原人参二醇检测分析方法与流程

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种原人参二醇检测分析方法。

背景技术：

人参被认为是千百年来一味名贵的中药，人参具有温补、滋养的功效，被认为是滋补的名药。但是，事实上，人参的功效病不仅在于滋补，还有它的药性。陶弘景编的《名医别录》则认为人参还对胃肠机能衰退而引起诸症有良好的治疗作用。近代研究发现人参还具有抗肿瘤作用，越来越引起国内外的重视。

肿瘤已经成为近年来人们广泛关注的话题，肿瘤从一至多，虽然治疗手段在不断完善，但是仍然是全世界难以攻克的难题，癌症，至今仍然是绝症。越来越多的科研人员将人参、红豆杉等天然植物作为抗肿瘤药物的重点研究对象。对人参的七十多年研究中发现，人参中的物质除了在主体中发现的皂苷类之外，还有人参根中提取分离出糖类、挥发油类、脂肪油、街醇类及氨基酸类、维生素类等物质。而从人参主体中提取的皂苷类物质经过十几年的研究，在药理和临床试验中发现了人参皂苷不仅有与人参相似的药理作用，且发现它可能具有抗肿瘤的作用。

原人参二醇类皂苷(ppd)与原人参三醇类皂苷(ppt)是人参皂苷中的两类主要成分，均有相同的类固醇骨架结构。在20(s)—原人参二醇(ppd)对肝癌作用的研究显示，ppd从人参西洋参中提纯，通过体内试验增效减毒试验肿瘤免疫学试验及分子生物学试验证实，ppd具有良好的抗癌活性，对肝癌h22、lewis肺癌及黑色素瘤b16均具有明显的生长抑制作用，并可增强机体免疫力，具有提高自然杀伤细胞(nk)白细胞介素-2(il-2)活性的作用。另外，同类研究表明，ppd具有抑制肿瘤细胞增殖；诱导癌细胞调亡；调节机体免疫功能；抑制肿瘤组织侵袭与转移、抑制肿瘤新生血管形成等作用。

肿瘤的发生不仅仅是细胞增殖和分化的过程，同时也和细胞凋零异常有关。许多抗癌药物如拓扑异构酶抑制剂、烷化剂、抗代谢药物及激素拮抗剂等都有诱导细胞凋亡的作用，但其毒副作用限制其临床应用。在20(s)—原人参二醇(ppd)ppd与环磷酰胺类药物的对比研究中发现，ppd较环磷酰胺有更强的促凋亡作用，而毒副作用较环磷酰胺弱，因此将是抗癌类新药研究崭新的开篇。故而亟需一种能准确检测原人参二醇含量的检测方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种原人参二醇检测分析方法。

为解决上述技术问题，发明采用如下所述的技术方案。一种原人参二醇检测分析方法，其采用高效液相色谱法进行检测分析，分别检测待测样品和已知浓度的对照品，依据检测结果和对照品的浓度按照外标法计算即可得到待测样品中原人参二醇的含量；

所述高效液相色谱法中，采用的流动相为水、乙腈，在0-45min内梯度洗脱；在梯度洗脱过程中，所述流动相中水所占体积百分比从67％降至10％再升至67％，所述流动相中乙腈所占体积百分比从33％升至90％再降至33％。

优选地，在梯度洗脱过程中，所述流动相中水所占体积百分比从67％先降至40％再降至10％再升至67％，所述流动相中乙腈所占体积百分比从33％先升至60％再升至90％再降至33％。

优选地，在梯度洗脱过程中，0-10min流动相为67％水和33％乙腈，10-21min流动相为40％水和60％乙腈，21-40min流动相为10％水和90％乙腈，40-45min流动相为67％水和33％乙腈。

优选地，所述流动相的流速为1.0ml/min。

优选地，所述高效液相色谱法中，使用的色谱柱为c18填料，粒径为5μm。

优选地，所述色谱柱的柱温为40℃。

优选地，所述色谱柱的规格为4.6*250mm。

优选地，所述高效液相色谱法中，检测波长为203nm。

本发明的有益效果在于：

1、本发明提供的检测方法可准确检测样品中原人参二醇ppd的含量，准确度高于现有检测方法；有效提高了原人参二醇ppd含量的检测效率和检测精确度。

2、通过对本发明原人参二醇ppd的含量测定方法进行空白、检出限、定量限、线性、精密度、稳定性、回收率试验，均符合gb/t27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明含量测定方法科学有效，能对人参中的原人参二醇ppd含量起到质量控制的目的。

附图说明

图1是ppd标准品溶液的高效液相色谱图(横坐标为时间，纵坐标为电压)。

具体实施方式

为使本领域的普通技术人员更加清楚地理解发明的目的、技术方案和优点，以下结合附图和实施例对发明做进一步的阐述。

一种原人参二醇检测分析方法，其采用高效液相色谱法进行检测分析，分别检测待测样品和已知浓度的对照品，依据检测结果和对照品的浓度按照外标法计算即可得到待测样品中原人参二醇的含量；所述高效液相色谱法中，采用的流动相为水、乙腈，在0-45min内梯度洗脱；在梯度洗脱过程中，所述流动相中水所占体积百分比从67％降至10％再升至67％，所述流动相中乙腈所占体积百分比从33％升至90％再降至33％。

本发明的有益效果在于：

1、本发明提供的检测方法可准确检测样品中原人参二醇ppd的含量，准确度高于现有检测方法；有效提高了原人参二醇ppd含量的检测效率和检测精确度。

2、通过对本发明原人参二醇ppd的含量测定方法进行空白、检出限、定量限、线性、精密度、稳定性、回收率试验，均符合gb/t27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明含量测定方法科学有效，能对人参中的原人参二醇ppd含量起到质量控制的目的。

优选地，在梯度洗脱过程中，所述流动相中水所占体积百分比从67％先降至40％再降至10％再升至67％，所述流动相中乙腈所占体积百分比从33％先升至60％再升至90％再降至33％。进一步的是，在梯度洗脱过程中，0-10min流动相为67％水和33％乙腈，10-21min流动相为40％水和60％乙腈，21-40min流动相为10％水和90％乙腈，40-45min流动相为67％水和33％乙腈。通过确定梯度洗脱过程中的条件，进一步提高原人参二醇ppd含量的检测效率和检测精确度。优选地，所述流动相的流速为1.0ml/min。

原人参二醇是一种达玛烷型三萜皂苷元，难溶于水，易溶于甲醇等有机溶剂，分子极性小，在c18色谱柱上保留很强。因此一般将样品溶于甲醇配制成相应的溶液后进行检测。优选地，所述高效液相色谱法中，使用的色谱柱为c18填料，粒径为5μm。优选地，所述色谱柱的柱温为40℃。优选地，所述色谱柱的规格为4.6*250mm。优选地，所述高效液相色谱法中，检测波长为203nm。通过确定色谱柱的参数以及检测波长，保证原人参二醇ppd含量的检测效率和检测精确度。

下面提供一具体实施例

所用仪器为agilent1260infinityⅱ

色谱条件如下表所示：

样品处理为：

(1)对照品：取对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，配成0.20mg/ml的浓度。

(2)供试品：称取100mg供试品粉末，置于50ml容量瓶，加甲醇溶解定容，配成浓度为2.0mg/ml的供试品溶液，过滤后进样。

图1为ppd标准品溶液的高效液相色谱图(横坐标为时间，纵坐标为电压)，也即0.20mg/ml的浓度的对照品的高效液相色谱图，rt30.74即为ppd的峰。

结果计算为：使用外标对照法计算供试品的主成分含量。