一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法与流程

本发明属于医药领域，具体涉及一种分离洋艾内酯a、b的hplc方法。

背景技术：

洋艾内酯a和洋艾内酯b是一对同分异构体，其区别仅在一个连接-oh和-ch3的碳原子的手性不同，洋艾内酯a、b的化学结构式如下：

由于洋艾内酯a和洋艾内酯b的化学结构极其相似，普通的hplc方法较难将二者分开，因而无法用于检测洋艾内酯a中是否混有洋艾内酯b或洋艾内酯b中是否混有洋艾内酯a。

为了高效分离洋艾内酯a和洋艾内酯b，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明是为了克服现有技术中存在的不足，提供一种分离洋艾内酯a、b的hplc方法。

本发明技术方案如下：

一种分离洋艾内酯a和洋艾内酯b的hplc方法，包括如下色谱参数：

色谱柱：waterssunfirec18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；

流动相：a相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mm手性添加剂；b相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mm手性添加剂；洗脱程序：0～5min，0％b；5～20min，0％～80％b；20～25min，80％～0％b；

流速：1.0ml/min；

柱温：35℃。

进一步地，所述手性添加剂为d-脯氨酰胺。

进一步地，检测波长为234nm。

进一步地，进样量为10μl。

有益技术效果：

本发明通过在流动相中添加手性添加剂d-脯氨酰胺，可以有效分离洋艾内酯a和洋艾内酯b，基于该流动相的hplc方法无需借助手性色谱柱即可实现手性化合物洋艾内酯a和洋艾内酯b的高效分离。因此本发明提供的hplc方法可以用于检测洋艾内酯a中是否混有洋艾内酯b或洋艾内酯b中是否混有洋艾内酯a。

附图说明

图1为洋艾内酯a和洋艾内酯b的hplc分离色谱图(手性流动相)，其中：a为洋艾内酯a对照品溶液，b为洋艾内酯b对照品溶液，c为混合对照品溶液；

图2为洋艾内酯a和洋艾内酯b的hplc分离色谱图(普通流动相)，其中：a为洋艾内酯a对照品溶液，b为洋艾内酯b对照品溶液，c为混合对照品溶液。

具体实施方式

下面通过具体的实施例详细介绍本发明实质性内容，但不能以此限定本发明的保护范围。

一、试验材料

洋艾内酯a和洋艾内酯b纯度≥98％，手性试剂d-脯氨酰胺纯度≥99％。

甲醇为色谱纯，水为制水机生产的色谱用水。

waterssunfirec18液相色谱柱购自waters，规格为4.6mm×250mm、5μm。

高效液相色谱仪为日本岛津公司hplc色谱仪。

二、试验方法

1、溶液配制：

混合对照品溶液：分别精密称取洋艾内酯a、洋艾内酯b，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯a、洋艾内酯b浓度分别为0.5mg/ml的溶液，临用现配。

洋艾内酯a对照品溶液：精密称取洋艾内酯a，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯a浓度为0.1mg/ml的溶液，临用现配。

洋艾内酯b对照品溶液：精密称取洋艾内酯b，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯b浓度为0.1mg/ml的溶液，临用现配。

流动相a相：精密称取d-脯氨酰胺，用体积比1:9的甲醇-水溶解，配制成含有10mmd-脯氨酰胺的溶液，超声脱气，临用现配。

流动相b相：精密称取d-脯氨酰胺，用体积比9:1的甲醇-水溶解，配制成含有10mmd-脯氨酰胺的溶液，超声脱气，临用现配。

2、色谱参数

色谱柱：waterssunfirec18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；

流动相：a相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mmd-脯氨酰胺；b相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mmd-脯氨酰胺；洗脱程序：0～5min，0％b；5～20min，0％～80％b；20～25min，80％～0％b；

流速：1.0ml/min；

柱温：35℃；

检测波长：234nm。

3、注入分析

分析前，流动相a相和流动相b相分别使用装有0.45μm混合膜的抽滤漏斗抽滤，混合对照品溶液、洋艾内酯a对照品溶液、洋艾内酯b对照品溶液分别使用装有0.45μm滤头的过滤器过滤。分别精密量取10μl混合对照品溶液、洋艾内酯a对照品溶液、洋艾内酯b对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

三、试验结果

图1为上述方法分析、记录的色谱图，从该色谱图可以看出，洋艾内酯a和洋艾内酯b实现了有效分离，基线分离程度高，并且洋艾内酯b出峰时间早于洋艾内酯a。

为了突出手性添加剂的作用，研究过程中还用对比方法对洋艾内酯a和洋艾内酯b进行分离，在该对比方法中，除了流动相不添加d-脯氨酰胺，其余色谱仪器、参数和操作方法完全一致，分离效果如图2所示，洋艾内酯a和洋艾内酯b共洗脱，无法有效分离。

以上实施例说明，本发明通过在流动相中添加手性添加剂d-脯氨酰胺，可以有效分离洋艾内酯a和洋艾内酯b，基于该流动相的hplc方法无需借助手性色谱柱即可实现手性化合物洋艾内酯a和洋艾内酯b的高效分离。因此本发明提供的hplc方法可以用于检测洋艾内酯a中是否混有洋艾内酯b或洋艾内酯b中是否混有洋艾内酯a。