一种阳性控制液及其配置方法与流程

本发明涉及本发明属于医用诊断类物品技术领域，涉及一种稳定的质控品，特别是涉及一种大便隐血阳性质控品及其配置方法。

背景技术：

粪便的隐血(fob/fecaloccultblood)检测，是指消化道出血量很少，肉眼不见血色，而且少量红细胞又被消化分解以致显微镜下也无从发现的出血状况。隐血消化道少量出血可不引起大便颜色改变，只有专门的实验才能确定。凡是消化道疾病引起的少量出血，均可有隐血便，因此隐血检测对于诊断多种消化道出血性疾病都有重要价值，是普查筛选消化道疾病的有效手段，隐血实验已经成为人们不断深入研究的热点。

大便隐血的主要检测方法有化学法和免疫学方法：

化学法种类繁多，常用的有邻甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、匹米拉洞法、愈创木脂法。其实验设计原理都是基于人血红蛋白中含铁血黄素部分有催化过氧化物分解的作用，能催化试剂中的过氧化物，分解释放新生态的氧，氧化上述色原物质呈色，呈色的深浅反应血红蛋白的多少。但是化学法缺乏准确性和特异性。外源食品中如含有血红蛋白、肌红蛋白，其血红素的作用均可以使实验呈阳性，大量生食蔬菜中含有活性的植物过氧化物酶也可以催化过氧化物分解，出现假阳性反应。血液在肠道中停留过久，血红蛋白变性，会出现与病情不符的阴性结果。此外，如果病人服用大量的维生素c或者其他具有还原性的药物，可将过氧化物还原，从而不能氧化色原物质，也可能使实验出现假阴性。

免疫法主要包括免疫单抗体法、免疫斑点法、乳胶免疫化学凝聚法、放射免疫扩散法、反向间接血凝法、胶体金法。在免疫胶体金法中，利用抗人血红蛋白的单克隆抗体与人血红蛋白可以高度特异结合的特点来检测粪便隐血。此法不受动物的血、肉、含过氧化物酶的新鲜蔬菜、铁剂、维生素c的影响，灵敏度高，反应迅速。胶体金免疫试纸条具有体积小，携带方便、不需要仪器设备、操作简单、可以现场检测、3～10min出结果且结果可以肉眼判读等多种优点。

虽然免疫法检测fob具有众多优点，但是用于检查fob的试纸条成品的储存条件严苛，其需要在一定的温度范围内能保证其有效性。比如，当在较高温的情况下，像非洲地区，部分试纸条会失效，从而导致检测过程中试纸条不出现检测线，呈现出假阴性。因而，需要监控试纸条的有效性，防止假阴性出现，因此，需要提供阳性标准品对试纸条进行有效性检测。

然而，目前人血红蛋白fob抗原的存储和运输主要是通过冷冻的方式进行，在需要使用时进行解冻。而多次对人血红蛋白的冷冻和解冻会导致破裂，不适宜与试纸条一起储存、运输和对试纸条的检测。

技术实现要素：

本发明提供了一种针对fob检测的阳性控制液，解决了fob抗原的储存和运输问题，并且，该阳性控制液的检测效果显著，配置方法简单。

本发明提供的一种阳性控制液，用于粪便隐血的试纸有效性检测，其中，该阳性控制液包括fob抗原、离子型盐类化合物和表面活性剂。其中，离子型盐类化合物包括硫酸盐类，硝酸盐类，氯盐类，碳酸盐类等等，由钠、钾、镁、钙等为阳离子形成的离子型盐类化合物。

优选的，该阳性控制液包括fob抗原、钠离子为阳离子的离子型盐类化合物和表面活性剂。其中，钠离子为阳离子的离子型盐类化合物包括氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、碳酸钠等等钠盐类化合物。

优选的，该阳性控制液包括fob抗原、氯离子为阴离子的离子型盐类化合物和表面活性剂。其中，氯离子为阴离子的离子型盐类化合物包括氯化钠、氯化钾，氯化锂，氯化钙，氯化镁等。

一些优选的实施方式中，每1ml该阳性控制液包括如下组分：

800～1200ngfob抗原

40～80mgnacl

0.8～1.2mg表面活性剂

余量h2o。

一些优选的实施方式中，表面活性剂为非离子型表面活性剂。

更为优选的实施方式中，所述表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的至少一种。

一些优选的实施方式中，fob抗原为血红蛋白或转铁蛋白。

另一方面，还提供本发明中该用于粪便隐血的试纸有效性检测阳性控制液的配置方法，其中，包括如下步骤：

在容器中加入不超过需要配置阳性控制液量的98％的纯化水，按照

40～80mg/ml的配比加入nacl，常温下搅拌至nacl溶解；

按照0.8～1.2mg/ml的配比加入表面活性剂，搅拌至溶解；

再按照800～1200ng/ml的配比加入fob抗原；

最后用纯化水定容至需要配置阳性控制液量。

一些优选的实施方式中，fob抗原为血红蛋白或转铁蛋白。

更为优选的实施方式中，配置阳性控制液时加入的fob抗原具体为加入人血红蛋白母液或人转铁蛋白母液。

一些具体的实施方式中，加入的人血红蛋白母液浓度为1mg/ml。

一些优选的实施方式中，表面活性剂为非离子型表面活性剂。

更为优选的实施方式中，加入表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的至少一种。

有益效果

本发明提供的用于fob检测中的一种阳性控制液，检测简单有效，并且该阳性控制液配置方法简单易操作。该阳性控制液相比较之前的冷冻方式方便存储和运输，特别适用于随试纸条运输和对试纸条的质检。

附图说明

图1为配方①55℃53天5min检测结果，加速稳定性测试显示在55℃储存53天，能够保持阳性反应；

图2为配方②55℃53天5min检测结果，加速稳定性测试显示在55℃储存53天，能够保持阳性反应；

图3为标准色卡示意图。

具体实施方式

在以下的详细描述中，它以举例说明本发明可能实行的特定具体方案的方式来说明。应当理解，此处所描述打的具体实施例用于解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供的一种阳性控制液，包括fob抗原、离子型盐类化合物和表面活性剂。具体包括：800～1200ng/mlfob抗体，40～80mg/mlnacl溶液，以及0.8～1.2mg/ml表面活性剂。即：每1ml该阳性控制液包括的组分为：800～1200ngfob抗原，40～80mgnacl，0.8～1.2mg表面活性剂，余量为h2o。其中，表面活性剂为非离子活性剂，具体的，表面活性剂采用吐温，更为具体的，表面活性剂选用吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的一种。优选的，也可以选择吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的两种或多种混合使用。

配置该阳性控制液时，首先在容器中加入不超过待配置阳性控制液量的98％的纯化水，然后按照40～80mg/ml的配比加入nacl，常温下搅拌至nacl溶解；再按照0.8～1.2mg/ml的配比加入表面活性剂，搅拌至溶解；再按照800～1200ng/ml的配比加入fob抗原；最后用纯化水定容至需要配置阳性控制液量。其中，表面活性剂选择吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的一种用于配置。也可以选择吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的两种或多种混合使用。此外，fob抗原可以通过加入人血红蛋白母液的方式获得。一些实施例中，加入一定浓度的人血红蛋白母液，通过该浓度换算出800～1200ng/ml的fob抗原即可。一些具体的实施例中，人血红蛋白母液的浓度为0.1～5mg/ml。更为具体的实施例中，人血红蛋白母液的浓度为1mg/ml。

下面就一些具体的实施例来说明阳性控制液的配置方法，以及阳性控制液的性能验证。

实施例1：配置1000ml的含有1000ng/mlfob抗体的阳性质控液(50gnacl)

先在容器中加入800ml纯化水，再加入50gnacl搅拌至溶解，然后加入1000mg吐温-20搅拌至溶解，再加入1ml浓度为1mg/ml的人血红蛋白母液，最后用纯化水定容至1000ml。

实施例2：配置1000ml的含有1000ng/mlfob抗体的阳性质控液(60gnacl)

先在容器中加入800ml纯化水，再加入60gnacl搅拌至溶解，然后加入1000mg吐温-20搅拌至溶解，再加入1ml浓度为1mg/ml的人血红蛋白母液，最后用纯化水定容至1000ml。

实施例3：配置1000ml的含有800ng/mlfob抗体的阳性质控液(40gnacl，800mg吐温-40)

先在容器中加入800ml纯化水，再加入40gnacl搅拌至溶解，然后加入800mg吐温-40搅拌至溶解，再加入1ml浓度为0.8mg/ml的人血红蛋白母液，最后用纯化水定容至1000ml。

实施例4：配置1000ml的含有1200ng/mlfob抗体的阳性质控液(40gnacl，800mg吐温-60)

先在容器中加入800ml纯化水，再加入40gnacl搅拌至溶解，然后加入800mg吐温-60搅拌至溶解，再加入0.6ml浓度为2mg/ml的人血红蛋白母液，最后用纯化水定容至1000ml。

实施例5：配置1000ml的含有1200ng/mlfob抗体的阳性质控液(80gnacl，1200mg吐温-80)

先在容器中加入800ml纯化水，再加入80gnacl搅拌至溶解，然后加入1200mg吐温-80搅拌至溶解，再加入1.2ml浓度为1mg/ml的人血红蛋白母液，最后用纯化水定容至1000ml。

实施例6：对实施例1和2配置的阳性控制液进行稳定性实验

将实施例1配好的阳性控制液①和实施例2配好的阳性控制液②分别分装在3mlbuffer甁里，每瓶分装1ml，将分装好的阳性控制液分别在55℃和45℃条件下储存，两种配方①和②在每个时间点重复检测8人份fob抗体检测试纸条(试纸条序号分别为1、2、3、4、5、6、7、8)，等待5分钟记录试纸条检测结果。通过标准色卡比对读数，将检测试纸条的检测结果线与标准色卡进行对比：线条深度大于等于g7时表示阳性。

其中：

1.标准色卡:标准色卡的比色范围在0-10之间，即g0-g10，颜色从无到有，颜色深度依次递增，见图3所示。

2.

实验时间点见下表：

实验结果见下表：

55℃：

45℃：

结论：

由上述的表格数据可以看出，该阳性控制液在45℃条件下存放60天后，以及在55℃条件下存放53天后，对fob检测试纸条的阳性检测均有效(呈阳性)，并具有稳定性和一致性。

55℃条件下存放53天相当于常温环境下存放2年，即该阳性控制液在常温环境下存放2年仍然有效。