一种利用高压微波辅助-半仿生法提取制备皂苷富集物的方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用高压微波辅助?半仿生法提取制备皂苷富集物的方法，包括以下步骤：（1）取人参或西洋参粉末为原料，加入缓冲液，调节pH值为3.5~5.5，加入提取复合酶，酶解，过滤，得滤渣1和滤液1；（2）取滤渣1，加入缓冲液，调节pH值为1.5~3.0，高压微波处理，过滤得滤渣2和滤液2；（3）取滤渣2，加入缓冲液，调节pH值为7.5~8.5，高压微波处理，过滤得滤液3；（4）合并滤液，加入缓冲液，调节pH值为中性，高压微波处理后，过树脂，洗脱，浓缩、干燥即为皂苷富集物。该方法模拟皂苷口服后在胃肠道内吸收转运过程，利于活性成分浸出，提高皂苷提取效率，所得提取物稀有皂苷含量高、抗肿瘤活性强。
【专利说明】
一种利用高压微波辅助-半仿生法提取制备皂苷富集物的 方法
技术领域
[0001] 本发明属于医药卫生技术领域，具体涉及一种利用高压微波辅助-半仿生法提取 制备皂苷富集物的方法。
【背景技术】
[0002] 人参(Panax ginseng)和西洋参(Panax quinquefolius)为珍贵的药用植物，五加 科，具有补肾、补血、保护心脏、调节血糖血压、增强免疫力等功能。人参皂苷是人参和西洋 参中富含的一类主要活性成分，分为原人参二醇类皂苷、原人参三醇类皂苷及齐墩果酸类 皂苷，对中枢系统、内分泌系统等都表现出一定的调节作用。人参和西洋参中含量较高的人 参皂苷有 Rgi、Re、Rbi、R。、Rb2和Rd等，一些含量较低的皂苷 Rlu、Rh2、Rh3、Rg3、Rg5、Rg6、Rh、Rk 3、 Rh4、F4、C_k等被称为次级人参皂苷或稀有人参皂苷。研究结果表明，一些次级人参皂苷具有 较强的药理活性，例如人参皂苷RhuRgs具有抗癌的功效，其中Rg 3具有抗肿瘤细胞的浸润和 转移等作用。人参和西洋参的稀有皂苷含量极低，很难通过传统的提取方法直接从药材中 提取得到，通常是先从人参和西洋参中富集含量丰富的人参皂苷，再将其降解来获得稀有 人参皂苷。
[0003] 微波应用于中药有效成分的提取，在提高提取效率的同时还为实验体系带来非致 热效应，具有萃取时间短、萃取效率高及重现性好等优点。人参皂苷类成分糖苷键以及母核 侧链中的部分化学键属于相对较弱的化学键，易于发生断裂和重组。因此，利用微波技术可 加速实现常见人参皂苷向稀有人参皂苷的转变。超高压提取是在常温下用10~l〇〇〇MPa的液 体静压力作用于药液上，使提取溶剂渗透到细胞内，在预定压力下保持一段时间使有效成 分达到溶解平衡后迅速卸压，由于细胞内外渗透压力差突然增大，细胞内的有效成分转移 到细胞外的提取液中，达到提取有效成分的目的。王玉堂等采用高压微波提取法直接从人 参中提取得到稀有人参皂苷，该方法使提取和降解一步完成，为稀有皂苷富集物的提取提 供了新的方法[王玉堂，高等学校化学学报，2007, 28(12)]。
[0004] 半仿生提取法是模仿口服给药在胃肠道的转运过程，采用选定的pH值的水提取的 方法。该方法的提取过程符合中医配伍、临床用药的特点，能将中药或复方的药效物质最大 限度的提取出来。半仿生提取法刚提出时一直采用高温水煎煮法，水煎煮法能够提高提取 效率，但也会造成活性成分的破坏和挥发，同时杂质成分较多，不利于精制。CN102512469A 公开了一种人参地上部分半仿生加液泛提取制备技术，该方法技术先进，简单易行，但该方 法较温和，提高人参稀有皂苷含量的作用有限。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种利用高压微波辅助-半仿生法提取制备皂苷富集物的方法，该 方法利于活性成分的浸出，提高皂苷提取效率，得到的提取物，稀有皂苷含量高、抗肿瘤活 性强。
[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的： 一种利用高压微波辅助-半仿生法提取制备皂苷富集物的方法，包括以下步骤： (1)取人参或西洋参粉末为原料，加入缓冲液，调节pH值为3.5~5.5，混匀后加入占原料 质量0.3%~0.6%的消除植物细胞壁的酶，酶解，过滤，得滤渣1和滤液1; (2 )取滤渣1，加入缓冲液，调节pH值为1.5~3.0，充分混匀，高压微波处理，过滤得滤渣2 和滤液2; (3) 取滤渣2，加入缓冲液，调节pH值为7.5~8.5，充分混匀，高压微波处理，过滤得滤液 3； (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，加入缓冲液，调节pH值为中性，高压微波处理后，过D101 或AB-8型大孔吸附树脂，洗脱，洗脱液浓缩、干燥即为皂苷富集物。树脂吸附洗脱的条件为： 预吸附1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min;超纯水洗至流出液近无色;65% ~70%乙醇水溶液洗脱，用量5倍柱体积，洗脱流速为1 mL/min，收集洗脱液，减压浓缩，真空 干燥，得到皂苷富集物。真空干燥温度为40°〇55°C。
[0007] 优选地，步骤(1 )、（ 2)、（ 3)和(4)中所述的缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。
[0008] 优选地，步骤（1)中消解植物细胞壁的酶为纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶与β-葡聚 糖酶组成的复合酶，复合酶中β-葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶2 40万u/g，木聚糖酶2 260 万u/g，果胶酶2 2万u/g。
[0009] 优选地，步骤(1)中酶解的温度为50~60°C，时间为1~2 h; 步骤(2)中高压微波处理的压力为400~600 KPa，时间为10 min; 步骤(3)中高压微波处理的压力为400~600 KPa，时间为10 min; 步骤(4)中高压微波处理的压力为400~600 KPa，时间为10 min。
[0010] 本发明的有益成果是： 1.本发明提供了一种利用高压微波辅助-半仿生法提取制备皂苷富集物的方法，高压 微波辅助和半仿生提取法的联合应用，能够实现人参稀有皂苷提取和转化的同步进行。现 有技术多采用半仿生酸提取之后进行酶解反应，本发明在半仿生法提取之前进行酶解反 应，更加有利于皂苷类成分的提取，同时将酶解步骤中的提取液放入高压微波辅助系统中， 促进人参皂苷向稀有人参皂苷的转化，提高稀有皂苷转化率。
[0011] 2.应用半仿生提取法，符合中医配伍、临床用药及口服给药在人体胃肠道中转运 和吸收的特点，可以增强所得稀有皂苷提取物在人体内的吸收利用。pH值为1.5~3.0的条件 时模拟人体胃液的H+的浓度，在高压微波辅助下，人参皂苷水解，环合生成人参二醇和人参 三醇的衍生物，得到稀有皂苷;pH值为7.5~8.5的条件时，模拟人参皂苷在人体肠道内的转 运吸收过程，增强口服药物在肠道内的吸收利用，提高药物生物利用度;微波压力设置为 400~600 KPa，有利于人参皂苷降解，向稀有人参皂苷转化。
[0012] 3.提取过程中，加入能够消解植物细胞壁的酶，对中草药细胞壁的有效成分进行 分解破坏，有利于活性成分的浸出，并能够使大分子物质转化成小分子物质，更利于人参皂 昔的提取，提尚提取效率。加入的缓冲溶液，无毒、化学性质稳定。
[0013] 4.所得人参或西洋参皂苷提取物，富含稀有人参皂苷，其抗肿瘤活性显著高于市 售普通人参或西洋参皂苷。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1 (1) 取人参粉末，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为4.0，加入纤维素酶、木聚 糖酶、果胶酶与葡聚糖酶组成的提取复合酶，复合酶中葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶 2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/g，果胶酶2 2万u/g，酶的用量为人参粉末质量的0.3%，在60 °C下水浴酶解，水浴时间为1 h，过滤得滤液1和滤渣1; (2) 取滤渣1，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为3.0，充分混匀，置于提取罐 中，将罐密封后放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为400 KPa，时间设定为10 min， 提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液2和滤渣2; (3) 取滤渣2，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为7.5，充分混匀，将罐密封后 放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为400 KPa，时间设定为10 min，提取完毕后取 出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液3; (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为中性，高压 微波处理，压力为400 KPa，时间为10 min，滤液过D101大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流 出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min。超纯水洗至流出液近无色，65%乙醇水溶液洗脱，收 集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，干燥温度为 40°C，得到富含稀有皂苷的人参提取物。
[0015]所得富含稀有皂苷的人参提取物中人参皂苷含量为75.3%。
[0016] 实施例2 (1) 取人参粉末，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为5.0，加入纤维素酶、木聚 糖酶、果胶酶与葡聚糖酶组成的提取复合酶，复合酶中葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶 2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/g，果胶酶2 2万u/g，酶的用量为人参粉末质量的0.6%，在50 °C下水浴酶解，水浴时间为2 h，过滤得滤液1和滤渣1; (2) 取滤渣1，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为1.5,充分混匀，置于提取罐 中，将罐密封后放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min。 提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液2和滤渣2; (3) 取滤渣2，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为8.5，充分混匀，将罐密封后 放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min，提取完毕后取 出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液3; (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为中性，高压 微波处理，压力为600 KPa，时间为10 min，滤液过D101型大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱 流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min。超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱， 收集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，干燥温度 为55°C，得到富含稀有皂苷的人参提取物。
[0017]所得富含稀有皂苷的人参提取物中人参皂苷含量为79.2%。
[0018] 实施例3 (1)取西洋参样品，粉碎过40目筛，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为3.5，混 匀后加入西洋参粉末质量0.3%的消解植物细胞壁的提取复合酶，酶为纤维素酶、木聚糖酶、 果胶酶与β-葡聚糖酶组成的提取复合酶，提取复合酶中β-葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶 2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/g，果胶酶2 2万u/g，在60°C下水浴酶解，水浴时间为1 h，过 滤得滤液1和滤渣1; (2) 取滤渣1，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为3.0，充分混匀，置于提取罐 中，将罐密封后放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为400 KPa，时间设定为10 min， 提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液2和滤渣2; (3) 取滤渣2，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为7.5，充分混匀，将罐密封后 放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为400 KPa，时间设定为10 min，提取完毕后取 出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液3; (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为中性，高压 微波处理，压力为400 KPa，时间为10 min，滤液过D101大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流 出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min。超纯水洗至流出液近无色，65%乙醇水溶液洗脱，收 集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含稀 有皂苷的西洋参提取物。
[0019]所得富含稀有皂苷的西洋参提取物中人参皂苷含量为73.1%。
[0020] 实施例4 (1) 取西洋参样品，粉碎过60目筛，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为5.5，混 匀后加入提取复合酶，酶为纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶与β-葡聚糖酶组成的复合酶，复合 酶中β-葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/g，果胶酶2 2万u/g， 酶的用量为西洋参粉末质量的0.5%，在50°C下水浴酶解，水浴时间为2 h，过滤得滤液1和滤 渣1; (2) 取滤渣1，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为1.5,充分混匀，置于提取罐 中，将罐密封后放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min， 提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液2和滤渣2; (3) 取滤渣2，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为8.5，充分混匀，将罐密封后 放置于微波样品处理系统中，微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min。提取完毕后取 出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液3; (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为中性，高压 微波处理，压力为600 KPa，时间为10 min，滤液过D101型大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱 流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min。超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱， 收集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含 稀有皂苷的西洋参提取物。
[0021]所得富含稀有皂苷的西洋参提取物中人参皂苷含量为78.6%。
[0022] 对比例1 (1)取人参粉末，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为5.0，混 匀后加入提取复合酶，酶为纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶与β-葡聚糖酶组成的复合酶，提取 复合酶中β-葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/g，果胶酶2 2万 u/g，酶的用量为人参粉末质量的0.5%，在50°C下水浴酶解，水浴时间为2 h，过滤得滤液1和 滤渣1; (2) 取滤渣1，调节pH为中性，按1:10的料液比加入水，充分混匀，置于提取罐中，将罐密 封后放置于微波样品处理系统中。微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min。提取完毕 后取出提取罐，过滤罐内提取液，连续提取两次，合并滤液，过滤得滤液2; (3) 合并滤液1和滤液2，调节pH值为中性，高压微波处理，压力为600 KPa，时间为10 min，滤液过D101大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/ min。超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱流 速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含稀有皂苷的人参提取物。
[0023]所得富含稀有皂苷的人参提取物中人参皂苷含量为68.4%。
[0024] 对比例2 (1) 取人参粉末，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为5.0，混 匀后加入提取复合酶，酶为纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶与β-葡聚糖酶组成的提取复合酶， 提取复合酶中葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/g，果胶酶 2 2万u/g，在50°C下水浴酶解，水浴时间为2 h，酶的用量为人参粉末质量的0.5%，过滤得滤 渣1和滤液1; (2) 取滤渣1，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为1.5，充分混 匀，超声提取1 h，过滤得滤渣2和滤液2; (3) 取滤渣2，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为8.5，充分混 匀，超声提取1 h，得滤液3。
[0025] (4)合并滤液1、滤液2和滤液3，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为中性， 滤液过D101型大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min。 超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含稀有皂苷的西洋参提取物。
[0026]所得富含稀有皂苷的人参提取物中人参皂苷含量为73.2%。
[0027] 对比例3 (1) 取人参粉末，按1:1 〇的料液比加入水，混匀后在50 °C下水浴提取，水浴时间为2 h， 过滤得滤液1和滤渣1; (2) 取滤渣1，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为1.5，充分混 匀，置于提取罐中，将罐密封后放置于微波样品处理系统中。微波压力设定为600 KPa，时间 设定为10 min。提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液2和滤渣2; (3) 取滤渣2，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为8.5，充分混 匀，将罐密封后放置于微波样品处理系统中。微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min。 提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液得滤液3; (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，调节pH值为中性，高压微波处理，压力为600 KPa，时间 为10 min，滤液过D101大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min。超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱 流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含稀有皂苷的人参提取物。
[0028]所得富含稀有皂苷的人参提取物中人参皂苷含量为65.3%。
[0029] 对比例4 (1)取西洋参样品，粉碎过筛，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH 值为5.0,混匀后加入提取复合酶，酶为纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶与β-葡聚糖酶组成的提 取复合酶，提取复合酶中葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/ g，果胶酶2 2万u/g，酶的用量为西洋参粉末质量的0.5%，在50°C下水浴酶解，水浴时间为2 h，过滤得滤液1和滤渣1; (2) 取滤渣1，调节pH为中性，按1:10的料液比加入水，充分混匀，置于提取罐中，将罐密 封后放置于微波样品处理系统中。微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min。提取完毕 后取出提取罐，过滤罐内提取液，连续提取两次，合并滤液，过滤得滤液2; (3) 合并滤液1和滤液2，调节pH值为中性，高压微波处理，压力为600 KPa，时间为10 min，滤液过D101大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/ min。超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱流 速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含稀有皂苷的西洋参提取物。
[0030]所得富含稀有皂苷的西洋参提取物中人参皂苷含量为67.3%。
[0031] 对比例5 (1) 取西洋参样品，粉碎过筛，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH 值为5.0,混匀后加入提取复合酶，酶为纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶与β-葡聚糖酶组成的提 取复合酶，提取复合酶中葡聚糖酶2 300万u/g，纤维素酶2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/ g，果胶酶2 2万u/g，酶的用量为西洋参粉末质量的0.5%，在50°C下水浴酶解，水浴时间为2 h，过滤得滤渣1和滤液1; (2) 取滤渣1，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为1.5，充分混 匀，超声提取1 h，过滤得滤渣2和滤液2; (3) 取滤渣2，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为8.5，充分混 匀，超声提取1 h，过滤得滤液3。
[0032] (4)合并滤液1、滤液2和滤液3，调节pH值为中性，高压微波处理，压力为600 KPa， 时间为10 min，滤液过D101型大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流 速2.0 mL/min。超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，用量5倍柱体 积，洗脱流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含稀有皂苷的西洋参提取物。 [0033]所得富含稀有皂苷的西洋参提取物中人参皂苷含量为70.5%。
[0034] 对比例6 (1) 取西洋参样品，粉碎过筛，按1:10的料液比加入水，混匀后在50°C下水浴提取，水浴 时间为2 h，过滤得滤渣1和滤液1; (2) 取滤渣1，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为1.5，充分混 匀，置于提取罐中，将罐密封后放置于微波样品处理系统中。微波压力设定为600 KPa，时间 设定为10 min。提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液2和滤渣2; (3) 取滤渣2，按1:10的料液比加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，调节pH值为8.5，充分混 匀，将罐密封后放置于微波样品处理系统中。微波压力设定为600 KPa，时间设定为10 min。 提取完毕后取出提取罐，过滤罐内提取液，得滤液3; (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，调节pH值为中性，高压微波处理，压力为600 KPa，时间 为10 min，滤液过D101大孔吸附树脂，预吸附1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min。超纯水洗至流出液近无色，70%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，用量5倍柱体积，洗脱 流速为1 mL/min。洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到富含稀有皂苷的西洋参提取物。
[0035]所得富含稀有皂苷的西洋参提取物中人参皂苷含量为67.1%。
[0036]人参总皂苷的含量测定： 以人参皂苷Re为对照品（上海圻明生物医药公司提供），香草酸-冰醋酸显色后，用分光 光度法在波长为555 nm处进行吸光度测定，以吸光度值(Y)对人参皂苷质量(X)进行线性回 归，回归方程为Y = 4.9821X+0.0003(R = 0.9996)。根据回归方程计算提取物中皂苷含量。 [0037] 细胞毒测试： 实验肿瘤细胞系:K-562，人慢性髓原白血病细胞；Hela，人宫颈癌细胞。取实施例2、实 施例4、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、对比例5和对比例6制备的样品，西洋参皂苷和 人参皂苷购自吉林参业有限公司。
[0038]实验方法:体外抗肿瘤细胞实验按不同剂量加入人参提取物样品。
[0039]实验结果：
实验结果显示，应用本方法实施例2和实施例4所得富含稀有皂苷的人参和西洋参提取 物中，人参皂苷含量高于单独应用高压微波辅助提取法和半仿生提取法;所得富含稀有皂 苷的人参和西洋参提取物的K-562和Hela细胞株抑制活性显著高于高压微波辅助提取法和 半仿生提取法单独应用制备得到的人参和西洋参皂苷富集物(P〈〇. 05)。
[0040]实施例仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任 何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发 明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种利用高压微波辅助-半仿生法提取制备皂苷富集物的方法，其特征在于包括以 下步骤： (1) 取人参或西洋参粉末为原料，加入缓冲液，调节pH值为3.5~5.5，混匀后加入占原料 质量0.3%~0.6%的消解植物细胞壁的酶，酶解，过滤，得滤渣1和滤液1; (2) 取滤渣1，加入缓冲液，调节pH值为1.5~3.0，充分混匀，高压微波处理，过滤得滤渣2 和滤液2; (3) 取滤渣2，加入缓冲液，调节pH值为7.5~8.5，充分混匀，高压微波处理，过滤得滤液 3； (4) 合并滤液1、滤液2和滤液3，加入缓冲液，调节pH值为中性，高压微波处理后，过D101 或AB-8型大孔吸附树脂，洗脱，洗脱液浓缩、干燥即为皂苷富集物。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)、（2)、（3)和(4)中所述的缓冲液为 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1)中消解植物细胞壁的酶为纤维素 酶、木聚糖酶、果胶酶与葡聚糖酶组成的复合酶，复合酶中葡聚糖酶2 300万u/g，纤维 素酶2 40万u/g，木聚糖酶2 260万u/g，果胶酶2 2万u/g。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于， 步骤（1)中酶解的温度为50~60 °C，时间为1~2 h; 步骤(2)中高压微波处理的压力为400~600 KPa，时间为10 min; 步骤(3)中高压微波处理的压力为400~600 KPa，时间为10 min; 步骤(4)中高压微波处理的压力为400~600 KPa，时间为10 min。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中树脂吸附洗脱的条件为:预吸附 1小时，过柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/min;超纯水洗至流出液近无色;65%~70%乙 醇水溶液洗脱，用量5倍柱体积，洗脱流速为1 mL/min，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得 到皂苷富集物。6. 根据权利要求1所述的方法，步骤(4)所述的真空干燥温度为40t>55°C。
【文档编号】A61P35/00GK105832789SQ201610322779
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】刘扬, 陈志永, 马祎博, 高开华, 聂静
【申请人】威海松龄诺可佳中药饮片股份有限公司