本发明涉及血液检测
技术领域：
，尤其涉及血液中维生素a、e的提取检测方法。
背景技术：
维生素a具有促进生长，维持上皮组织如皮肤、黏膜、角膜等正常功能的作用，并参与视紫红质的合成；参与体内多个氧化过程，特别是不饱和脂肪酸的氧化，维生素e对生殖功能、脂质代谢等有影响，可使垂体前叶促性腺细胞分泌亢进，促进精子的生成和活动，使卵泡增加，增加卵巢机能，黄体细胞增大及增强黄体酮的作用，传统检测血清维生素a和e方法无论是采用的采用正己烷提取还是采用甲醇乙腈将血清的蛋白沉淀后，用氮吹仪吹干溶剂后，再用流动相溶解进样，操作比较繁琐，不适合临床的快速检验。因此，我们提出了血液中维生素a、e的提取检测方法用于解决上述问题。技术实现要素：本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的血液中维生素a、e的提取检测方法。血液中维生素a、e的提取检测方法，包括以下步骤：s1、采集血清样本10ml，向血清样本中加入提取试剂，置于漩涡振荡器混合30s，然后再用7000rpm-9000rpm的高速离心机离心8min-15min，吸取上层液体置于进样瓶中，进样分析；s2、选取5个已知浓度的维生素a、e的血清样品为质控品，向质控品中加入提取试剂，充分混合后置于漩涡振荡器混合30s，然后再用7000rpm-9000rpm的高速离心机离心8min-15min，吸取上层液体置于进样瓶中，进样分析；s3、将质控品利用高效液相色谱法测定维生素a、e在特定波长下的光的吸收值，将测定结果分析制成标准曲线；s4、将血液样本也通过高效液相色谱法测定维生素a、e在特定波长下的光的吸收值，将测定结果根据标准曲线计算待测血清样品的维生素a和e的浓度。优选的，所述提取试剂为腈类化合物-醇类化合物-甲酸，其中腈类化合物为乙腈或丙腈或丁腈中的一种，醇类化合物为c4-c8的醇类化合物中的一种。优选的，所述漩涡振荡器的型号为xh-c或xh-d。优选的，所述高效液相色谱法采用5cm的十八烷基键合硅胶柱为色谱柱，柱温为40℃，流速为1ml/min，运行时间为7min,流动相为水-乙腈相至乙腈-异丙醇相，其中水和乙腈的比例为60:40，乙腈和异丙醇的比例为80:20。优选的，所述维生素a的检测波长为328nm，维生素e的检测波长为296nm。优选的，所述高效液相色谱法的梯度方法为0min-2.5min为样品在水-乙腈相中流动，2.5min-7min为样品在乙腈-异丙醇相流动。优选的，所述血液样本和质控品的处理条件相同。本发明的有益效果是：1、本发明，通过直接用有机溶剂提取进样，减少传统检测方法中的两个步骤，改善了传统方法的繁琐操作，有机层选用的提取溶剂不易挥发，减少了因溶剂挥发造成了浓度不准，能够确保维生素a、e的检测精度，缩短了检测时间，提高了检测效率。2、本发明，通过选择5cm的十八烷基键合硅胶柱保证色谱进行检测，可以让维生素a和维生素e快速出峰，峰宽变窄，从而提高了提高的灵敏度，同时也减少了分析时间。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。实施例血液中维生素a、e的提取检测方法，包括以下步骤：s1、采集新生牛血清样本10ml，向血清样本中加入腈类化合物-醇类化合物-甲酸(其中腈类化合物为乙腈或丙腈或丁腈中的一种，醇类化合物为c4-c8的醇类化合物中的一种)，置于xh-c型号的漩涡振荡器混合30s，然后再用8000rpm的高速离心机离心10min，吸取上层液体置于进样瓶中，进样分析；s2、选取5个已知浓度的维生素a、e的血清样品为质控品，向质控品中加入提取试剂，充分混合后置于漩涡振荡器混合30s，然后再用8000rpm的高速离心机离心10min，吸取上层液体置于进样瓶中，进样分析；s3、将质控品利用5cm的十八烷基键合硅胶柱为色谱柱进行高效液相色谱法测定，保持柱温为40℃，流速为1ml/min，运行时间为7min,流动相为水-乙腈相至乙腈-异丙醇相，其中水和乙腈的比例为60:40，乙腈和异丙醇的比例为80:20，测定时在0min-2.5min为样品在水-乙腈相中流动，2.5min-7min为样品在乙腈-异丙醇相流动，测定维生素a在328nm处和维生素e在296nm处光的吸收值，将测定结果分析制成标准曲线；s4、将血液样本也通过5cm的十八烷基键合硅胶柱为色谱柱进行高效液相色谱法测定，保持柱温为40℃，流速为1ml/min，运行时间为7min,流动相为水-乙腈相至乙腈-异丙醇相，其中水和乙腈的比例为60:40，乙腈和异丙醇的比例为80:20，测定时在0min-2.5min为样品在水-乙腈相中流动，2.5min-7min为样品在乙腈-异丙醇相流动，测定维生素a在328nm处和维生素e在296nm处光的吸收值，将测定结果根据标准曲线计算待测血清样品的维生素a和e的浓度。对本发明的检测方法进行专属性实验和6次重复性实验，实验结果如表一所示：实验检测结果专属性实验空白对照没有被干扰重复性实验va(rsd％)＝2.5％；ve(rsd％)＝4.5％由表一的实验结果可知：专属性实验中的空白对照没有被干扰，可以满足样品的检测需求，而va和ve的在6次重复试验中的相对标准偏差(rsd)的数值小，说明方法的的重复性好。根据质控品中测定的va和ve的光的吸收值，制定标准曲线，测量新生牛血清样本中的va和ve线性回归方程和回收率，结果如表二所示：由表二的实验结果可知：根据标准曲线制成的线性回归方程的相关系数r2的数值接近于1，说明拟合效果好，拟合的线性回归方程越逼真，而回收率也良好。对提取出的va和ve进行稳定性分析，耐用性检测和定量，结果如表三所示：由表三的实验结果可知，提取出的va和ve溶液放置在室温24小时，稳定性良好，发明方法对柱温和流速的耐用性良好，提取出的va和ve得浓度可以满足检测要求。由表一，表二和表三的结果所示，本发明提出的血液中维生素a、e的提取检测方法，能够确保维生素a、e的检测精度，缩短了检测时间，提高了检测效率，可以让维生素a和维生素e快速出峰，峰宽变窄，从而提高了提高的灵敏度，同时也减少了分析时间。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页12