一种芍药不同部位和不同采收期化学活性成分的比较方法与流程

本发明涉及一种比较方法，具体为一种芍药不同部位和不同采收期化学活性成分的比较方法，属于有机化合物研究技术领域。

背景技术：

赤芍是常用中药，来源于芍药科植物芍药或川赤芍，传统认为赤芍应是野生芍药或川赤芍的直接干燥根，其品质高于以加工成白芍为主的栽培芍药巧，赤芍具有清热凉血、散瘀止痛功效，用于温毒发斑、吐血衄血、目赤肿痛等。

而芍药苷是中国药典中规定的赤芍质量指标成分，儿茶素也被称为赤芍精，具有抗氧化活性及活血化瘀作用，也是赤芍中的重要药效成分；没食子酸具有清除活性氧自由基等作用，能抗氧化和抗血小板凝集；苯甲酸是赤芍中的有毒或有害成分,但赤芍中上述这些活性成分含量在一年四季中有何变化目前还不是十分清楚，而且芍药或川赤芍的不同生长部位以及生长年限与主要药效成分含量也有所不同，因此需要对芍药不同部位和不同采收期化学活性成分进行比较。

技术实现要素：

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种芍药不同部位和不同采收期化学活性成分的比较方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：一种芍药不同部位和不同采收期化学活性成分的比较方法，其比较方法包括以下步骤

步骤a：取材，选取不同采收时期和不同部位的芍药植株；

步骤b：分类，将不同部位的芍药植株按部位进行分类放置；

步骤c：制备供品溶液，将所选取的芍药植株通过干燥粉碎、过筛、回流提取、过滤、浓缩、定容和过膜取续滤液等操作进行制备；

其中，所述干燥粉碎先将样品置于烘箱中于105℃杀青10min，并在70℃下烘干至恒重，然后使用400y型粉碎机将干燥后的样品进行粉碎，所述过筛使用80目筛将粉碎后的样品进行筛选，所述回流提将粉碎后的样品加入到浓度为75％的乙醇溶液中得到混合液，采用回流加热装置进行加热回流，得到回流液，所述过滤使用定向滤纸进行操作，所述浓缩将滤液通过re-52a型旋转蒸发仪减压旋转蒸发至膏状，所述定容使用甲醇溶液定容至10ml，所述过膜取续滤液选用0.45um的滤膜。

步骤d：色谱分析，将续滤液倒入色谱分析的样品小瓶，放入agilent1200型高效液相色谱仪内，获得色谱图；

步骤e：制备标准曲线，取制备好的对照品溶液配置不同浓度，分别进样10ul，记录色谱图，由峰面积对相应的浓度直线回归，得芍药苷回归方程；

其中，所述称取标准对照品精密称取一定重量的芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酸、苯甲酸和丹皮酚对照品，所述制备对照品溶液将称取的对照品加入甲醇置于量瓶内，制成混合溶液，所述稀释分别稀释成2、4、8、32、64和128倍，所述测定峰值面积在色谱条件下分别对各对照品进样测定，所述制线性方程利用spss统计软件计算各对照品浓度与色谱峰面积的线性回归方程和r值。

步骤f：对比分析，将色谱分析所获得的数值进行记录，再根据线性方程，分别计算出不同部位和不同采收期芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酸、苯甲酸和丹皮酚的含量。

优选的，为了，所述步骤a中，分别在不同地点进行取材，且选取的材料进行随机抽取，使所选取的样本更具有代表性，进而避免比较结果出现较大的误差。

优选的，为了，所述步骤c中，制备供品溶液的回流提取过程在90℃条件下回流提取2次，且每次回流2小时，确保将混合液中的提取成分完全提取出来。

优选的，为了，所述步骤c中，制备供品溶液将过筛的样品粉末用50％的乙醇浸泡30min，能够将样品中的芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酸、苯甲酸和丹皮酚等成分分离出来。

优选的，为了，所述步骤d中，色谱分析条件为色谱柱:diamonsilcis柱(250mmx4.6mmid,5pum)；流动相:流动相a为乙腈，流动相b为0.025％磷酸水溶液；梯度洗脱条件:0～18min,a:5％`12％；18`22min,a:12％`15％；22`32min,a:15％；32～45min,a:15％`20％；45～55min,a:20％；55`75min,a:20％-+40％；75～80min,a:40％；检测波长:2301111e柱温:室温；进样量:5μl；理论板数按芍药苷峰计算不低于5000,灵敏度较高，能够在较短的时间获得较高的分离度。

本发明的有益效果是：该芍药不同部位和不同采收期化学活性成分的比较方法设计合理，步骤a中，分别在不同地点进行取材，且选取的材料进行随机抽取，使所选取的样本更具有代表性，进而避免比较结果出现较大的误差，步骤c中，制备供品溶液的回流提取过程在90℃条件下回流提取2次，且每次回流2小时，确保将混合液中的提取成分完全提取出来，步骤c中，制备供品溶液将过筛的样品粉末用50％的乙醇浸泡30min，能够将样品中的芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酸、苯甲酸和丹皮酚等成分分离出来，步骤d中，色谱分析条件为色谱柱:diamonsilcis柱(250mmx4.6mmid,5pum)；流动相:流动相a为乙腈，流动相b为0.025％磷酸水溶液；梯度洗脱条件:0～18min,a:5％`12％；18`22min,a:12％`15％；22`32min,a:15％；32～45min,a:15％`20％；45～55min,a:20％；55`75min,a:20％-+40％；75～80min,a:40％；检测波长:2301111e柱温:室温；进样量:5μl；理论板数按芍药苷峰计算不低于5000,灵敏度较高，能够在较短的时间获得较高的分离度。

附图说明

图1为本发明比较方法流程结构示意图；

图2为本发明制备供品溶液流程结构示意图；

图3为本发明制备标准曲线流程结构示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1～3，一种芍药不同部位和不同采收期化学活性成分的比较方法，其比较方法包括以下步骤

步骤a：取材，选取不同采收时期和不同部位的芍药植株；

步骤b：分类，将不同部位的芍药植株按部位进行分类放置；

步骤c：制备供品溶液，将所选取的芍药植株通过干燥粉碎、过筛、回流提取、过滤、浓缩、定容和过膜取续滤液等操作进行制备；

其中，所述干燥粉碎先将样品置于烘箱中于105℃杀青10min，并在70℃下烘干至恒重，然后使用400y型粉碎机将干燥后的样品进行粉碎，所述过筛使用80目筛将粉碎后的样品进行筛选，所述回流提将粉碎后的样品加入到浓度为75％的乙醇溶液中得到混合液，采用回流加热装置进行加热回流，得到回流液，所述过滤使用定向滤纸进行操作，所述浓缩将滤液通过re-52a型旋转蒸发仪减压旋转蒸发至膏状，所述定容使用甲醇溶液定容至10ml，所述过膜取续滤液选用0.45um的滤膜。

步骤d：色谱分析，将续滤液倒入色谱分析的样品小瓶，放入agilent1200型高效液相色谱仪内，获得色谱图；

步骤e：制备标准曲线，取制备好的对照品溶液配置不同浓度，分别进样10ul，记录色谱图，由峰面积对相应的浓度直线回归，得芍药苷回归方程；

其中，所述称取标准对照品精密称取一定重量的芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酸、苯甲酸和丹皮酚对照品，所述制备对照品溶液将称取的对照品加入甲醇置于量瓶内，制成混合溶液，所述稀释分别稀释成2、4、8、32、64和128倍，所述测定峰值面积在色谱条件下分别对各对照品进样测定，所述制线性方程利用spss统计软件计算各对照品浓度与色谱峰面积的线性回归方程和r值。

步骤f：对比分析，将色谱分析所获得的数值进行记录，再根据线性方程，分别计算出不同部位和不同采收期芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酸、苯甲酸和丹皮酚的含量。

所述步骤a中，分别在不同地点进行取材，且选取的材料进行随机抽取，使所选取的样本更具有代表性，进而避免比较结果出现较大的误差，所述步骤c中，制备供品溶液的回流提取过程在90℃条件下回流提取2次，且每次回流2小时，确保将混合液中的提取成分完全提取出来，所述步骤c中，制备供品溶液将过筛的样品粉末用50％的乙醇浸泡30min，能够将样品中的芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酸、苯甲酸和丹皮酚等成分分离出来，所述步骤d中，色谱分析条件为色谱柱:diamonsilcis柱(250mmx4.6mmid,5pum)；流动相:流动相a为乙腈，流动相b为0.025％磷酸水溶液；梯度洗脱条件:0～18min,a:5％`12％；18`22min,a:12％`15％；22`32min,a:15％；32～45min,a:15％`20％；45～55min,a:20％；55`75min,a:20％-+40％；75～80min,a:40％；检测波长:2301111e柱温:室温；进样量:5μl；理论板数按芍药苷峰计算不低于5000,灵敏度较高，能够在较短的时间获得较高的分离度。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。