呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒的制作方法

本实用新型涉及生物医学
技术领域：
，尤其涉及一种呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒。
背景技术：
：呼吸道感染是全球范围内临床最常见的疾病之一，据全球疾病死亡率调查，急性呼吸道感染造成的死亡人数位居所有疾病造成死亡数的第3位，尤其下呼吸道感染是造成婴幼儿残疾和死亡的主要原因。可引起呼吸道感染的病原体十分复杂，其中包括细菌、病毒、支原体、衣原体等，其临床表现与治疗措施存在差异。目前市场上常见的用于呼吸道病原体检测的产品主要有胶体金检测、ELISA检测等检测形式的产品。胶体金检测是将抗原或抗体结合在硝酸纤维素膜上，并将标记有抗体或抗原胶体金干燥在结合垫上，若样品含有特异性抗体或抗原可先于胶体金上的抗原或抗体结合，并一同向吸水纸的方向层析，当层析至检测线时，再与检测线上的抗原或抗体结合，最后通过颜色判断阴阳性。胶体金主要是进行单人份单项目检测，无法做到单人份多项目检测即检测单通道，同时胶体金检测相关项目的灵敏度较低，以上原因都限制了该类产品在临床中的使用。而ELISA检测则是将抗原或抗体结合于聚苯乙烯板孔内，此时抗原或抗体仍可具有免疫活性，可进行抗原抗体反应，配合酶催化底物呈色反应(灵敏度高)，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定性或定量分析。ELISA的检测形式虽然可以做到多人份检测，但是该类产品同样是单通道单项目检测，并且需要专业的操作人员进行临床检测以及相关配套的仪器如酶标仪、洗板机、水浴箱等进行协作；同时，该类产品检测的底物由A/B液组成，操作麻烦，混合后易失效，阴性对照非特异性显色较强、信噪比较低；最后限制该类产品使用的是ELISA检测需要耗时将近3个小时，试剂反应慢，在实际的临床使用中导致诸多不便。基于此，有必要设计一种可快速检测呼吸道病原体IgM抗体的试剂盒。技术实现要素：有鉴于此，为解决上述问题，本实用新型提供了一种呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒。所述呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒中的呼吸道病原体抗原膜条包被有10种呼吸道病原体抗原，可实现呼吸道病原体十项联合检测，检测快速且易于自动化。本实用新型提供了一种呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒，包括盒体、与所述盒体连接的盒盖以及设置在所述盒体内的药品盒，所述药品盒与所述盒体可拆卸连接，所述盒体内设有反应槽，所述药品盒内设有呼吸道病原体抗原膜条、酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶和浓缩洗涤液试剂瓶；所述呼吸道病原体抗原膜条上设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被呼吸道合胞病毒抗原的检测线、包被腺病毒抗原的检测线、包被流感病毒A型抗原的检测线、包被流感病毒B型抗原的检测线、包被副流感病毒抗原的检测线、包被肺炎支原体抗原的检测线、包被肺炎衣原体抗原的检测线、包被嗜肺军团菌抗原的检测线、包被人细小病毒B19抗原的检测线以及包被柯萨奇病毒B组抗原的检测线。其中，所述各检测线相互平行且各相邻检测线之间的间隔等宽。其中，所述质控区设有阳性质控线，所述阳性质控线为包被兔抗羊IgG抗体的质控线。其中，沿所述呼吸道病原体抗原膜条长度方向依次设有包被兔抗羊IgG抗体的质控线、包被呼吸道合胞病毒抗原的检测线、包被腺病毒抗原的检测线、包被流感病毒A型抗原的检测线、包被流感病毒B型抗原的检测线、包被副流感病毒抗原的检测线、包被肺炎支原体抗原的检测线、包被肺炎衣原体抗原的检测线、包被嗜肺军团菌抗原的检测线、包被人细小病毒B19抗原的检测线和包被柯萨奇病毒B组抗原的检测线。其中，所述阳性质控线与各检测线相互平行，所述阳性质控线与所述包被呼吸道合胞病毒抗原的检测线之间的间隔为2.0mm，所述各相邻检测线之间的间隔为2.0mm。其中，所述呼吸道病原体抗原膜条的长度为60-100mm，例如可以为60mm、或70mm，或80mm，或90mm，或100mm；宽度为2.0mm-5.0mm。其中，所述呼吸道病原体抗原膜条为孔径大小为0.22μm的多孔硝酸纤维素膜。其中，所述呼吸道病原体抗原膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端，所述阳性质控线与所述第一端的距离可以为5-30mm，例如可以为15-25mm，或为10mm，或为15mm，或为20mm，或为25mm，或为30mm。其中，所述酶结合物试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的抗人IgM抗体；所述样本稀释液试剂瓶中装有含质量浓度为3％的牛血清白蛋白以及羊抗人IgG抗体的Tris缓冲液；所述显色底物试剂瓶中装有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物；所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的Tris缓冲液。其中，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。本实用新型提供的呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒，可实现半定量检测人血清中的呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、人细小病毒B19和萨奇病毒B组等呼吸道病原体IgM相关抗原的特异性IgM抗体，达到了呼吸道病原体IgM抗体十项联合检测，检测全面、检测快速且易于自动化的效果。附图说明为更清楚地阐述本实用新型的构造特征和功效，下面结合附图与具体实施例来对其进行详细说明。图1是本实用新型一实施方式提供的呼吸道病原体IgM抗体检测的试剂盒的示意图；图2是本实用新型另一实施方式提供的呼吸道病原体IgM抗体检测的试剂盒的示意图；图3是本实用新型一实施方式提供的不含药品盒的呼吸道病原体IgM抗体检测的试剂盒的示意图；图4是本实用新型一实施方式提供的呼吸道病原体抗原膜条的示意图。具体实施方式下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本实用新型的一部分实施例，而不是全部实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应属于本实用新型保护的范围。如图1所示，本实用新型提供了一种呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒，包括盒体20、与所述盒体连接的盒盖10、设置在所述盒体20内的药品盒30，所述药品盒30与所述盒体20可拆卸连接，所述盒体内设有反应槽21，所述药品盒30设有内呼吸道病原体抗原膜条31、酶结合物试剂瓶32、样本稀释液试剂瓶33、显色底物试剂瓶34和浓缩洗涤液试剂瓶35；所述呼吸道病原体抗原膜条31上设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被呼吸道合胞病毒抗原的检测线、腺病毒抗原的检测线、流感病毒A型抗原的检测线、流感病毒B型抗原的检测线、副流感病毒抗原的检测线、肺炎支原体抗原的检测线、肺炎衣原体抗原的检测线、嗜肺军团菌抗原的检测线、人细小病毒B19抗原的检测线以及柯萨奇病毒B组抗原的检测线。如图2和图3所示，本实用新型实施方式中，所述药品盒30与所述盒体20之间是可进行拆卸及连接的；所述盒体20中将药品盒30拆卸出来的后效果示意图见图3。也就是不含药品盒30的呼吸道病原体IgM抗体检测的试剂盒，包括盒体20与所述盒体连接的盒盖10，以及用于固定药品盒30的凹槽23。所述药品盒30与凹槽23之间是可以卡合的，并且卡合方式可以包括插座式或其他方式。所述反应槽的数量可以为两个，具体为第一反应槽21和第二反应槽22。本实用新型实施方式中，所述药品盒中，所述呼吸道病原体抗原膜条可以存储在一存储瓶中，所述呼吸道病原体抗原膜条以存储瓶的形式内设在所述试剂盒的盒体中。可选地，所述药品盒内还设有用于固定所述试剂瓶、反应膜条和反应槽的固定件。所述固定件可以为纸板、塑料板或海绵。可选地，所述第一反应槽和第二反应槽的结构为常规技术；此外所述第一反应槽和第二反应槽可以同时用于检测时放置呼吸道病原体抗原膜条，也可执行不同的实验用途。例如，所述第一反应槽用于样品孵育，所述第二反应槽可以用于洗涤或二抗孵育等；或只用一个反应槽用于检测操作。可选地，本实用新型实施方式中，所述盒体中可以由保温材料制备而得，具有保温作用，尤其是盒体中所述第一反应槽和所述第二反应槽具有保温作用。本实用新型实施方式中，所述各检测线相互平行且各相邻检测线之间的间隔等宽。可选地，所述质控区设有阳性质控线，所述阳性质控线为包被兔抗羊IgG抗体的质控线。如图4所示，可选地，沿所述呼吸道病原体抗原膜条长度方向依次设有阳性质控线0、呼吸道合胞病毒抗原的检测线1、腺病毒抗原的检测线2、流感病毒A型抗原的检测线3、流感病毒B型抗原的检测线4、副流感病毒抗原的检测线5、肺炎支原体抗原的检测线6、肺炎衣原体抗原的检测线7、嗜肺军团菌抗原的检测线8、人细小病毒B19抗原的检测线9和柯萨奇病毒B组抗原的检测线10。可选地，所述阳性质控线与各检测线相互平行，所述阳性质控线与所述包被呼吸道合胞病毒抗原的检测线之间的间隔为2.0mm，所述各相邻检测线之间的间隔为2.0mm。可选地，所述阳性质控线与所述检测线相互平行且与所述呼吸道病原体抗原膜条长度方向垂直。具体地，所述阳性质控线与所述检测线的长度等于所述呼吸道病原体抗原膜条的宽度。可选地，所述阳性质控线与所述各检测线的宽度相等。进一步可选地，所述阳性质控线与所述各检测线的宽度均可以为0.5mm-1.0mm，例如可以为0.6mm，或0.8mm，或1.0mm。具体地，所述阳性质控线与所述各检测线的宽度均为0.6mm。可选地，所述呼吸道病原体抗原膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端，所述阳性质控线靠近所述第一端。所述阳性质控线与所述第一端的距离为5-30mm，例如可以为15-25mm，或为10mm，或为15mm，或为20mm，或为25mm，或为30mm。进一步可选地，所述阳性质控线与所述第一端的距离可以为10mm。本实用新型实施方式中，所述呼吸道病原体抗原膜条为孔径大小为0.22μm的多孔硝酸纤维素膜。可选地，所述呼吸道病原体抗原膜条的长度为60-100mm，具体地，所述呼吸道病原体抗原膜条的长度为80mm，宽度为2.0mm-5.0mm。进一步可选地，所述呼吸道病原体抗原膜条的宽度为3mm。本实用新型实施方式中，所述酶结合物试剂瓶中装有碱性磷酸酶标记的抗人IgM抗体。可选地，所述酶结合物试剂瓶还装有样本稀释液，在所述酶结合物试剂瓶中，所述碱性磷酸酶标记的抗人IgM抗体：样本稀释液的体积比为1:(500-10000)，并组成酶结合物。本实用新型实施方式中，所述样本稀释液试剂瓶中装有样本稀释液，所述样本稀释液含质量浓度为3％的牛血清白蛋白以及羊抗人IgG抗体的Tris缓冲液。本实用新型实施方式中，所述显色底物试剂瓶中装有显色底物，所述显色底含有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物，两者质量比为2:1。本实用新型实施方式中，所述浓缩洗涤液试剂瓶中装有20倍浓缩的Tris缓冲液，即为浓缩洗涤液。本实用新型实施方式中，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。本实用新型所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温，可加速抗原抗体的结合反应，试剂盒的检测过程更加迅速。本实用新型实施方式中，所述呼吸道病原体抗原膜条分别包被呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、人细小病毒B19和柯萨奇病毒B组这十种抗原。具体地，呼吸道合胞病毒：呼吸道合胞病毒是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行；潜伏期为3-7天，IgM抗体在发病1周左右出现。腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。腺病毒感染的潜伏期为2-14天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2-3个月。流感病毒：流感病毒是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症；由于它易与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期间临床诊断很困难，因此实验室诊断显得非常重要。流感病毒感染的潜伏期一般为1-7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2-3个月。这里主要针对A型和B型流感病毒。副流感病毒：副流感病毒在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎，潜伏期一般为2-7天，IgM抗体在发病1周左右出现，可持续2-3个月。肺炎支原体：肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，可在呼吸道粘膜上皮内潜伏，部分患者无明显症状，但大部分患者为显性感染，在3岁以下儿童呼吸道感染多见，成人以肺炎表现为主。肺炎支原体肺炎潜伏期为14-21天，起病缓慢，IgM抗体一般在感染后1周出现，3-4周达高峰期，可持续3-6个月。肺炎衣原体：肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎，在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10％，肺炎衣原体所感染所致的肺炎，症状和体征无特异性，多数起病缓慢，潜伏期一般为30天左右，IgM抗体在发病2-3周出现，一般来说可持续存在2-6个月。嗜肺军团菌：人最易感染嗜肺军团菌1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。10％的肺炎是由嗜肺军团菌1型所引起的，潜伏期一般为2-10天，IgM抗体存在感染后1周出现，并可持续3-6个月。人细小病毒B19：人细小病毒B19引起的典型疾病是传染性红斑和急性关节病。传染性红斑症好发在2-10岁的儿童，无特定流行季节，但以冬末初春较多，一般潜伏期是数天到两个星期，具有传染性，可经由空气、接触传染。柯萨奇病毒B组：柯萨奇病毒是一种肠病毒，分为A和B两类，是一类常见的经呼吸道和消化道感染人体的病毒，感染后人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状。妊娠期感染可引起非麻痹性脊髓灰质炎性病变，并致胎儿宫内感染和致畸。本实用新型试剂盒适用于人血清样本检测，优选新鲜的人血清，避免使用严重溶血的血清或脂血血清；所述人血清样本优选2-8℃保藏。使用所述人血清样本进行检测前，必须将所有的人血清样本平衡至室温(22-28℃)。本实用新型试剂盒中呼吸道病原体抗原膜条的制备方法为按照常规的制备膜条的方法进行制备，其中，配制点样溶液中是将本实用新型的十种呼吸道病原体IgM抗体的抗原配制成相应的包被浓度，然后将配制好的点样溶液以一定的排列次序固定在膜片上，形成独立的检测线，后续再进行干燥、贴膜、切膜、组装、切条等操作以制备得到呼吸道病原体抗原膜条。本实用新型提供的呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒，可实现定性检测人血清中的呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、人细小病毒B19和柯萨奇病毒B组等呼吸道病原体IgM相关抗原的特异性IgM抗体，达到了呼吸道病原体IgM抗体十项联合检测、检测全面、检测快速且易于自动化的效果。本实用新型还提供了一种呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：1、检验前准备：将试剂盒和人血清样本平衡至室温；将呼吸道病原体抗原膜条放入反应槽中；将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水，按1:20稀释成工作浓度洗涤液(如25mL浓缩洗涤液加入475mL蒸馏水或去离子水)。2、检测步骤1)样本孵育：将人血清样本按1:10稀释(10倍稀释)；具体如下：用移液器将900μL样本稀释液加入到反应槽中，再加入100μL人血清样本。将反应槽置于摇床或自动蛋白印迹仪上，37℃恒温孵育10min。2)洗涤：倒掉或吸干反应槽内液体，加入2mL工作浓度洗涤液冲洗呼吸道病原体抗原膜条1min，倒掉或吸干反应槽内液体，再加入2mL工作浓度洗涤液冲洗检测膜条，反复冲洗3次。3)二抗孵育：在反应槽中加入1mL酶结合物，将反应槽置于摇床或自动蛋白印迹仪上，37℃恒温孵育10min。4)重复步骤2。5)显色反应：在反应槽中加入1mL显色底物，将反应槽置于摇床或自动印迹仪上，37℃恒温孵育10min。倒掉或吸干反应槽内液体，加入2mL蒸馏水冲洗呼吸道病原体抗原膜条1min，倒掉或吸干反应槽内液体，终止显色底物反应。电吹风吹干或自然干燥呼吸道病原体抗原膜条，得到干燥后的呼吸道病原体抗原膜条。3、判读结果3.1阳性判断值或者参考区间免疫印迹分析仪分析呼吸道病原体抗原膜条信号强度(着色强度，包括灰度值或RGB或其他颜色数值)；根据信号强度，判定呼吸道病原体抗原膜条反应结果：检测值＜3.00，阴性；检测值≥3.00，阳性。上述检测阈值“3”是通过测定大量正常人血清样本，然后将所得到的信号强度均值和3个标准差值(standarderrorofthemean，SD)作为阳性判断值。此外，各实验室或其他使用者应根据本地区人群的特点，建立相应的参考范围，检测结果应根据参考值范围与其他临床因素和结果综合进行判定。3.2、检验结果的解释将上述干燥后的呼吸道病原体抗原膜条放入免疫印迹分析仪的膜条固定架中，借助免疫印迹分析仪对其进行判读，分别测出干燥后的呼吸道病原体抗原膜条中各检测线上的灰度值或RGB或其他颜色数值，得到量化的检测数值，将量化的检测数值(X表示检测数值)按照表1进行划分和分析。其中，将检测数值的结果按上述5个区间划分为阴性、临界值、临界值的2倍值、4倍值、8倍值5个等级，分别对应0、1、2、3、4这5个等级；同时5个等级的结果分析解释分别为：“0”等级为未检测到特定抗体，“1”等级为低水平抗体，“2”等级为中水平抗体，“3”等级为高水平抗体，“4”等级为超高水平抗体。表1参考范围结果判定等级结果解释0≤X＜3.00-0未检测到特定抗体3.00≤X＜6.00+1低水平抗体6.00≤X＜12.00++2中水平抗体12.00≤X＜24.00+++3高水平抗体X≥24.00++++4超高水平抗体本实用新型提供的呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒，方法简单易操作，达到了呼吸道病原体IgM抗体十项联合检测，检测全面、检测快速且易于自动化的效果。以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本实用新型的保护范围。因此，本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页1 2 3