一种液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱对食品中多农药残留测定的方法与流程

本发明属于农药检测领域，具体涉及一种液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱对食品中多农药残留测定的方法。

背景技术：

随着人类物质生活水平的不断提高，人们对食品安全的要求越来越高，食品安全也已经成为一个备受关注的热点问题。为了提高农产品产量与质量，农药在大规模的农业生产中被使用。但是，农药的大规模使用也导致了农药残留问题的出现。世界卫生组织将农药残留定义为人类或动物是由使用农药引起的任何残留物质或物质的混合物和相应的衍生物，如降解和转化产物、代谢物、反应产物和被认为有毒的杂质。

韭菜是复杂的基质，因为它含有色素和硫化物，另外，生姜和大蒜也含有大量的含硫化合物。为了减少残留检测中复杂基质的干扰，对提取和清理方法进行了研究。传统的样品前处理方法主要有固相萃取法，固相微萃取法，凝胶渗透色谱法等。然而，这些方法也存在缺点，费时费力，需要大量的有机溶剂，通常涉及许多步骤导致分析物损失。自从anastassiades等人首次提出quechers(快速，简单，廉价，有效，坚固和安全)方法以来，它已被广泛用于各种食品基质中的多农药残留分析。quechers方法中为了降低基质效应需要添加吸附剂吸附杂质，但是利用吸附剂使样品的制备过程复杂，而且对仪器具有一定程度的损坏。qu等人使用微波辅助加热方法消除韭菜中的硫化物，该研究提出，微波预处理常常用在韭菜样品均质化之前，可以使蒜氨酸酶失活，从而减少硫化物的干扰。但是该方法不能应用于复杂基质的处理方法。

农药残留检测方法主要有气相色谱(gc)，液相色谱(lc)，液相色谱串联质谱(lc-ms/ms)，气相色谱串联质谱(gc-ms/ms)等。近年来，虽然三重四级杆质谱(qqq)的mrm模式在大多数情况下提供了准确和可靠的分析结果，但是在检测样品的基质效应比较高的情况下，会影响检测结果。

李等人采用选择性和灵敏性较高的液相色谱-混合三重四级杆-线性离子阱质谱(lc-qqlit-ms/ms)方法同时测定谷物样品中的19种三嗪农药及其降解产物，与ms²相比，ms³能够进一步降低背景信号，获得更低的检测限。

现有技术中对鸡蛋中残留的农药氟虫腈的回收率或检测限并不是最佳的。所以目前亟需一种提供准确和可靠的分析结果、基质效应低、检测限低，农药残留的回收率高的检测方法。

技术实现要素：

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的第一个目的是提供一种液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱对食品中多农药残留测定的方法。采用简单的前处理方法提取目标化合物，采用液相色谱-混合三重四级杆-线性离子阱质谱(lc-qqlit-ms/ms)的检测方法，富集能力强，利用多级质谱扫描(ms³)模式降低背景信号，减少基质效应，提高了回收率，使样品前处理更简单。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

一种液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱对食品中多农药残留测定的方法：

该方法的样品进样量为1μl；样品经液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱(lc-qqlit-ms/ms)和多级质谱扫描模式(ms³)进行分析；所述液相色谱为普通液相色谱或超高效液相色谱。

本发明的第二个目的是提供一种液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱对食品中农药残留测定的方法在检测食品中农药残留中的应用；所述食品包括鸡蛋、韭菜、姜。

优选的，在所述食品鸡蛋中检测农药残留的应用中液相色谱为超高效液相色谱。

本发明的第三个目的是提供一种针对上述鸡蛋的应用的液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱对食品中多农药残留测定的方法，具体步骤为：

1)样品的提取

将样品与提取剂混合均匀，离心，取上层溶液；

2)样品的净化

将上层清液用吸附剂进行涡旋混合，离心，取上层液通过0.22μm尼龙过滤膜

3)uplc-qqlit-ms/ms分析

将1μl的所述过滤后的样品经超高效液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱进行检测，利用多级质谱扫描模式进行分析。

所述样品为鸡蛋液。

优选的，步骤1)中的提取剂由硫酸镁、氯化钠、乙腈组成；硫酸镁、氯化钠、乙腈的比例为2-4g：1-3g：18-22ml。

优选的，步骤2)中所述吸附剂为乙二胺-n-丙基硅烷(psa)、c18、石墨炭黑(gcb)，质量比为75-85：75-85：8-10。

优选的，超高效液相色谱的色谱柱为watersbehc18。

优选的，液相色谱的流动相a是含有0.1％甲酸的水溶液，b是含有0.1％甲酸的甲醇。

优选的，三重四级杆-线性离子阱质谱(qqlit)采用esi^-模式进行。

优选的，多级质谱扫描模式以负离子模式运行；离子源温度为550℃；离子喷射电压为-4500v。

本发明的第四个目的是提供一种针对上述韭菜、姜等复杂基质的应用的液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱对食品中多农药残留测定的方法，具体步骤为：

1)样品的提取与净化

将样品与提取剂混合均匀，离心，取上层溶液过0.22μm滤膜；

2)lc-qqlit-ms/ms分析

将1μl的所述过滤后的样品经液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱进行检测，利用多级质谱扫描模式进行分析。

所述样品为韭菜或姜。

优选的，步骤1)中提取剂包括氯化钠、硫酸镁及由乙腈和水组成混合物。

进一步优选的，乙腈和水的体积比为1:1-3:1；氯化钠、硫酸镁与乙腈和水的混合物的比例为3-5g:0.8-1.2g:18-22ml。

优选的，步骤2)中样品的浓度为10ng/ml。

优选的，液相色谱(lc)的条件的色谱柱poroshell120ec-c18。

优选的，液相色谱的流动相a为0.1％的甲酸水溶液；流动相b为甲醇。

优选的，三重四级杆-线性离子阱质谱(qqlit)采用esi⁺模式进行。

优选的，多重质谱扫描模式以正离子模式运行；离子源温度为550℃；离子喷射电压为5500v。

本发明的有益效果：

1)本发明在韭菜、姜的应用方法相比于现有技术中的quechers方法，不使用吸附剂，缩短了制备过程，提高了化合物的回收率，分析的过程中只加入少量的样品降低了基质效应和仪器损坏率；选择乙腈和水的混合物作为提取剂提高了回收率、降低了基质效应。

2)本发明的在鸡蛋的应用中相比于现有技术中的quechers方法提高了化合物的回收率，分析的过程中只加入少量的样品降低了基质效应，提高了回收率、降低了基质效应。

3)本发明采用多级质谱扫描(ms³)的模式，简化了样品的前处理过程，降低背景信号，基质效应降低到-10％到10％之间，降低了检测限。

附图说明

构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。

图1为四种不同提取溶剂对氟虫腈及其代谢物回收率的影响；

ace：乙腈，fa：甲酸，me：甲醇；

图2为三种不同混合吸附剂对氟虫腈及其代谢产物回收率的影响；

图3为1.0μg/kg的多菌灵在韭菜基质中的ms³谱图和mrm谱图；

图4为4种化合物在0.5ng/ml时的定量离子流图；

图5为10ng/ml氟虫腈碎片离子的质谱优化过程；

图6为0.05μg/ml时多菌灵的质谱条件优化谱图；

图7为空白鸡蛋样品中氟虫腈及其代谢产物的ms³谱图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

根据欧洲sante11945/2015的标准规定，样品前处理方法的回收率在70-120％，基质效应在-20-20％。

基质效应(me，％)可通过以下公式计算：

当基质效应大于零时，它被称为基质增强。当基质效应小于零时，它称为基质抑制。下面结合具体实施例对本发明进一步说明

实施例1在鸡蛋的应用中的方法

样品的提取与净化

将提前打碎的鸡蛋样品储存在-18℃的冰箱中直至使用。空白样品不含目标化合物。首先，将5.0g样品称重放入100ml离心管中。将hplc级20ml乙腈加入到离心管中，并将混合物超声处理10分钟。然后称重3.0gmgso4和2.0gnacl并加入混合物中。立即摇动2分钟，然后以5000rpm/min离心5分钟。将上清液转移至试管中并在-18℃的冰箱中储存20分钟。最后，将10ml上清液转移到含有400mgpsa，400mgc18和45mggcb的15ml单次使用的pp离心管中，涡旋混合1分钟，并以5000rpm/min离心5分钟。将适量提取液通过0.22μm尼龙过滤膜，

uplc-qqlit-ms/ms分析

超高效液相色谱的条件：沃特世公司提供的watersbehc18色谱柱(2.1x100mm，1.7μm)，40℃下进行色谱分离。流动相a是含有0.1％甲酸的水溶液，b是含有0.1％甲酸的甲醇，梯度洗脱程序如下：0-1min，20-50％b；1-2min，50-90％b；2-4min，90％b；4-4.1min，90-20％b；4.1-6min，20％b。柱温：40℃；流速：0.3ml/min；进样体积：1μl。

质量分析使用esi^-源进行。源参数如下：帘气体(curtaingas)：35.0(任意单位)；离子源气体1(ionsourcegas1)和离子源气体2(ionsourcegas2)：50psi；离子喷雾电压(ionsprayvoltage)：-4500.0v；探头温度(probetemperature)：550℃；碰撞气体(collisiongas)：中等。氮气被用作两种模式中的雾化器气体和碰撞气体。

ms³参数：ms³扫描模式以负离子模式运行，q3快速转化为线性离子阱(lit)。质谱参数如下：离子源温度：550℃；离子喷射电压：-4500.0v。对于不同的农药种类进行最佳母离子、碰撞气流、碰撞能量、定量离子的数值的确定。最佳参数的确定方法为使用动态离子填充时间和40msec的激发时间将定量离子捕获并积累在线性离子阱(lit)中，最终释放到质谱中获得化合物的三级定量和定性离子质谱图。

实施例2韭菜、姜的应用的方法

样品的提取与净化

准确称取10.0g样品,置于100ml塑料离心管中,加入4.0g氯化钠、1.0gmgso4、20ml乙腈/水(75/25，v/v)，于均质机上高速搅拌2min，在高速离心机上离心5min，转速是5000r/min。取适量溶液过0.22μm滤膜，待lc-ms/ms检测。

液相条件：色谱柱poroshell120ec-c18(4.6×100mm，2.7μm)；流速：0.5ml/min；柱温：40℃；进样体积：1μl；流动相a：0.1％的甲酸水溶液，流动相b：甲醇；梯度洗脱程序：0-0.01min；25％b；0.01-1min,75％b；1-3min,90％b；3-11min,90％b；11-11.1min,25％b；11.1-14min,25％b。停止时间为14min。

质谱条件：采用esi⁺模式进行，源参数设定为：curtaingas(cur),35.0(任意单位)；离子源气体1(gs1)和离子源气体2(gs2),55psi；离子喷雾电压(is),5500.0v；探针温度(tem),550℃；碰撞气体(cad),中等。氮气被用作喷雾气体和碰撞气体。

ms³参数：ms³扫描模式以正离子模式运行。质谱参数如下：离子源温度：550℃；离子喷射电压：5500v。对于不同的农药种类进行最佳母离子、碰撞气流、碰撞能量、定量离子的数值的确定。最佳参数的确定方法为使用动态离子填充时间和40msec的激发时间将定量离子捕获并积累在线性离子阱(lit)中，最终释放到质谱中获得三级定量和定性离子的谱图。

实施例3

在鸡蛋的应用中提取剂对回收率的影响

提取剂选择乙腈，乙腈/甲酸(99.95/0.05，v/v)，乙腈/甲酸(99.9/0.1，v/v)进行比较对于提高提取效率的效果，提取剂对回收率的影响如图1所示，结果表明，当使用甲醇作为提取剂时，基质中的许多杂质被同时提取出来。在离心过程中观察到溶液比其他提取剂颜色更深，并且分层不明显。为了降低基质中杂质的影响，使用psa(400mg)，c18(400mg)和gcb(45mg)纯化上清液。根据欧洲sante11945/2015农药残留回收指南，农药残留的回收率应在70％至120％之间。由结果可知，使用甲醇作为提取剂，氟虫腈的回收率为55.7％，其他三种化合物的回收率仅为70％，因此甲醇不能用作提取剂。对于乙腈/甲酸(99.95/0.05，v/v)和乙腈/甲酸(99.9/0.1，v/v)，回收率在70.4％和86.8％之间。当选择乙腈作为萃取剂时，回收率在94.4％至101％的范围内。这可能是因为在乙腈中加入甲酸导致回收率较低。研究结果表明乙腈作为提取剂获得了最高的回收率并且符合欧洲sante11945/2015指南。

实施例4在鸡蛋的应用中吸附剂对基质效应的影响

为了提高检测的准确性和降低基质效应，在农药残留分析中需要进行纯化。quechers方法用于纯化复杂基质中的氟虫腈及其代谢产物。在本申请中，我们选择了(a)psa(400mg)+gcb(45mg)；(b)psa(400mg)+c18(400mg)和(c)psa(400mg)+c18(400mg)+gcb(45mg)作为quechers吸附剂。在样品前处理过程中通过使用前面所提出的混合吸附剂来纯化上清液。使用回收率来评估三种净化吸附剂的净化效果，结果如图2所示。通过比较回收率可知，回收率在91.2％到102％之间。混合吸附剂(c)具有最有效的净化效果。对于混合吸附剂(a)，所有化合物的回收率范围在73.6％到82.4％之间，对于混合吸附剂(b)，回收率范围在76.9％到90.1％之间。考虑到样品纯化和浓缩的效果，因此选择混合吸附剂(c)psa(400mg)，c18(400mg)和gcb(45mg)作为样品净化过程中的吸附剂。

基质效应(me)是lc-ms/ms中农药残留测定的主要缺点，它对选择性，灵敏度，线性和准确性有显著影响。使用上述方法获得的空白基质配制成基质加标溶液，基质加标标准溶液的斜率和溶剂中标准曲线的斜率相比，当基质效应在±20％之间时，我们可以忽略基质效应。当基质效应在±20％和±50％之间时，被称为中等基质效应。当基质效应低于-50％或高于50％时，被称为强基质抑制或增强。

由于鸡蛋中脂质和蛋白质的比例较高，鸡蛋中的基质消除在样品制备过程中是一个挑战。本申请提出了三种混合吸附剂来降低基质效应。uplc-qqlit-ms/ms的ms³模式用于检测氟虫腈及其代谢物。ms³不仅可以实现类似的检测限，并且可减少样品制备过程和简化色谱分离条件。所以ms³是在复杂基质中定量分析的有用工具。与二级质谱扫描(ms²)相比，ms³可以进一步降低背景信号并实现更低的检测限。表1总结了在不同的混合吸附剂情况下，氟虫腈及其代谢产物的基质效应(me)和相对标准偏差(rsds％)。对于混合吸附剂(a)，基质效应取值如下：2μg/kg的氟虫腈为-23.9％、0.2μg/kg的氟虫腈砜为-20.7％、0.2μg/kg的氟虫腈硫醚为22.7％和0.2μg/kg的氟甲腈为20.6％。而其他取值范围均为-20％和20％之间。对于混合吸附剂(b)，除了0.2μg/kg氟甲腈标准品为-22.7％外，其他的基质效应均在-20％至20％的范围内。然而，混合吸附剂(c)体现出良好的基质效应，相应的基质效应取值均在-8.60％至9.30％的范围内。通过研究三种混合吸附剂的基质效应，相应的实验结果表明，当使用混合吸附剂(c)作为吸附剂进行纯化时可以获得最佳纯化结果。

表1不同的混合吸附剂情况下，氟虫腈及其代谢产物的基质效应(me)和相对标准偏差(rsds％)

实施例5

在韭菜、姜的应用中提取剂对回收率的影响

提取剂选择乙腈，乙腈/甲酸(99.9/0.1,v/v)，乙腈/水(75/25,v/v)和乙腈/水(50/50,v/v)进行比较。对于乙腈/水(50/50,v/v)，对于韭菜中的目标农药化合物的回收率部分超过120％，农药的检测结果：氧乐果(142.8％)，吡螨胺(140.6％)，噻嗪酮(163.2％)和除虫脲(149.8％)，对于乙腈/水(75/25,v/v)，回收率为76.5-115％，均高于乙腈和乙腈/甲酸(99.9/0.1,v/v)，但是乙腈/水(75/25,v/v)的回收率整体比较稳定，而且对于部分农药化合物例如克百威、辛硫磷、啶虫脒的回收率高于乙腈/水(50/50,v/v)，姜的农药的回收率与韭菜的对应的农药的回收率基本相同。因此，选择乙腈/水(75/25，v/v)作为提取剂来提取所有目标化合物。

实施例6

在韭菜、姜的应用中吸附剂对回收率及基质效应的影响

在quechers方法中，为了降低基质效应，需要添加吸附剂吸附杂质。本申请的净化过程中，用墨化炭黑(gcb)作吸附剂用于清除过程中，一些分析物的回收率降低了，如多菌灵(59.6％)，除虫脲(63.5％)和辛硫磷(67.6％)等。一般而言，gcb不能被选择用于多残留分析，因为其具有平面结构，尤其对平面环结构的化合物具有强保存。一些农药具有平面结构，如多菌灵，除虫脲，可被gcb吸收。在实验过程中，我们偶然发现即使不使用吸附剂，大多数目标化合物也能够忽略基质效应。这可能基于大多数基质易溶于水的事实，大部分基质都在水层，目标化合物在乙腈层，当我们使用无水mgso4去除水时，大部分极性基质也被吸附。如果不使用吸附剂，样品制备过程可以缩短到原来的三分之一。在本申请中，不适用吸附剂，只有1μl的样品被注入到lc-qqlit-ms/ms仪器中，基质效应如表2所示和仪器损坏均降至非常低的水平。

表2ms³模式三种化合物在韭菜、姜中的基质效应(n＝5)

实施例7多重质谱扫描(ms³)与多反应监测(mrm)模式的比较

当背景信号高或干扰强烈使标准的mrm测定困难时，ms³方法是定量分析物的有效策略。对于lc-ms/ms中的复杂基质，由于存在基质效应，不能准确检测到目标化合物。在这种情况下，ms³具有更好的定量和鉴定的灵敏度，准确度和重现性。对于韭菜基质中的哒螨灵和多菌灵，生姜基质中的苯醚甲环唑，标准的mrm测定方法中基质抑制不能忽视。所以使用ms³模式来降低基质抑制。如表1所示，哒螨灵(5.3％)，苯醚甲环唑(-7.5％)和多菌灵(-3.2％)的基质效应降低至-20％到20％的范围，甚至低于±10％。在本申请中，使用简化的前处理处理方法和ms³模式结合，基质效应降低到-10％和10％的范围内。随着基质抑制的降低，三种分析物的回收率提高到90.3％到111％之间。ms³扫描可以作为替代方法显著提高复杂基质中化合物的检测能力。由表3可以ms³模式相比于mrm模式具有更好的回收率，ms³模式目标化合物的回收率在90.3％到111％的范围内，rsds在4.6％到9.2％之间，rsds低于欧洲sante11945/2015所推荐的20％，表明该实验方法有良好的精密度和准确度，能够满足分析要求。

表3三种化合物在韭菜，姜中的回收率和相对标准偏差(n＝5)

a：相对标准偏差，每个浓度平行检测5次，n＝5。

b：ms³模式检测的平均回收率和相对标准偏差。

为了比较ms³模式和mrm模式在降低化合物的基质效应方面的差异，向打碎后搅拌均匀的韭菜基质中加入1.0μg/kg的多菌灵标准溶剂。使用lc-qqlit-ms/ms的mrm和ms³模式分别对样品进行分析，获得的mrm谱图和ms³谱图如图3所示。mrm跃迁m/z192.0/160.1和m/z192.0/132.2背景水平较高，基质干扰较强。当使用ms³扫描模式时，多菌灵中的基质干扰降低，只有m/z192.0→160.1→132.2和m/z192.0→132.2→105.1，显示出较高的选择性和灵敏度，能够准确地定量和定性化合物。通过比较，ms³模式下的定量离子和定性离子的响应值比mrm模式下的响应值高20倍，并且mrm模式中的定性离子峰被基质干扰峰掩盖，ms³模式下的定性离子峰峰形较好，响应值也较高，显示出较高的选择性，定量可靠，与mrm相比，ms³可以进一步降低背景信号并实现更低的检测限。因此，ms³模式相比mrm模式可以在的基质效应很高或难以检测到目标化合物时进行应用，同时ms³模式也简化了样品前处理过程。

实施例8在鸡蛋的应用中色谱和质谱条件

色谱条件优化：为了检测鸡蛋中的氟虫腈及其代谢物，对色谱参数进行了优化。色谱柱和流动相对于农药检测至关重要。研究过程采用沃特世behc18色谱柱在6min内对4种化合物进行分析，其填料粒径是1.7μm，因为它具有良好的分离度和峰形。流动相影响分析物的峰形和保留时间，氟虫腈及其代谢物在中性和酸性条件下具有良好的稳定性。为了获得满意的结果，我们研究了四种不同浓度的甲酸，分别是0.01％，0.05％，0.1％和0.15％。通过对回收率的研究，最终采用0.1％甲酸水和甲醇作为流动相，少量酸的加入能够达到提高分离效率、改善峰形的作用，并且增加目标化合物的电离效率，提高灵敏度。最终我们在没有任何缓冲添加剂的情况下获得了简单而优异的色谱条件。在优化条件下，采用超高效液相色谱分析目标化合物时，4种农药在6min内能够完全检出，其峰形对称，灵敏度高，4种化合物在0.5ng/ml时的定量离子流图见图4，出峰时间如表5所示。

质谱条件优化：在液相色谱-串联质谱中，将10ng/ml的氟虫腈及其代谢物混合标准注入到质谱仪中进行优化，获得最佳的质谱参数。这四种化合物在esi^-模式下进行研究，4种化合物均得到[m-h]^-峰，ms³扫描以快速循环时间被执行，并且使用以第二代产品离子m/z为中心的窄扫描范围，该扫描模式可以用于定量化合物。氟虫腈在10ng/ml时的质谱条件优化过程见图5；氟虫腈(m/z435.1)，在仪器设置的碰撞气流(cad)为6，优化的碰撞能量(ce)为25ev的时候，优化并得到丰富最高的峰在m/z330.0，该离子被选做定量离子，使用动态离子填充时间和25毫秒的激发时间将一级碎片离子作为母离子捕获并累积在线性离子阱(lit)中，ms³谱图在m/z250.0处显示强烈的峰。因此，氟虫腈的定量和定性ms/ms/ms离子跃迁分别为m/z435.1→330.0→250.0和435.1→250.0→215.0。在图5中，最高丰度离子是定量离子，第二个是定性离子。最后氟虫腈及其代谢产物的去簇电压、碰撞能等质谱参数被优化，获得最佳的质谱条件，如表4所示。

表4氟虫腈及其代谢物的保留时间和最佳质谱参数

t-保留时间；*定性离子；^a二级子离子；^b三级子离子；^c二级离子的碰撞能；^d三级离子的碰撞能

实施例9在韭菜、姜的应用中质谱的参数

为了获得最大的信号响应值，对色谱参数进行了优化。流动相是含有0.1％甲酸的超纯水和甲醇，含甲酸的流动相能够增加目标化合物的电离效率，形成良好的峰形。使用agilentec-c18的前端保护柱保护色谱柱，poroshell120ec-c18色谱柱进行色谱分离。在液相色谱-串联质谱中，将10ng/ml的26种目标化合物的混合标准溶液注入到质谱仪中进行优化，获得最佳的质谱参数。

在ms³模式下，首先分离的母离子是质子化的，例如多菌灵(m/z192.0)，在仪器设置的碰撞气流(cad)为6，优化的碰撞能量(ce)为25ev的时候，优化并得到响应值最高的峰在m/z160.1，该离子被选做定量离子，使用动态离子填充时间和25毫秒的激发时间将一级碎片离子作为母离子捕获并累积在线性离子阱(lit)中，ms³谱图在m/z132.2处显示强烈的峰。因此，多菌灵的定量和定性ms/ms/ms离子跃迁分别为m/z192.0→160.1→132.2和192.0→132.2→105.1，多菌灵在10ng/ml时的质谱条件优化过程见图6。在图6中，最高丰度离子是定量离子，第二个是定性离子。

10ng/ml的三种目标化合物的混合标准溶液注入到质谱仪中进行优化，获得最佳的质谱参数。表5中列出了ms³模式下检测的三种目标化合物的三级质谱参数。

表5ms³模式下检测的三种目标化合物的三级质谱参数

^a二级子离子；^b三级子离子；^c保留时间；^d二级离子的碰撞能；^e三级离子的碰撞能；*定性离子

实施例10实际样品的检测

从中国超市、专卖店和批发市场购买了60个鸡蛋样本。采用该方法对所有鸡蛋样品进行氟虫腈及其代谢产物残留分析。所有样品均采用uplc-qqlit-ms/ms的ms³方法进行分析。研究结果表明，在三个样品中发现氟虫腈，浓度分别为0.28μg/kg，0.34μg/kg和1.1μg/kg。氟虫腈在鸡蛋中的最大残留量(mrls)在不同的国家有所不同。本文提出的loqs远低于全球所有国家的mrls。该方法适用于鸡蛋中氟虫腈及其代谢产物的定量分析。

总结：

1)特异性

由于ms³的扫描功能，uplc-qqlit-ms/ms提供了非常高的选择性和特异性。通过比较空白鸡蛋和基质加标鸡蛋样品的ms³谱图来评估该方法的选择性。图7(a)显示了空白鸡蛋样品中氟虫腈及其代谢产物的ms³谱图。图7(b)，7(c)，7(d)和7(e)显示了加标浓度为2μg/kg的氟虫腈及其代谢物的ms³谱图。结果表明，在目标化合物的保留时间附近没有干扰峰存在。

2)回收率和重复性

从图2中可以得到，uplc-qqlit-ms/ms方法的ms³模式四种目标化合物的回收率在90.7％到105％的范围内，rsds在0.7％到4.9％之间，rsds低于欧洲sante11945/2015所推荐的20％，表明该实验方法有良好的精密度和准确度，能够满足分析要求。

3)线性、lods和loqs

在检测鸡蛋中的应用，在实施例1的基础上，通过标准校准曲线评估响应的线性，分析4种目标化合物的六个浓度水平，分别是0.05，0.1，0.5，1，10和20ng/ml。相关系数(r²)用于评估线性，结果如表6所示，标准校准曲线显示出良好的线性，所有化合物的相关系数(r²)均高于0.999。

为了评估所提出的方法的灵敏度，需要确定lods和loqs。以3倍信噪比(s/n)计算检出限，以10倍信噪比(s/n)计算定量限。检出限和定量限如下：氟虫腈0.06μg/kg和0.20μg/kg；氟虫腈砜0.02μg/kg和0.07μg/kg；氟虫腈硫醚0.05μg/kg和0.17μg/kg；氟甲腈0.04μg/kg和0.13μg/kg。这些数据总结在表6中。所有分析物的loqs均低于欧盟的最大残留限量值(0.005mg/kg)。因此，该方法适用于定量分析鸡蛋中的氟虫腈及其代谢物。

表64种化合物在鸡蛋样品中的相关系数、回收率、rsds、定量限和检测限

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。