角度激光，有成本低，结构简单，调试容易等特点，五分类仪器及配套试剂的组成及制备方法更是多种多样，由于仪器设计原理基本一致，故反应体系也非常接近，个别厂家稀释比例不同，或者采样量不同，稀释比例却一致，个中就出现试剂浓度会有点差异，需要微调表面活性剂浓度。本发明提出的配方分两步处理细胞，首先a液使白细胞膨胀球形化和打孔，破坏红细胞以免造成计数干扰，b液作为反应终止剂，加入后会导致细胞收缩，加强对红细胞的破坏，此时样品就会被送到激光流动池进行检测。该方法试剂无需加入染色剂，更加简单，可以适用于上述大部分国产激光法五分类仪器上，个别组份浓度适当调整就可以完全满足多种品牌仪器的需要。技术实现要素：本发明的目的是针对现有不同厂家试剂配方不同，提供了一种活性稳定，配料简单的血细胞分析仪用溶血剂，其适用于大部分国产激光法五分类仪器，并符合国家及行业要求、又能准确地通过血细胞分析仪测试血液中各细胞参数。本发明的另一目的是提供了细胞分析仪用溶血剂的其制备方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种血细胞分析仪用溶血剂，包括a、b液，它们的原料均包括抗凝剂、缓冲液、表面活性剂、防腐剂、渗透压补偿剂和工艺用水；所述a液的ph值为4.0～7.0；所述b液的ph值为7.0～10.0。在对上述血细胞分析仪用溶血剂的改进方案中，所述抗凝剂为edta二钠或edta二钾；所述a液的缓冲液为柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液或酸氢二钠－柠檬酸缓冲液；所述b液的缓冲液为碳酸钠－甲酸缓冲液或甘氨酸－氢氧化钠缓冲液；所述表面活性剂是十二烷基三甲基氯化铵、乙二醇苯醚中的一种或两种；所述防腐剂为异噻唑啉酮；所述渗透压补偿剂为氯化钠或硫酸钠。在对上述血细胞分析仪用溶血剂的改进方案中，在每制备1000g的a液中，所需的原料组成有：edta二钠0.1～1％，柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液或磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液0.03～5％，十二烷基三甲基氯化铵0.01～10％，乙二醇苯醚0.1～1％，异噻唑啉酮0.05～0.1％，氯化钠0.1～1％，其余加入工艺用水；在每制备1000g的b液中，所需的原料组成有：碳酸钠－甲酸缓冲液或甘氨酸－氢氧化钠缓冲液0.03～5％，十二烷基三甲基氯化铵0.01～10％，乙二醇苯醚0.1～1％，异噻唑啉酮0.05～0.1％，氯化钠1～2％，其余加入工艺用水。一种血细胞分析仪用溶血剂的制备方法，制备所述a、b液的步骤均包括：(1)配液：将抗凝剂、缓冲液、表面活性剂、防腐剂、渗透压补偿剂倒入装有相当于处方量一半的水的配料桶中，用搅拌器或棒搅拌使物料溶解，溶解后加足处方量的水混合；(2)过滤：物料完全溶解后，用过滤器，开启泵过滤即得。在对上述血细胞分析仪用溶血剂的制备方法的改进方案中，所述过滤器的滤芯孔径为0.1μm微孔滤膜。与现有技术相比，本发明的有益效果是：鉴于目前大部分国产激光法五分类仪器的设计原理基本一致，本发明提出配方参考相同的细胞处理原理，设计出使白细胞膨胀成球形化和打孔、破坏红细胞以免造成计数干扰的a液，和使反应终止、加入后会导致细胞收缩、加强对红细胞的破坏的b液，经过a、b液处理后的样品被送到激光流动池无需加入染色剂便可进行检测，并且生产工艺简单，方便操作，只需过滤除菌，无毒，浓度低，对环境影响小，用新鲜人血或质控品在通过血细胞分析仪测试或人工计数测试时，发现其重复性和准确性有较好的效果。下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步的详细描述：【附图说明】图1是实施例一制备出来的溶血剂在测试时的白细胞散点图；图2是实施例二制备出来的溶血剂在测试时的白细胞散点图；图3是实施例三制备出来的溶血剂在测试时的白细胞散点图；图4是实施例四制备出来的溶血剂在测试时的白细胞散点图；图5是实施例五制备出来的溶血剂在测试时的白细胞散点图；图6是实施例六制备出来的溶血剂在测试时的白细胞散点图。【具体实施方式】一种血细胞分析仪用溶血剂，包括a、b液，它们的原料均包括抗凝剂、缓冲液、表面活性剂、防腐剂、渗透压补偿剂和工艺用水(其是经过离子交换处理的水)；所述a液的ph值为4.0～7.0；所述b液的ph值为7.0～10.0，其中：抗凝剂为阻止血液凝固的物质，通常用edta二钠、edta二钾；缓冲液只要可以使试剂的ph值保持在所希望的范围内即可，ph值为4.0～7.0则选柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液(即由柠檬酸、柠檬酸钠组成缓冲液对)、磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液(即由磷酸氢二钠、柠檬酸组成缓冲液对)为宜，ph值为7.0～10.0则选碳酸钠－甲酸缓冲液(即由碳酸钠、甲酸组成缓冲液对)、甘氨酸－氢氧化钠缓冲液(即由甘氨酸、氢氧化钠组成缓冲液对)为宜；表面活性剂为增加细胞膜的通透性，甚至溶解细胞膜，可选十二烷基三甲基氯化铵、乙二醇苯醚的一种或两种；防腐剂为使试剂稳定不变质，通常用异噻唑啉酮；渗透压补偿剂是为了保持的细胞的基本形状方便检测，通常用无机盐类，如氯化钠、硫酸钠。本发明血细胞分析仪用溶血剂制备方法，包括如下步骤：1.配液：将抗凝剂、缓冲液、表面活性剂、防腐剂、渗透压补偿剂倒入已加适量工艺用水(约为处方量一半，)的配料桶中，用搅拌器或棒搅拌使物料溶解，溶解后加足处方量的水混合；2.过滤：物料完全溶解(肉眼看不见微粒)后，用0.1μm微孔膜筒式过滤器，开启泵过滤即得。比如，当分别制配1000g的a液和b液时：所述的a液的原料组成有：edta二钠0.1～1％，柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液或磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液0.03～5％，氯化钠0.1～1％，十二烷基三甲基氯化铵0.01～10％，乙二醇苯醚0.01～5％，异噻唑啉酮0.05～0.1％，加入工艺用水使最后成1000g溶液。所述的b液的原料组成有：氯化钠1～2％，碳酸钠－甲酸缓冲液或甘氨酸－氢氧化钠缓冲液0.03～5％，十二烷基三甲基氯化铵0.01～10％，乙二醇苯醚0.01～5％，异噻唑啉酮0.05～0.1％，加入工艺用水使最后成1000g溶液。本发明性能测定：1.外观应为澄清液体，不得有沉淀、颗粒和絮状物。2.在温度25℃条件下，用酸度计测试3次，计算测试结果的平均值，平均值应在±0.5。3.吸收峰波长按溶血剂适配的血液分析仪所规定的混合比例，加入适配稀释剂、抗凝血及被检溶血剂，混匀制成样本；使用波长范围至少在450nm～800nm，扫描精度优于土0.5nm的分光光度计测试样本，在450nm～750nm波长范围内扫描，所得吸收曲线的最大吸收峰波长λmax，特征吸收峰波长λmax应在540±10nm范围内。4.空白计数使用适配的血液分析仪，做本底检查或先将分析仪内部原有试剂排空，引入待测试剂，然后将待测试剂作为样本在分析仪上连续进行3次测试，取3次测试结果中的最大值作为空白计数，就符合下表要求测试项目要求备注白细胞计数(wbc)≤0.5×109/l-5.准确性按照血液分析仪的操作说明书，以参考物质或至少20份定值血作为样本，在分析仪上用待测试剂连续测试3次，计算测试结果的平均值，并计算平均值与标称值的相对偏差，结果应符合下表的要求。注：定值血是指经校准良好的仪器测量的新鲜血样，有相关参考物质时优先选择。测试项目要求白细胞计数(wbc)相对偏差在士7.5％范围内6.白细胞散点图按照血液分析仪的操作说明书，溶血剂作用于正常人新鲜血后，所得的白细胞散点图应符合下列要求：a)具备两个或两个以上白细胞分类散点群；b)符合适用血液分析仪相应的白细胞分类散点群性状及散点图标志。7.批间差7.1ph的批间差△ph应不大于1.0；7.2吸收峰波长的批间差△λmax不大于10nm。8.稳定性溶血剂的有效期为12个月，取到效期后的试剂进行测试，结果应符合上述性能测试1～7的要求。下面根据实施例详细描述本发明，本发明的目的和效果将变得更加明显。实施例1：1)、配液：a液：按重量或体积分别取1g的乙二胺四乙酸二钠、0.25g的柠檬酸、0.25g的柠檬酸钠、3g的乙二醇苯醚、0.25g的十二烷基三甲基氯化铵、3g的氯化钠、0.5g的异噻唑啉酮、加入工艺用水使最后成1000g溶液；b液：按重量或体积分别取14g的氯化钠、1g的碳酸钠、0.28ml的甲酸、3g的乙二醇苯醚、0.25g的十二烷基三甲基氯化铵、0.5g的异噻唑啉酮、加入工艺用水使最后成1000g溶液。2)、过滤：物料完全溶解(肉眼看不见微粒)后，用0.1μm微孔膜筒式过滤器，开启泵过滤即得。实施例1制备的溶血剂作用于正常人新鲜血后，所得的白细胞散点图如图1所示，各类细胞分群明显，neut的细胞图形稍向右上倾斜，虽不够平整，但都能落入定标框内，因而符合要求。实施例2：制备步骤同实施例1实施例2制备的溶血剂作用于正常人新鲜血后，所得的白细胞散点图如图2所示，各类细胞分群明显，neut的细胞图形稍向右上倾斜(即稍偏定标框的右侧)，但还算平整，这些细胞都能落入定标框内，因而符合要求。实施例3：制备步骤同实施例1实施例3制备的溶血剂作用于正常人新鲜血后，所得的白细胞散点图如图3所示，各类细胞分群明显，neut的细胞图形平整，虽稍偏定标框的左下侧，但都能落入定标框内，因而符合要求。实施例4：制备步骤同实施例1实施例4制备的溶血剂作用于正常人新鲜血后，所得的白细胞散点图如图4所示，各类细胞分群明显，neut的细胞图形稍向右上倾斜(即稍偏定标框的右侧)，但还算平整，都能落入定标框内，因而符合要求。实施例5：制备步骤同实施例1实施例5制备的溶血剂作用于正常人新鲜血后，所得的白细胞散点图如图5所示，各类细胞分群明显，虽neut的细胞图形稍向右上倾斜(稍偏定标框的上侧)，不够平整，但都能落入定标框内，因而符合要求。实施例6：制备步骤同实施例1实施例6制备的溶血剂作用于正常人新鲜血后，所得的白细胞散点图如图6所示，各类细胞分群明显，都能落入定标框内。溶血剂的主要性能参数按照血液分析仪的操作说明书，以新鲜血作为样本，在分析仪上用待测试剂与原厂试剂对照，计算相对偏差，从血细胞的wbc(白细胞分类计数)的相对偏差，从而看出实施效果：测试的各项参数neut％lymph％mono％eo％baso％实施例140.643.88.17.10.4原厂试剂41.243.87.97.20.4相对偏差0.730.571.250.700实施例273.714.58.23.10.5原厂试剂73.214.98.23.20.5相对偏差0.341.3601.590实施例372.022.03.32.30.3原厂试剂73.121.13.22.30.3相对偏差0.762.091.5400实施例468.022.54.94.30.3原厂试剂67.622.95.04.20.3相对偏差0.290.881.011.180实施例587.96.93.61.50.1原厂试剂87.57.13.71.60.1相对偏差0.231.431.373.230实施例670.422.44.42.50.3原厂试剂71.221.34.62.60.3相对偏差0.562.522.221.960综上所述可得：1.本发明简化了工艺流程，工艺简单，相对同类产品均有一个组份加入染料，而染料用量较少，称取误差大则会导致浓度控制不一而影响分析效果，本发明则无需加入染色剂，只需过滤除菌，无毒，浓度低，对环境影响小，该项目一旦用于生产，同样可以大大降低同类产品的生产成本，更好地缓解国内市场供求紧张的局面。2.鉴于目前大部分国产激光法五分类仪器的设计原理基本一致，本发明提出的配方参考相同的细胞处理原理，设计出使白细胞膨胀成球形化和打孔、破坏红细胞以免造成计数干扰的a液，和使反应终止、加入后会导致细胞收缩、加强对红细胞的破坏的b液，经过a、b液处理后的样品被送到激光流动池无需加入染色剂便可进行检测，可以适用于上述大部分国产激光法五分类仪器上，个别组份浓度适当调整就可以完全满足多种品牌仪器的需要。当前第1页12