一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法与流程

本发明涉及体外诊断试剂
技术领域：
，具体涉及一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法。
背景技术：
：滴虫性阴道炎和霉菌性阴道炎均为妇科常见病、多发病。滴虫性阴道炎易发生于孕龄妇女，霉菌性阴道炎易发生在孕妇，糖尿病以及肥胖者。国外报道约有80％的孕妇阴道携带霉菌，携带者出现症状可高达60％-90％。对1000例孕妇进行白带图片检查，霉菌性检出率高达18.7％，其中6.6％有临床症状。而主要的发病是由于感染的阴道毛滴虫消耗了阴道内的糖原，破坏了阴道的自净防御机能，继发细菌感染所致。临床上，滴虫培养一直是国内及国际公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，但临床上检测滴虫基本上是常规镜检。显微镜镜检对镜检人员经验性要求高，且气温低可影响滴虫的活动性而导致漏检。经过临床研究表明，滴虫具有α-葡萄糖醛酸酶特异性酶，故可以通过检测α-葡萄糖醛酸酶来判定滴虫感染。真菌性阴道炎由真菌(主要为白色念珠菌属)感染引起，其发病率已高于滴虫性阴道炎。真菌有许多种，在人体最主要的为白色念珠菌属。常规镜检法检测念珠菌，镜下不易观察到念珠菌孢子及菌丝，极易漏检及误检。α-葡萄糖醛酸酶和脯氨酸氨基肽酶均为白色念珠菌的特异性酶。故干化学酶法的检测试纸，通过检测酶的活性来判定念珠菌感染，可以降低念珠菌漏检率。由于滴虫、真菌均分泌α-葡萄糖醛酸酶，所以采用干化学法检测α-葡萄糖醛酸酶对患者的临床检测具有一定的指导意义。α-葡萄糖醛酸酶作为木聚糖降解的限速酶之一，在木聚糖类半纤维素的生物转化中起着重要的作用，但是α-葡萄糖醛酸酶具有很低的生物活性，并且对人工生色底物不能分解，因此，到目前为止，该酶活性的测定还不能用人工生色底物来替代。常用于α-葡萄糖醛酸酶活性分析的底物主要有4-o-甲基葡萄糖醛基木二糖，木三糖(4-o-meglcax2，4-o-meglcax3)，4-d-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇(4-o-meglca-xylitol)等天然底物，结果产生的4-o-甲基葡萄糖醛酸(4-o-meglca)使得还原糖增加而显示出其活性，基于这种特点，使得这种检测α-葡萄糖醛酸酶的方法具有一定的特异性。最早采用的方法有气相色谱，离子交换色谱，薄层色谱和硼酸盐复合物离子交换色谱对酶降解产物进行分离。其中离子交换色谱是检测4-o-甲基葡萄糖醛酸酶活性的有效工具，但是，该法操作比较繁琐，不利于指导滴虫性阴道炎和霉菌性阴道炎的临床检测。技术实现要素：本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，制备的检测试纸具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备浸液a包括底物、缓冲溶液和辅助试剂；将底物溶解于带缓冲溶液和辅助试剂的溶液中，得到浸液a；所述底物为4-o-甲基葡萄糖基木寡糖、或者其不同糖链衍生物，或者为4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇、或者其衍生物；所述缓冲溶液为磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或者柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；所述辅助试剂为酸类物质醋酸钠、硫酸钠、氯化钠或者酒石酸；浸液b包括显色剂、稳定剂和分散剂；将显色剂溶于含有稳定剂和分散剂的水溶液中，制备得到浸液b；所述显色剂为盐类试剂砷酸钠或者钼酸铵；所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或者阿拉伯糖；所述分散剂pvp-k30、pvp-k90、peg-2000、peg-4000和peg-6000中的一种或者多种；步骤2、检测试纸的制备步骤2-1、用步骤1的浸液a浸润滤纸后进行干燥处理，干燥的温度为60℃-80℃；步骤2-2、用浸液b浸润步骤2-1的滤纸后进行干燥处理，干燥温度为60℃-80℃，即制备得到α-葡萄糖醛酸酶检测试纸。在上述技术方案中，所述底物为4-o-甲基葡萄糖基木二糖、4-o-甲基葡萄糖基木三糖、4-o-甲基葡萄糖基木四糖、4-o-甲基葡萄糖基木五糖或4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇。在上述技术方案中，所述底物的浓度为20.0-60.0mg/ml，缓冲溶液的浓度为0.05-2mm、ph为4.0-9.0，辅助试剂的浓度为30.0-50.0mg/ml。在上述技术方案中，所述缓冲溶液的浓度为0.75-1.5mm、ph范围在5.0-8.0。在上述技术方案中，所述显色剂的浓度为15.0-100.0mmol/l，稳定剂的浓度为1.00-20.00mg/ml，分散剂的浓度为1.00-20.00mg/ml。在上述技术方案中，步骤2-1中干燥温度为65℃-75℃。在上述技术方案中，步骤2-2中干燥温度为65℃-75℃。在上述技术方案中，检测体系的ph值为5.0-8.0。在上述技术方案中，所述滤纸的类型为7218型滤纸、31et型滤纸、3mm型滤纸或者526型滤纸。本发明的有益效果是：本发明提供的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，浸液a、b均以水为溶剂，干燥时间一致，可以减少干燥工时；浸液a中缓冲体系为反应提供一个良好的反应环境；酸类物质为反应提供一个终止条件。浸液b中分散剂pvp-k30、pvp-k90、peg-2000peg-4000、peg-6000单独或联合使用可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；稳定剂蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等可以保护样本中的酶类物质，提高检测的准确度。本发明制备的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸可作为真菌性阴道炎及滴虫性阴道炎的辅助评判指标，并结合ph值联合对阴道病类别进行准确划分，联合评判阴道炎症更具有优势，经大量临床实验证实，有形成分与干化学α-葡萄糖醛酸酶试纸之间并无完全对应关系，显微镜下无有形成分含有滴虫、孢子、菌丝等，而干化学结果为阳性，原因在于医生在采集样本的过程中操作方法，采样位置均会影响有形结果，在干化学试纸法主要检测患者阴道中微生物分泌的酶类物质，检测结果更准确，并可以实现预防的诊断意义，而目前滴虫培养一直是国内及国际公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，临床上检测滴虫及真菌多为常规镜检方法。所以有形成分与α-葡萄糖醛酸酶干化学法结果之间相互佐证，相辅相成，联合评判，对临床诊断具有重大意义。本发明依据4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇为底物，阴道微生态环境中存在α-葡萄糖醛酸酶，在此酶的水解作用下，释放出4-o-甲基葡萄糖醛酸(4-o-meglca)，产生的4-o-甲基葡萄糖醛酸(4-o-meglca)与砷钼酸钠生成蓝色物质，检测分泌物样本中α-葡萄糖醛酸酶活性，呈色深度与活性成正比。本发明中试剂配制简便，使用方便，容易操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞gmd-s600全自动妇科分泌物分析系统，在8-10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。图1为本发明制备的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸成品的结构示意图。图2为本发明采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸的干燥流程图。具体实施方式本发明的发明思想为：本发明的目的是提供一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，本发明制备的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸，包括分散在试纸块中固化的底物和显色剂，所述底物为4-o-甲基葡萄糖基木寡糖及其不同糖链衍生物，也可以是4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇及其衍生物。所述固化的试纸块：即将底物先溶解于带缓冲液能力和辅助试剂的浸液中，形成浸液a，将浸液a浸润滤纸，进行干燥制备。所述浸液a干燥的温度范围为60℃-80℃，最佳范围在65℃-75℃。所述带缓冲液能力的浸液的缓冲液ph范围在4.0-9.0，最佳范围在5.0-8.0，缓冲液浓度在0.05-2mm，最佳范围在0.75-1.5mm。浸液a中还包括辅助试剂，可以是酸类物质。所述试纸块的显色剂是盐类试剂，还含有稳定剂及分散剂，即先将显色剂溶解于含有稳定剂和分散剂的水溶液中，形成浸液b，将浸液b再次浸润滤纸，进行再次干燥。所述浸液b干燥的温度范围为60℃-80℃，最佳范围在65℃-75℃。经两次浸液的干燥，再经过裁切即成为一步法检测α-葡萄糖醛酸酶检测干化学试纸块，再用双面胶带将其固定到聚苯乙烯材质白瓷基片上，即得到所述检测试纸成品，其结构示意图参见图1。这种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的简易测定方法为：取稀释的样本，滴加一滴在试纸块上，于37℃温浴8-10min，观察α-葡萄糖醛酸酶试纸块的的颜色变化，试纸块由无色或浅黄色变成浅蓝色、蓝色、深蓝色，即判定为α-葡萄糖醛酸酶阳性。反应原理：由于α-葡萄糖醛酸酶可水解甲基葡萄糖醛酸与葡萄糖醛酸木聚糖主干上的木糖残基间的α-1，2糖苷键，所以利用α-葡萄糖醛酸酶水解底物4-o-甲基葡萄糖醛酸基木寡糖(木二糖、木三糖、木四糖、木五糖等)，在ph＝5.0-8.0时释放出4-o-甲基葡萄糖醛酸(4-o-meglca)，加入铜试剂终止反应，产生的4-o-甲基葡糖糖醛酸(4-o-meglca)与砷钼酸钠发生显色反应，产生蓝色络合物。产物的呈色深度与酶活性成正比，若不显色或者呈现浅色标记为阴性，反之标记为阳性；若呈现阳性，则可能是滴虫性阴道炎或真菌性阴道炎。反应原理本发明提供的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备浸液a包括底物、缓冲溶液和辅助试剂；将底物溶解于带缓冲溶液和辅助试剂的溶液中，得到浸液a；所述缓冲溶液可以是0.05-2mm的磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，其ph为4.0-9.0；优选缓冲溶液的最佳浓度为0.75-1.5mm、ph范围在5.0-8.0；所述底物为4-o-甲基葡萄糖基木寡糖、或者其不同糖链衍生物，或者为4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇、或者其衍生物；优选是20.0-50.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木二糖、4-o-甲基葡萄糖基木三糖、4-o-甲基葡萄糖基木四糖、4-o-甲基葡萄糖基木五糖或4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；所述辅助试剂为酸类物质是30.0-50.0mg/ml醋酸钠、硫酸钠、氯化钠或酒石酸；浸液b包括显色剂、稳定剂和分散剂；将显色剂溶于含有稳定剂和分散剂的水溶液中，制备得到浸液b；所述显色剂为盐类试剂是15.0-100.0mmol/l砷酸钠或者钼酸铵；所述稳定剂是1.00-20.00mg/ml蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或阿拉伯糖；所述分散剂是1.00-20.00mg/mlpvp-k30、pvp-k90、peg-2000、peg-4000和peg-6000中的一种或多种；体系ph值为5.0-8.0；滤纸类型：7218型滤纸、31et型滤纸、3mm型滤纸或526型滤纸。本发明的浸液配方优势分析：浸液a、b均以水为溶剂，干燥时间一致，可以减少干燥工时；浸液a中缓冲体系为反应提供一个良好的反应环境；酸类物质为反应提供一个终止条件。浸液b中分散剂pvp-k30、pvp-k90、peg-2000peg-4000、peg-6000单独或联合使用可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；稳定剂蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等可以保护样本中的酶类物质，提高检测的准确度；本发明制备的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸可以采用下述浸渍干燥方法：(i)烘箱干燥方法：取滤纸，先用浸液a浸湿均匀，在60℃-80℃高温干燥烘箱中干燥20-25min，烘干后将滤纸在用浸液b浸湿均匀，在60℃-80℃高温干燥烘箱中干燥10-15min，烘干后室温密封保存。进一步优选两次干燥的最佳温度均为65℃-75℃。(ii)浸渍干燥机自动化干燥方法：优选浸渍干燥机温度设定：浸液a：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸液b：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性及均一性。浸渍干燥机走速设定：浸液a：7.0-11.0hz浸液b：10.0-15.0hz走速的设定是根据试纸在验证过程中逐步确认，走速的快慢会影响试纸的干燥程度，对试纸的外观及准确度有一定影响。α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥流程(浸渍干燥机自动化干燥方法)具体参见图2：1.按开机流程将浸渍干燥机打开，根据实施案例所述设置烘干温度、走纸速度，待温度达到设定温度，各干燥室温度达到规定温度才能进行浸液；2.将浸液使用的滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；3.将配制好的浸液倒入浸渍槽中，浸液量应在浸渍槽的1/2处，然后将剩余的浸液倒入盛药瓶中，调节浸液注入的速度，将盛浸液罐密封；4.开启走纸开关，用压纸轮将滤纸浸入浸液中，记录浸液位置高度；5.浸液烘干过程注意观察浸液剂量，干燥室温度符合实施案例要求；6.浸液的滤纸全部从干燥室走出，关闭走纸开关，将滤纸做好标识，放入装有干燥剂的自封袋中并放入干燥器中待用。本发明制备的α-葡萄糖醛酸酶检测试纸可作为真菌性阴道炎及滴虫性阴道炎的症辅助评判指标，并结合ph值联合对阴道病类别进行准确划分，联合评判阴道炎症更具有优势，经大量临床实验证实，有形成分与干化学α-葡萄糖醛酸酶试纸之间并无完全对应关系，显微镜下无有形成分含有滴虫、孢子、菌丝等，而干化学结果为阳性，原因在于医生在采集样本的过程中操作方法，采样位置均会影响有形结果，在干化学试纸法主要检测患者阴道中微生物分泌的酶类物质，检测结果更准确，并可以实现预防的诊断意义，而目前滴虫培养一直是国内及国际公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，临床上检测滴虫及真菌多为常规镜检方法。所以有形成分与α-葡萄糖醛酸酶干化学法结果之间相互佐证，相辅相成，联合评判，对临床诊断具有重大意义。本发明依据4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇为底物，阴道微生态环境中存在α-葡萄糖醛酸酶，在此酶的水解作用下，释放出4-o-甲基葡萄糖醛酸(4-o-meglca)，产生的4-o-甲基葡糖糖醛酸(4-o-meglca)与砷钼酸钠生成蓝色物质，检测分泌物样本中α-葡萄糖醛酸酶活性，呈色深度与活性成正比。本发明中试剂配制简便，使用方便，容易操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞gmd-s600全自动妇科分泌物分析系统，在8-10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。实施例一：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；30.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；9.0mg/ml蔗糖；7.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例二：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；40.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；9.0mg/ml蔗糖；7.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例三：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；40.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；50.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；9.0mg/ml蔗糖；7.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例四：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；40.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；50.0mg/ml醋酸钠；浸液b：60.0mmol/l砷酸钠；9.0mg/ml蔗糖；7.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例五：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；30.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；7.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例六：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；30.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例七：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；30.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为7.0；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例八：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；30.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖醛酸基木糖醇；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为7.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例九：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；30.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木三糖；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例十：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；40.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木三糖；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例十一：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；50.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木三糖；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例十二：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；60.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木三糖；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例十三：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；60.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木三糖；50.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：31et型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例十四：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；50.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木三糖；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：3mm型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例十五：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.0mm磷酸氢二钠-顺丁烯二酸缓冲液；50.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木三糖；40.0mg/ml醋酸钠；浸液b：50.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml蔗糖；9.0mg/mlpvp-k30；ph值为6.5；滤纸类型：319型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸浸渍干燥机自动化干燥方法：浸渍干燥机温度设定：a液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；b液：开机后将设备温度主加热设定80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到80℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：a液：10.0hzb液：12.0hz实施例十六：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：0.75mm磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；20.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木二糖；30.0mg/ml硫酸钠；浸液b：15.0mmol/l钼酸铵；1.0mg/ml海藻糖；1.0mg/mlpeg-2000；ph值为6.0；滤纸类型：7218型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸干燥方法：取滤纸，先用浸液a浸湿均匀，在65℃高温干燥烘箱中干燥22min，烘干后将滤纸在用浸液b浸湿均匀，在65℃高温干燥烘箱中干燥12min，烘干后室温密封保存。实施例十七：α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备浸液a：1.5mm柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；50.0mg/ml4-o-甲基葡萄糖基木四糖；40.0mg/ml酒石酸；浸液b：90.0mmol/l砷酸钠；10.0mg/ml葡萄糖；9.0mg/mlpvp-k90；ph值为6.5；滤纸类型：526型滤纸α-葡萄糖醛酸酶检测试纸干燥方法：取滤纸，先用浸液a浸湿均匀，在75℃高温干燥烘箱中干燥22min，烘干后将滤纸在用浸液b浸湿均匀，在75℃高温干燥烘箱中干燥12min，烘干后室温密封保存。本发明实施例1制备的α-葡萄糖醛酸酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表1所示)表1准确度数据③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表2所示)表2检出限数据测定次数阳性低值rep1弱阳性rep2弱阳性rep3弱阳性rep4弱阳性rep5弱阳性rep6弱阳性rep7弱阳性rep8弱阳性rep9弱阳性rep10弱阳性本发明实施例3制备的α-葡萄糖醛酸酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表3所示)表3准确度数据测定次数阴性参考溶液阳性低值阳性高值rep1阴性弱阳性阳性rep2阴性弱阳性阳性rep3阴性弱阳性阳性rep4阴性弱阳性阳性rep5阴性弱阳性阳性③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表4所示)表4检出限数据测定次数阳性低值rep1弱阳性rep2弱阳性rep3弱阳性rep4弱阳性rep5弱阳性rep6弱阳性rep7弱阳性rep8弱阳性rep9弱阳性rep10弱阳性本发明实施例5制备的α-葡萄糖醛酸酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表5所示)表5准确度数据测定次数阴性参考溶液阳性低值阳性高值rep1阴性弱阳性阳性rep2阴性弱阳性阳性rep3阴性弱阳性阳性rep4阴性弱阳性阳性rep5阴性弱阳性阳性③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表6所示)表6检出限数据本发明实施例10制备的α-葡萄糖醛酸酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表7所示)表7准确度数据测定次数阴性参考溶液阳性低值阳性高值rep1阴性弱阳性阳性rep2阴性弱阳性阳性rep3阴性弱阳性阳性rep4阴性弱阳性阳性rep5阴性弱阳性阳性③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表8所示)表8检出限数据测定次数阳性低值rep1弱阳性rep2弱阳性rep3弱阳性rep4弱阳性rep5弱阳性rep6弱阳性rep7弱阳性rep8弱阳性rep9弱阳性rep10弱阳性本发明实施例15制备的α-葡萄糖醛酸酶的试纸性能评估①外观目测随机抽取制备试纸10条，以正常视力检查试纸外观性能指标，应符合要求：1)表面应平整、边缘无毛刺；2)测试块外观整齐、色泽均匀。10次目测结果均合格。②准确度检测取用制备的试纸对检测项目各浓度水平的参考溶液进行检测，每个浓度水平重复测定5次，阳性参考溶液不得出现阴性结果，阴性参考溶液不得出现阳性结果。(结果如表9所示)表9准确度数据③重复性检测随机抽取制备的试纸条10条，对第一个非阴性量级进行检测，所有检测结果不为阴性，第一个非阴性量级均应能准确检出。(结果如表10所示)表10检出限数据测定次数阳性低值rep1弱阳性rep2弱阳性rep3弱阳性rep4弱阳性rep5弱阳性rep6弱阳性rep7弱阳性rep8弱阳性rep9弱阳性rep10弱阳性由检测结果显示本发明中所述的试纸，外观表面应平整、测试块外观整齐、色泽均匀，具有可观察性；检测阳性参考溶液、阴性参考溶液结果准确无偏差；重复性检测具有均一性和一致性，所有检测指标测试结果均符合产品要求。本发明产品具有检测速度快、可目测验视、灵敏度高、稳定性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页12