本发明属于妇科疾病技术领域，具体涉及一种妇科疾病检测制剂及治疗制剂。
背景技术：
阴道分泌物检测是妇科最常见的检测项目，是诊断女性外生殖道感染最简单、最常用的检测手段。通过对女性阴道分泌物的外观、清洁度、上皮细胞、白细胞、各种细菌杂菌、真菌及寄生虫等的检测，对阴道内的微生态做出系统性评价，以了解女性的健康状况。
根据《全国临床检测操作规程》，阴道分泌物的常规检测的标准操作需进行革兰氏染色。革兰氏染色的优点是细菌及真菌易于判断，但传统的革兰氏染色存在以下问题：
1.染色时间较长，影响临床检测效率(目前国内临床阴道分泌物常规检查的样本量平均约200人份/天)；
2.不适于自动化仪器的开发，主要因传统革兰氏染色液中的第三液脱色时间较短(5-10s)；
3.第一液结晶紫染色液易出现沉淀等现象，保存时间较短；
4.单纯的碘与碘化钾混合制成的第二液无法提供一个最佳的反应环境，使细菌与结晶紫-碘复合物结合受阻，造成染色效果不稳定；
5.单纯的第四液液沙黄溶液易变质，不宜长时间保存。
通过检测判断患者感染妇科疾病后，需要对其进行治疗，使用妇科洗液是治疗和治疗妇科炎症的有效方法。目前治疗妇科炎症的洗液种类繁多，有纯中药的黄蒲洁肤菌剂杀菌的作用来自于黄柏、黄连和蒲公英等多味中草药成分；还有中药和化学成分结合的菌剂，如：洁尔阴、妇炎洁、妇科千金洗液等等，利用化学成分的杀菌作用治标，利用中药成分治本。但是无论是纯中药还是中药和化学成分结合的菌剂，都会由于滥用这些杀菌物质严重破坏阴道自洁系统，直接导致阴道菌群紊乱，使妇科病易反复发作，治疗效果不理想。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明提供了一种妇科疾病检测制剂，用于对妇科疾病进行检测，包括第一液、第二液、第三液及第四液，其中，按质量分数计，所述第一液由以下组分组成：结晶紫0.5-1.5％、草酸氨0.3-1.5％、乙醇5-20％、聚乙二醇2-5％、曲拉通和/或吐温1-5％、蒸馏水余量；所述第二液由以下组分组成：碘0.8-2.3％、碘化钾1-4％、盐酸0.1-0.5％、蒸馏水余量；所述第三液由以下组分组成：丙酮15-35％、乙醇40-70％、戊二醛5-25％；所述第四液由以下组分组成：碱性品红0.3-0.8％、苯酚0.1-0.6％、乙醇5-15％、聚乙二醇2-8％、曲拉通和/或吐温0.5-3％，蒸馏水余量。
优选地，所述第一液由以下组分组成：结晶紫0.6-1.0％、草酸氨0.6-1.0％、乙醇8-12％、聚乙二醇2-3％、曲拉通和/或吐温1-2％、蒸馏水余量；所述第二液由以下组分组成：碘1.2-1.6％、碘化钾2-3％、盐酸0.1-0.3％、蒸馏水余量；所述第三液由以下组分组成：丙酮20-30％、乙醇50-70％、戊二醛10-20％；所述第四液由以下组分组成：碱性品红0.4-0.6％、苯酚0.2-0.4％、乙醇8-12％、聚乙二醇3-5％、曲拉通和/或吐温1-2％，蒸馏水余量。
优选地，所述第一液ph值为5.5-6.0，所述第二液ph值为1.5-2.5，所述第四液ph值为5.5-6.5。。
优选地，所述第一液和第四液的聚乙二醇为聚乙二醇200、聚乙二醇400、聚乙二醇600中的一种或多种。
优选地，所述第一液和第四液的吐温为吐温20和/或吐温80。
本发明进一步提供了一种妇科疾病治疗制剂，用于对妇科疾病进行治疗，包括卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌配伍发酵得到的发酵液。
优选地，所述发酵液中卷曲乳酸杆菌的活菌数1～1.5亿cfu/ml；所述詹森乳杆菌的活菌数0.5～1亿cfu/ml。
优选地，所述卷曲乳酸杆菌和所述詹森乳杆菌按照数量比为(1～2)∶(2～1)进行混株配伍。
优选地，所述卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌配伍所形成的混株菌液的接种量为5～10％。
本发明提供的检测制剂易配置、易保存，不易出现沉淀及变质等情况，存放时间可达2年；可兼容手工染色及仪器自动染色，手工染色可在较短时间内完成；染色效果稳定，不易出现假阳性及假阴性等情况，可准确的对细菌进行鉴别。
本发明提供的治疗制剂，ph值在3～4.5之间，是病原菌最惧怕的对手，它的治疗作用是靠控制有害菌不增殖，没有抗生物质全歼灭的性质，因而不会产生具有耐性菌那样的变异株，也就不会使机体产生耐药性，因而安全无不良反应。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
实施例1：
一种妇科疾病检测制剂，由第一液、第二液、第三液及第四液液组成。
所述第一液由以下按重量百分比计的组分组成：结晶紫0.5％、草酸氨0.3％、乙醇5％、聚乙二醇2002％、曲拉通1％、蒸馏水余量；所述第二液由以下按重量百分比计的组分组成：碘0.8％、碘化钾1％、盐酸0.1％、蒸馏水余量；所述第三液由以下按重量百分比计的组分组成：丙酮15％、乙醇60％、戊二醛25％；所述第四液液由以下按重量百分比计的组分组成：碱性品红0.3％、苯酚0.1％、乙醇5％、聚乙二醇2002％、曲拉通0.5％，蒸馏水余量。
妇科疾病检测制剂的制备方法如下：
1.第一液制备过程：
s1.将草酸氨溶于蒸馏水中，得草酸铵溶液；
s2.将结晶紫溶于乙醇中，并不断加入草酸铵溶液进行搅拌，直至完全溶解；
s3.继续加入曲拉通，溶解后加入聚乙二醇200，搅拌使其完全溶解；
s4.控制ph值在5.5-6.0之间，静置2h后过滤，密封保存。
2.第二液制备过程：
s1.将碘化钾溶于蒸馏水中，搅拌使其完全溶解；
s2.将碘加入一部分碘化钾溶液中，放入超声波清洗机中超声，并不断缓慢加入剩余碘化钾溶液，边加入边搅拌，直至碘完全溶解；
s3.待完全溶解后加入盐酸，调节ph值在1.5-2.5之间；
s4.静置1h后过滤，密封遮光保存。
3.第三液制备过程：将丙酮、乙醇及戊二醛按比例混匀即可。
4.第四液液制备过程：
s1.将碱性品红溶于乙醇中，并不断加入蒸馏水进行搅拌，直至其完全溶解；
s2.将苯酚溶于少量蒸馏水中；
s3.将上述两种溶液混匀后加入曲拉通，搅拌使其完全溶解；
s4.加入聚乙二醇200，搅拌使其完全溶解；
s5.控制ph值在5.5-6.5；静置1h后过滤，密封保存。
妇科疾病检测制剂的手工染色方法包括如下步骤：
s1.阴道分泌物涂片后固定；
s2.第一液染色5-10s，水洗、干燥；
s3.第二液染色5-10s，水洗、干燥；
s4.加第三液脱色4-8s，水洗、干燥；
s5.第四液液第四液5-10s，水洗、干燥。
妇科疾病检测制剂的机器染色方法包括如下步骤：
s1.阴道分泌物涂片后固定；
s2.第一液染色20-30s，水洗、干燥；
s3.第二液染色20-30s，水洗、干燥；
s4.加第三液脱色20-25s，水洗、干燥；
s5.第四液液第四液20-30s，水洗、干燥。
实施例2：
一种妇科疾病检测制剂，由第一液、第二液、第三液及第四液液组成。
所述第一液由以下按重量百分比计的组分组成：结晶紫1.5％、草酸氨1.5％、乙醇20％、聚乙二醇4005％、吐温205％、蒸馏水余量；控制ph值在5.5-6.0之间。
所述第二液由以下按重量百分比计的组分组成：碘2.3％、碘化钾4％、盐酸0.5％、蒸馏水余量；控制ph值在1.5-2.0之间。
所述第三液由以下按重量百分比计的组分组成：丙酮35％、乙醇60％、戊二醛5％；
所述第四液液由以下按重量百分比计的组分组成：碱性品红0.8％、苯酚0.6％、乙醇15％、聚乙二醇4008％、吐温203％，蒸馏水余量；控制ph值在6.0-6.5之间。
所述的妇科疾病检测制剂的制备方法和染色方法与实施例1相同。
实施例3：
一种妇科疾病检测制剂，由第一液、第二液、第三液及第四液液组成。
所述第一液由以下按重量百分比计的组分组成：结晶紫0.6％、草酸氨0.6％、乙醇8％、聚乙二醇6002％、吐温801％、蒸馏水余量；控制ph值在5.5-6.0之间。
所述第二液由以下按重量百分比计的组分组成：碘1.2％、碘化钾2％、盐酸0.1％、蒸馏水余量；控制ph值在1.5-2.0之间。
所述第三液由以下按重量百分比计的组分组成：丙酮20％、乙醇70％、戊二醛10％；
所述第四液液由以下按重量百分比计的组分组成：碱性品红0.4％、苯酚0.2％、乙醇8％、聚乙二醇6003％、吐温801％，蒸馏水余量；控制ph值在6.0-6.5之间。
所述的妇科疾病检测制剂的制备方法和染色方法与实施例1相同。
实施例4：
一种妇科疾病检测制剂，由第一液、第二液、第三液及第四液液组成。
所述第一液由以下按重量百分比计的组分组成：结晶紫1％、草酸氨1％、乙醇12％、聚乙二醇6003％、曲拉通和吐温202％、蒸馏水余量；控制ph值在5.5-6.0之间。
所述第二液由以下按重量百分比计的组分组成：碘1.6％、碘化钾3％、盐酸0.3％、蒸馏水余量；控制ph值在1.5-2.0之间。
所述第三液由以下按重量百分比计的组分组成：丙酮30％、乙醇50％、戊二醛20％；
所述第四液液由以下按重量百分比计的组分组成：碱性品红0.6％、苯酚0.4％、乙醇12％、聚乙二醇6005％、曲拉通和吐温202％，蒸馏水余量；控制ph值在6.0-6.5之间。
所述的妇科疾病检测制剂的制备方法和染色方法与实施例1相同。
实施例5：
一种妇科疾病检测制剂，由第一液、第二液、第三液及第四液液组成。
所述第一液由以下按重量百分比计的组分组成：结晶紫0.8％、草酸氨0.8％、乙醇10％、聚乙二醇6002.5％、曲拉通和吐温801.5％、蒸馏水余量；控制ph值在5.5-6.0之间。
所述第二液由以下按重量百分比计的组分组成：碘1.4％、碘化钾2.5％、盐酸0.2％、蒸馏水余量；控制ph值在1.5-2.0之间。
所述第三液由以下按重量百分比计的组分组成：丙酮35％、乙醇40％、戊二醛25％；
所述第四液液由以下按重量百分比计的组分组成：碱性品红0.5％、苯酚0.3％、乙醇10％、聚乙二醇6004％、曲拉通和吐温801.5％，蒸馏水余量；控制ph值在6.0-6.5之间。
所述的妇科疾病检测制剂的制备方法和染色方法与实施例1相同。
对比例1
市场常见的传统配方的革兰氏染色液，成分为：
第一液：结晶紫2％、草酸铵1％、乙醇20％，其余为蒸馏水；
第二液：碘0.33％、碘化钾0.66％，其余为蒸馏水；
第三液：95％乙醇；
第四液液：沙黄0.25％、乙醇10％，其余为蒸馏水。
对比例2
市场常见的传统配方的革兰氏染色液，成分为：
第一液：结晶紫2％、草酸铵1％、乙醇20％，其余为蒸馏水；
第二液：碘0.3％、碘化钾0.15％、氯化钠0.27％，其余为蒸馏水
第三液：丙酮50％、乙醇50％；
第四液液：品红0.5％、乙醇10％，其余为蒸馏水。
效果实施例染色效果验证
(一)阴道分泌物脱落细胞染色
1.样本的采集：通过阴道窥镜，用无菌棉试子自阴道后穹窿或阴道内壁处旋转采集阴道分泌物，装入无菌塑料管中送检。
2.样本悬液的制备：
(1)将阴道分泌物充分洗脱至装有300ul生理盐水的试剂瓶，制备成样本悬浊液；
(2)取10ul样本悬浊液进行涂片，干燥后，火焰固定；
(3)染色：实施例1-5和对比例1分别按照实施例1的手工染色和机器染色方法进行染色；对比例2按照其使用说明书操作。
3.实验结果：
表1：手工染色方法结果(“+”越多表示效果更优)
表2：机器染色方法结果(“+”越多表示效果更优)
4.结果讨论：
本发明一种妇科疾病检测制剂在手工和机器染色的两个实验条件下，对于阴道脱落上皮细胞、白细胞、乳杆菌、白色念珠菌及加德纳菌等的染色效果，均明显优于对比例1和2。
(二)标准菌株染色
第1部分：菌悬液的制备
1.将金黄色葡萄球菌及大肠杆菌标准菌株(购自广东环凯微生物有限公司)制备成菌悬液，使用生理盐水4000r/min离心10min，此步骤重复3次；
2.使用生理盐水将标准菌株的浓度制备为约1.5×108个/ml。
第2部分：标准菌株的染色
1.将上述菌悬液4000r/min离心10min，弃上清液，留沉淀，并放入振荡器中震荡混匀；
2.加入100ul第一液，混匀后，静置5～10s；
3.加入1ml生理盐水混匀，以终止反应；
4.放入离心机中4000r/min离心10min，弃上清液，留沉淀，并放入振荡器中震荡混匀；
5.加入100ul第二液，混匀后，静置5～10s；
6.加入1ml生理盐水混匀，以终止反应；
7.放入离心机中4000r/min离心10min，弃上清液，留沉淀，并放入振荡器中震荡混匀；
8.加入100ul第三液，混匀后，静置5～10s；
9.加入1ml生理盐水混匀，以终止反应；
10.放入离心机中4000r/min离心10min，弃上清液，留沉淀，并放入振荡器中震荡混匀；
11.加入100ul第四液液，混匀后，静置5～10s；
12.加入1ml生理盐水混匀，以终止反应；
13.放入离心机中4000r/min离心10min，弃上清液，留沉淀；
14.加入1ml生理盐水后放入振荡器中震荡混匀；
注：对比例2的时间按照其说明书规定的染色时间进行操作。
第3部分：染色效果的观察及计数
1.用绸布拭净改良牛鲍计数板和盖玻片；
2.取小试管1支，加入生理盐水1ml；
3.用清洁干燥的微量吸管采集染色之后的标准菌菌悬液10ul，擦去管外多余液体，轻轻加至生理盐水底部，再轻吸上清液清洗吸管2-3次，立即混匀；
4.混匀后用微量吸管将标准菌悬液充入计数池；
5.室温下平放3～5min，待下沉后于显微镜下观察与计数；
6.先用低倍镜观察细菌分布是否均匀，如严重分布不均，应重新充池，然后使用油镜计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的细菌数量；
(n：5个中方格内的细菌数量)
注：
1.计数原则：
计数时遵循一定方向逐格进行，以免重复或遗漏，对压线细菌采用数左不数右、数上不数下的原则。
2.程度分级：
+：表示细菌未被染上色
++：表示细菌被染上颜色，染颜色不够深或有部分未染上
+++：表示细菌被染上颜色，染色深且着色均匀
实验结果：
表3：标准菌株染色结果(“+”越多表示效果更优)
结果显示：
本发明提供的一种妇科疾病检测制剂与传统革兰氏染色液和成分含量不在本发明范围内的染色液相比，本发明妇科疾病检测制剂对细菌的染色更具有亲和力。
(三)染色稳定性对比
将实施例1制备的妇科疾病检测制剂与对比例1和对比例2的染色液均放至有效期后进行以下实验，实验步骤如下：
1.观察染色液是否有沉淀；
2.根据(一)所述的步骤对阴道脱落细胞进行染色；
3.根据(二)所述的步骤对标准菌株进行染色。
实验结果：
表4：染色稳定性结果(“+”越多表示效果更优)
结果显示：与对比例1、2相比，本发明具有如下优点：
1.本发明所提供的一种妇科疾病检测制剂稳定性好，不易出现沉淀等现象；
2.本发明对于上皮细胞及白细胞的染色效果更好，细胞核着色深，核仁清晰；
3.本发明对于细菌的染色更具有亲和力，细菌着色更加均匀，染色更深，乳杆菌及白色念珠菌被染为深紫色且着色均匀清晰，加德纳菌等被染为红色，着色均匀且清晰，与紫色的细胞核形成鲜明对比。
(四)染液的染色效果
1.第一液及第四液的染色效果
以金黄色葡萄球菌标准菌株(革兰氏阳性菌)为例，按照上述所提供的第一液和复染液的染色步骤进行操作，观察在不同染色时间下的染色效果，其中对照组为市面常见的革兰氏染色液中的第一液结晶紫溶液和第四液液沙黄溶液。
实验结果：
表5：第一液及第四液液的染色效果
“-”表示金黄色葡萄球菌呈红色
“±”表示金黄色葡萄球菌呈紫色，但着色较浅
“+”表示金黄色葡萄球菌呈紫色，且着色较深
结果显示：本发明所提供的一种妇科疾病检测制剂中的第一液和第四液液同传统的革兰氏染色液中的第一液和第四液液相比，染色时间缩短，大大提高了工作效率。
2.第二液的染色效果
以大肠杆菌标准菌株(革兰氏阴性菌)为例，按照上述所提供的第二液染色步骤进行染色，同时不断增加染色时间，观察染色效果，其中对照组为本发明所提供的第二液，但未添加氢离子调节ph值。
实验结果：
表6：第二液的染色效果
“-”表示紫色被脱掉，大肠杆菌被第四液液染为红色
“±”表示紫色未被第三液脱掉，部分大肠杆菌仍呈紫色
结果显示：本发明所提供的第二液可使细菌更好的着色，同时脱色时可使革兰氏阴性菌细胞壁外膜的脂类迅速溶解，不易出现假阳性的现象。
第二液中加入盐酸，氢离子可加强细菌与结晶紫-碘复合物的结合，提高染色效果，使着色更深、更浓、更清晰、更牢固，当遇第三液处理时，革兰氏阳性菌因失水使细胞壁肽聚糖网孔缩小，因此可将结晶紫-碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；同时氢离子可使革兰氏阴性菌细胞壁外膜的脂类迅速溶解，促进第三液对革兰氏阴性菌的脱色作用。如果第二液中不加入氢离子来调节ph，则在后续的脱色过程中很容易造成紫色脱不掉，而出现假阳性的现象。
(五)第三液的脱色效果
以金黄色葡萄球菌标准菌株(革兰氏阳性菌)为例，使用阴道分泌物染色机按照上述(二)标准菌株染色所提供的染色步骤进行染色，观察最后菌株的染色效果，其中对照组与实施例1相比仅为第三液中未加入戊二醛。
实验结果：
表7：第三液的脱色效果
“+”表示金黄色葡萄球菌呈紫色
“-”表示脱色过度，金黄色葡萄球菌被第四液液染为红色
结果显示：本发明在第三液中加入戊二醛，可使脱色时间控制在一个较长的范围内，避免因脱色时间长而导致出现假阴性的现象。
本发明还提供了一种妇科疾病治疗制剂，包括卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌配伍发酵得到的发酵液，用先进的生物工程技术和医学微生态学相结合，卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌作为有益微生物，科学组合，混株配伍，利用这些微生物之间的共生关系，形成一个复杂而稳定的微生态系统，在抑制其它各种致病菌的同时，保留妇女阴道中的有益菌，使阴道内微生态到达平衡ph值4～4.5之间，增强机体免疫力和阴道自洁功能，达到自然恢复的功效。
本发明中，所述发酵液中卷曲乳酸杆菌的活菌数1～1.5亿cfu/ml；所述詹森乳杆菌的活菌数0.5～1亿cfu/ml。
本发明中，所述治疗制剂还优选包括医学上接受的辅料。在本发明中，所述的辅料优选包括多孔淀粉。所述多孔淀粉与发酵液的质量体积比优选为1.5～2.5∶3(mg∶ml)，更优选为2∶3(mg∶l)。
本发明还提供了所述的治疗制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌混株配伍后接种至富集培养基上富集培养，得到富集培养液；
2)将所述步骤1)得到的富集培养液接种至扩大培养基上扩大培养，得到扩大培养液；
3)将所述步骤2)得到的扩大培养液接种到发酵培养基上发酵培养，得到的发酵液为治疗制剂。
本发明提供的所述的治疗制剂的制备方法，方法简单，重复性好，成本低廉。
本发明将卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌混株配伍后接种至富集培养基上富集培养，得到富集培养液。
本发明中，所述卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌的种类没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的制备阴道菌剂的卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌的种类即可。
本发明中，所述卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌的来源是健康女性的阴道分泌物中筛选获得。所述筛选的方法包括根据细菌学分离方法分离出乳杆菌，再通过生长温度试验(15℃～45℃)、运动性试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、吲哚(靛基质)试验、硫化氢试验将疑似株菌鉴定为乳杆菌属；再采用碳水化合物发酵产酸试验对乳杆菌进行种的鉴定，进一步筛选出产生过氧化氢的优势菌株，并运用16srrna序列分析方法进行基因型鉴定。本发明中，所述16srrna序列分析方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的16srrna序列分析方法。所述16srrna序列分析方法中使用的引物序列优选为本领域技术人员所熟知的细菌分子鉴定使用的16srrna引物正向序列5′-agagtttgatcatggctcag-3′，16srrna引物反向序列5′-tagggttaccttgttacgactt-3′。
本发明中，所述卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌优选按照数量比为(1～2)∶(2～1)进行混株配伍，更优选为1∶1。
所述卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌的混株优选按照接种量为5～10％进行接种，更优选为8％。
本发明中，所述富集培养基优选包括以下组分：mgso4·7h2o1.0～1.5g，kh2po40.5～1.0g，k2hpo43.0～6g，nacl1.0～2g，cacl215～25mg，feso43～8mg，mncl2·4h2o3～8mg，cucl20.3～0.6mg，微量元素液5～8ml，浓度为15mg/l的mc-rr(藻毒素rr)和13mg/l的mc-lr(藻毒素lr)的mcs粗提液200～300ml，蒸馏水补充余量；所述富集培养基ph值≤4.5；更优选为mgso4·7h2o1.2g，kh2po40.8g，k2hpo44g，nacl1.5g，cacl220mg，feso45mg，mncl2·4h2o5mg，cucl20.5mg。微量元素液6ml，浓度为15mg/l的mc-rr和13mg/l的mc-lr的mcs粗提液200～300ml，蒸馏水补充至1000ml。所述富集培养基的ph值更优选为4.0～4.4。所述富集培养基的ph值调整的方法采用体积浓度0.1％的hcl溶液和质量浓度为0.1％的naoh溶液进行调整。
本发明中，所述微量元素液优选包括以下质量含量的组分：znso40.29g/l、cacl20.24g/l、cuso40.25g/l、mgso40.17g/l和feso40.28g/l，所述微量元素液中的溶剂为蒸馏水。
本发明对所述富集培养基的配制方法没有特殊限制采用本领域技术人员所熟知的培养基配制方法即可。
本发明中，所述mcs粗提液的制备方法优选包括以下步骤：
冻干小球藻粉用体积浓度为5％～10％的乙酸提取3～4次，得到的悬浊液离心取上清液，并通过预处理的活性炭吸附柱吸附，随后清洗活性炭吸附柱，用体积浓度为15％～20％甲醇洗一次，再用体积浓度为100％甲醇洗脱毒素；将体积浓度为100％甲醇洗脱液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的干粉为粗微囊藻毒素。所述的预处理方法优选用体积浓度100％甲醇冲洗，后用去离子水冲洗。
本发明中，所述富集培养的时间优选为1～2天，更优选为1.5天。所述富集培养的温度优选为28～30℃，更优选为29℃。所述富集培养优选在转速为100rpm～140rpm的条件下进行，更优选为120rpm。
得到富集培养液后，本发明将所述富集培养液接种至扩大培养基上扩大培养，得到扩大培养液；
本发明中，所述扩大培养基优选包括以下质量含量的组分：蛋白胨8～15g/l，酵母膏4～10g/l，nacl3～8g/l；所述扩大培养基中的溶剂为蒸馏水；更优选为蛋白胨10g/l，酵母膏46g/l，nacl5g/l；所述扩大培养基ph≤4.5，更优选为4.0～4.4。所述ph值的调节方法优选采用体积浓度为0.1％的hcl溶液和质量浓度为0.1％的naoh溶液调节。
本发明中，所述扩大培养的时间为3～5天，更优选为4天。所述扩大培养的温度为28～30℃，更优选为29℃。所述扩大培养优选在震荡培养条件下进行，所述震荡培养的转速为100rpm～140rpm；更优选为120rpm。所述扩大培养的接种量为5％～10％，更优选为8％。
得到扩大培养液后，本发明将所述扩大培养液接种到发酵培养基上发酵培养，得到的发酵液为治疗制剂。
本发明中，所述发酵培养基包括下列重量份的组分：2～3份的em有益微生物菌群、2～3份的红糖、0.2～0.3份的l-抗坏血酸、0.05～0.2份的磷酸二氢钾、0.2～0.5份的蚯蚓抗菌肽溶液、0.3～0.8份的蜂蜜和48～52份的水，更优选为2.5份的em有益微生物菌群、2.5份的红糖、0.25份的l-抗坏血酸、0.1份的磷酸二氢钾、0.3份的蚯蚓抗菌肽溶液、0.5份的蜂蜜和50份的水。本发明对所述水的种类没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的培养基用水即可，具体的，所述水为凉开水。
在本发明中，所述发酵培养的接种量优选为1％～3％，更优选为2％；所述发酵培养优选在常温环境下进行；所述发酵培养的时间为12～15天，更优选为13～14天。
本发明中，所述em有益微生物菌群的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的em有益微生物菌群的来源即可。
本发明中，所述蚯蚓抗菌肽溶液的制备方法优选包括以下步骤：
a将活蚯蚓与红糖按照质量为(4～6)∶(2～3.5)的比例混合，蚯蚓溶解后得到蚯蚓液；
b将所述步骤a得到的蚯蚓液分离，收集上清液；
c将所述步骤b得到的上清液进行沸水浴5～10min，分离，收集取上清液；
d将所述步骤c得到的上清液过滤收集滤液，得到蚯蚓抗菌肽溶液。
本发明将活蚯蚓与红糖按照质量为(4～6)∶(2～3.5)的比例混合，蚯蚓溶解后得到蚯蚓液；更优选为5∶3的比例混合。
本发明中，所述混合没有特殊限制采用本领域技术人员所熟知的混合的技术方案即可。
本发明中，所述活蚯蚓优选在与红糖混合之前进行清洗干净。本发明中，所述活蚯蚓和红糖的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的活蚯蚓和红糖的来源即可。本发明中，所活蚯蚓在红糖的作用下会发生溶解，得到蚯蚓液。
得到蚯蚓液后，本发明将所述蚯蚓液分离，收集上清液。
本发明中，所述分离的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所述之的分离的技术方案即可。本发明实施例中，所述分离的方案为离心。所述离心的转速优选为100rpm～140rpm；更优选为120rpm。所述离心的时间优选为5～8min；更优选为6～7min。所述离心的温度优选为18℃-35℃；更优选为30℃。
得到上清液后，本发明将所述上清液进行沸水浴5～10min，分离，收集取上清液。
本发明中，上清液进行沸水浴的时间5～10min，更优选为8min。所述上清液进行沸水浴之前优选用乙酸缓冲液稀释。所述乙酸缓冲液的浓度优选为30％～40％；更优选为36％。所述稀释的倍数优选为80～120倍，更优选为100倍。
本发明中，所述沸水浴优选在搅拌的条件下进行。本发明对所述搅拌的速度没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的沸水浴搅拌速度即可。
得到上清液后，本发明将所述上清液过滤收集滤液，得到蚯蚓抗菌肽溶液。
本发明中，所述过滤优选采用能通过分子量10000da规格的超滤系统进行。
本发明中，所述发酵培养的过程具体优选包括以下步骤：
i、将红糖、磷酸二氢钾与凉开水混合，充分搅拌至全部溶解；
ii、加入em有益微生物菌群、所述扩大培养液和蚯蚓抗菌肽溶液，搅拌，在半密封状态下，在25～35℃、光照强度在100～550lex的环境下发酵，每三天搅拌一次，每次搅拌1～2min；
iii、发酵进行到第3天时，水面会出现泡沫，加入蜂蜜以加快发酵速度，促进有益微生物的生成；第8天时，泡沫慢慢消失，水面浮起一片白色的悬浮物，加入l-抗坏血酸，以增强抗氧化能力，到第13天时，悬浮物形成沉淀物，ph值在4.5以下，固液分离，得到的发酵上清液为治疗制剂。
本发明中，所述半密封状态下优选发酵容器盖上盖的状态。
本发明中，所述发酵液优选采用多孔淀粉吸附，得到多孔淀粉吸附的复合菌剂，喷雾干燥后的产品分装成胶囊，制备得到微生态阴道菌胶囊剂。所述喷雾干燥的进风温度优选为150～180℃；更优选为170℃。所述喷雾干燥的出风温度优选为60～70℃；更优选为65℃。
本发明中，所述多孔淀粉与发酵上清液的质量体积比优选为1.5～2.5∶3(mg∶ml)，更优选为2∶3(mg∶l)。所述多孔淀粉的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的多孔淀粉即可。
本发明中，所述治疗制剂在使用的过程中，优选连续用药5d～6d，每天1次，每次1粒胶囊。所述胶囊中盛装所述治疗制剂的活菌数优选为8～15亿cfu/g。
下面结合实施例对本发明提供的一种妇科疾病治疗制剂进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将活用水洗净蚯蚓，以蚯蚓跟红糖5∶3的比例，加入红糖(又名甘蔗糖)，等蚯蚓溶解后，将蚯蚓液离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，入沸水浴，边加热边搅动5min，然后离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，用能通过分子量10000da规格的超滤系统过滤或高速离心机分离得到蚯蚓抗菌肽溶液。
实施例2
将活用水洗净蚯蚓，以蚯蚓跟红糖4∶3.5的比例，加入红糖(又名甘蔗糖)，等蚯蚓溶解后，将蚯蚓液离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，入沸水浴，边加热边搅动8min，然后离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，用能通过分子量10000da规格的超滤系统过滤或高速离心机分离得到蚯蚓抗菌肽溶液。
实施例3
将活用水洗净蚯蚓，以蚯蚓跟红糖6∶2的比例，加入红糖(又名甘蔗糖)，等蚯蚓溶解后，将蚯蚓液离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，入沸水浴，边加热边搅动10min，然后离心分离，取上清液，用乙酸缓冲液稀释后，用能通过分子量10000da规格的超滤系统过滤或高速离心机分离得到蚯蚓抗菌肽溶液。
实施例4
筛选出健康妇女阴道中卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌有益菌，混株配伍，按照5％的接种量接种至富集培养基中，以120转/min，30℃下震荡培养1天，得到有益菌培养液，富集培养基培养基的组成为mgso4·7h2o1.0g，kh2po41.0g，k2hpo43.0g，nacl2g，cacl215mg，feso48mg，mncl2·4h2o3mg，cucl20.6mg，微量元素液5ml，浓度为15mg/l的mc-rr和13mg/l的mc-lr的mcs粗提液200ml，蒸馏水补充至1000ml，调节ph为4.5，其中微量元素液为1l蒸馏水中含有znso40.29g，cacl20.24g，cuso40.25g，mgso40.17g和feso40.28g。将培养液按5％的接种量接种到扩大培养基上，以120rpm，30℃下继续培养5天，得到发酵液，筛选优良菌种，所述扩大培养基的组成为蛋白胨8g，酵母膏10g，nacl3g，蒸馏水补充至1000ml，调节ph为4.5。将得到的扩大培养液菌种按照接种量为1％的量接入含2kgem菌种红糖，0.05kg磷酸二氢钾和实施例1制备得到的0.2份的的蚯蚓抗菌肽的溶液的50kg的水溶液，搅拌，在半密封状态下，室温在35℃、光照强度在100lex的环境下发酵，每三天搅拌一次，每次搅拌2min；发酵进行到第3天时，水面会出现泡沫，需加入0.3kg蜂蜜以加快发酵速度，促进有益微生物的生成；第8天时，泡沫慢慢消失，水面浮起一片白色的悬浮物，需加入0.2kgl-抗坏血酸，以增强抗氧化能力，到第i3天时，悬浮物形成沉淀物，ph值在4.5，固液分离，收集发酵上清液，按照多孔淀粉与发酵上清液的质量体积比1.5∶3(mg∶ml)的比例添加多孔淀粉后进行喷雾干燥，得到治疗制剂干粉。将干粉分装至胶囊中，保证每胶囊中盛装的微生态阴道菌剂的活菌数为8亿cfu/g，即得到治疗制剂产品。
实施例5
筛选出健康妇女阴道中卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌有益菌，混株配伍，按照10％的接种量接种至富集培养基中，以100转/min，28℃下震荡培养3天，得到有益菌培养液，富集培养基培养基的组成为mgso4·7h2o1.5g，kh2po40.5g，k2hpo46g，nacl1.0g，cacl225mg，feso43mg，mncl2·4h2o3mg，cucl20.3mg，微量元素液8ml，浓度为15mg/l的mc-rr和13mg/l的mc-lr的mcs粗提液200～300ml，蒸馏水800～1000ml，调节ph为4，其中微量元素液为1l蒸馏水中含有znso40.29g，cacl20.24g，cuso40.25g，mgso40.17g和feso40.28g。将培养液按8％的接种量接种到扩大培养基上，以140rpm，30℃下继续培养3天，得到发酵液，筛选优良菌种，所述扩大培养基的组成为蛋白胨15g，酵母膏4g，nacl8g，蒸馏水补充1l，调节ph为4。将得到的扩大培养液菌种按照接种量为1％的量接入含3kgem菌种红糖，0.2kg磷酸二氢钾和实施例2制备得到的0.5份的蚯蚓抗菌肽的溶液的52kg的水溶液，搅拌，在半密封状态下，室温在25℃、光照强度在550lex的环境下发酵，每三天搅拌一次，每次搅拌1min；发酵进行到第3天时，水面会出现泡沫，需加入0.8kg蜂蜜以加快发酵速度，促进有益微生物的生成；第8天时，泡沫慢慢消失，水面浮起一片白色的悬浮物，需加入0.3kgl-抗坏血酸，以增强抗氧化能力，到第i3天时，悬浮物形成沉淀物，ph值在4.2，固液分离，发酵上清液，按照多孔淀粉与发酵上清液的质量体积比2.5∶3(mg∶ml)的比例多孔淀粉后喷雾干燥，得到治疗制剂干粉。将干粉分装至胶囊中，保证每胶囊中盛装的治疗制剂的活菌数为15亿cfu/g，即得到治疗制剂产品。
实施例6
筛选出健康妇女阴道中卷曲乳酸杆菌和詹森乳杆菌有益菌，混株配伍，按照8％的接种量接种至富集培养基中，以140转/min，29℃下震荡培养2天，得到有益菌培养液，富集培养基培养基的组成为mgso4·7h2o1.2g，kh2po40.8g，k2hpo44g，nacl1.5g，cacl220mg，feso45mg，mncl2·4h2o5mg，cucl20.5mg，微量元素液6ml，浓度为15mg/l的mc-rr和13mg/l的mc-lr的mcs粗提液200～300ml，蒸馏水补充至1000ml，调节ph为4.2，其中微量元素液为1l蒸馏水中含有znso40.29g，cacl20.24g，cuso40.25g，mgso40.17g和feso40.28g。将培养液按10％的接种量接种到扩大培养基上，以100rpm，30℃下继续培养4天，得到发酵液，筛选优良菌种，所述扩大培养基的组成为蛋白胨10g，酵母膏46g，nacl5g，蒸馏水补充1l，调节ph为4.2。将得到的扩大培养液菌种按照接种量为1％的量接入含2.5kgem菌种红糖，0.1kg磷酸二氢钾和实施例3制备得到的0.3份的蚯蚓抗菌肽的溶液的48kg的水溶液，搅拌，在半密封状态下，室温在30℃、光照强度在300lex的环境下发酵，每三天搅拌一次，每次搅拌1.5min；发酵进行到第3天时，水面会出现泡沫，需加入0.5kg蜂蜜以加快发酵速度，促进有益微生物的生成；第8天时，泡沫慢慢消失，水面浮起一片白色的悬浮物，需加入0.25kgl-抗坏血酸，以增强抗氧化能力，到第i3天时，悬浮物形成沉淀物，ph值在4.0，固液分离，发酵上清液，按照多孔淀粉与发酵上清液的质量体积比2∶3(mg∶ml)的比例多孔淀粉后喷雾干燥，得到治疗制剂干粉。将干粉分装至胶囊中，保证每胶囊中盛装的治疗制剂的活菌数为10亿cfu/g，即得到治疗制剂产品。
实施例7～10
将门诊200例复发性阴道炎患者按照优势菌及菌群密集度、多样性的不同、特殊菌群的检出、机体炎性反应及临床表现分为4组，每组50例。
a组：阴道炎治疗后仍有症状，阴道微生态表现无优势菌、密集度+、多样性+，给予重点恢复阴道酸性环境、补充乳酸杆菌，阴道用微生物复合菌剂5d，每晚1次。
c组：滴虫感染，镜下见滴虫，给予口服硝唑类治疗1周后，用微生物复合菌剂5d，每晚1次。
d组：假丝酵母菌性阴道炎复发，镜下看见菌丝或孢子，菌群失调，临床有外阴瘙痒症状，白带典型或不典型，口服氟康唑150mg(第1日)同时阴道用达克宁400mg，每晚1次，连用3d，停药后阴道用微生物复合菌剂5d，每晚1次。
评定疗效。结果：a、b、c、d4组治愈率分别为98％，96％，96％，88％，有效率分别为100％，98％，98％，92％，3个月内复发率分别为0％，2％，2％，6％，不良反应发生率低。微生物复合菌剂治疗各种复发性阴道炎均有效。
实施例11～14
根据分泌物颜色、气味、ph值及阴道微生态诊断、线索细胞、特殊病原体分为4组。
a组：有临床症状，微生态检查所有细菌均少，表现为没有优势菌，密集度+、多样性+，治疗重点是恢复阴道酸性环境，3％硼酸坐浴，每日2次，乳酸杆菌活菌胶囊1枚置阴道深处，每晚1次，共5d。
c组：典型的黄绿色泡沫样白带，瘙痒、灼热、疼痛，分泌物悬滴法可见滴虫，治疗采用甲硝唑或替硝唑2g单次口服，局部用3％硼酸溶液冲洗，性伴同治，1周后乳杆菌活菌胶囊1枚置阴道深处，每晚1次，共5d。
d组：临床症状及体征典型或不典型，可见孢子或菌丝，口服氟康唑150mg(第1天)同时阴道用达克宁400mg，每晚1次，连用3d，停药后用乳酸杆菌活菌胶囊5d，每晚1次。
评定疗效。结果：a、b、c、d4组治愈率分别为97％，95％，98％，90％，有效率分别为100％，98％，98％，92％，3个月内复发率分别为1％，1％，0％，3％，不良反应发生率低。微生物复合菌剂治疗各种复发性阴道炎均有效。
本发明提供的检测制剂易配置、易保存，不易出现沉淀及变质等情况，存放时间可达2年；可兼容手工染色及仪器自动染色，手工染色可在较短时间内完成；染色效果稳定，不易出现假阳性及假阴性等情况，可准确的对细菌进行鉴别。
本发明提供的治疗制剂，ph值在3～4.5之间，是病原菌最惧怕的对手，它的治疗作用是靠控制有害菌不增殖，没有抗生物质全歼灭的性质，因而不会产生具有耐性菌那样的变异株，也就不会使机体产生耐药性，因而安全无不良反应。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。