本发明涉及铁观音茶叶年份鉴别，特别涉及一种不同年份铁观音茶叶的鉴别方法。
背景技术：
陈香型铁观音陈茶口感醇厚柔软、甘甜爽滑，其价值正慢慢被挖掘展现，并被人们应用推广。在福建、台湾等地，早就有贮存和饮用陈年老茶的传统。陈香型铁观音由普通茶叶放置密闭容器保存五年以上，茶叶内的物质缓慢发酵和氧化形成一种独特的陈香味。陈香型茶叶茶水平和，不清不涩，气味古朴，茶叶年代越久越明显，具有降火气的功效（效果显著），具有一定的收藏价值。
陈香型铁观音茶叶具有降尿酸和调理肠胃等功效，但其功能性成分变化规律尚不明确。同事陈香型铁观音在不同贮存条件和不同储存时间下，其内在内含物的变化及安全性评价尚不清晰。不同年份的铁观音的鉴别，目前尚无成熟的方法，本方法通过检测不同年份铁观音茶中氨基酸的含量，利用数据处理软件进行成分分析。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一种不同年份铁观音茶叶的鉴别方法。
为解决现有技术的上述缺陷，本发明提供的技术方案是：一种不同年份铁观音茶叶的鉴别方法，包括以下步骤：
（1）混合氨基酸标准储备液的配制：分别准确称取单个氨基酸标准品（精确至0.00001g）于同一100ml容量瓶，用0.1mol/l的盐酸溶液溶解，并定容至刻度，混匀，得到2.5μmol/ml混合氨基酸标准储备液；
（2）混合氨基酸标准工作液的配制：准确移取混合氨基酸标准储备液0.2ml于5ml容量瓶中，用0.1mol/l的盐酸溶液定容至刻度，混匀，为100nmol/ml的标准上机液；
（3）样品制备：
a、称取样品1.000g（精确到0.01g）置于水解管中，加入10ml6mol/l的盐酸溶液，加3-4滴苯酚，氮气吹扫2-3min，在充氮气状态下封口；
b、将已封口的水解管放入110℃±1℃的电热鼓风恒温箱内，水解22h，取出，冷却至室温；
c、打开水解管，将水解液转移至50ml容量瓶，用少量水多次冲洗水解管，水洗液移入同一50ml容量瓶内，最后用水定容至刻度，混匀；
d、准确吸取1ml上述溶液至15ml离心管内，在45℃水浴氮吹至近干；
e、用1mlph2.2的柠檬酸钠缓冲溶液复溶解，震荡混匀，吸取溶解液过0.22μm水系滤膜后，转移至进样小瓶，供仪器分析用；
（4）氨基酸自动分析仪分析步骤（3）得到的样品：将步骤（3）得到的样品溶液注入至氨基酸自动分析仪分析，氨基酸自动分析仪分析样品中所含氨基酸的种类、每种氨基酸的含量。
作为本发明不同年份铁观音茶叶的鉴别方法的一种改进，所述混合氨基酸标准工作液作为氨基酸检测定性和定量的依据;根据样品的保留时间和混合氨基酸标准工作液的保留时间进行定性;根据样品的峰面积和混合氨基酸标准工作液的峰面积比进行定量。
作为本发明不同年份铁观音茶叶的鉴别方法的一种改进，通过所述氨基酸自动分析仪得到的成分数据进行样品主成分分析：
将氨基酸自动分析仪得到的已知年份的铁观音茶叶中16种氨基酸数据进行主成分分析，得到主成分数据；
将主成分分析得到的主成分数据进行聚类分析；以主成分分析得到的主成分作为判别分析的自变量，聚类分析得到的聚类号作为判别分析的分组变量，进行判别分析，得到判别函数。
利用得到的判别函数，对未知年份的铁观音茶叶的氨基酸数据进行判别分类，即可判定未知年份茶叶样品的年份。
作为本发明不同年份铁观音茶叶的鉴别方法的一种改进，所述混合氨基酸标准储备液包含有16中氨基酸，分别是：
l-天门冬氨酸质量33mg摩尔质量133.1g/mol
l-苏氨酸质量30mg摩尔质量119.1g/mol
l-丝氨酸质量26mg摩尔质量105.1g/mol
l-谷氨酸质量37mg摩尔质量147.1g/mol
l-脯氨酸质量29mg摩尔质量115.1g/mol
甘氨酸质量19mg摩尔质量75.07g/mol
l-丙氨酸质量22mg摩尔质量89.06g/mol
l-缬氨酸质量29mg摩尔质量117.2g/mol
l-蛋氨酸质量37mg摩尔质量149.2g/mol
l-异亮氨酸质量33mg摩尔质量131.2g/mol
l-亮氨酸质量33mg摩尔质量131.2g/mol
l-酪氨酸质量45mg摩尔质量181.2g/mol
l-苯丙氨酸质量41mg摩尔质量165.2g/mol
l-组氨酸盐酸盐质量52mg摩尔质量209.7g/mol
l-赖氨酸盐酸盐质量46mg摩尔质量182.7g/mol
l-精氨酸盐酸盐质量53mg摩尔质量210.7g/mol。
作为本发明不同年份铁观音茶叶的鉴别方法的一种改进，所述氨基酸自动分析仪利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将氨基酸组分分离，采用不同ph值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚三酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下（通常为130～140℃）进行显色反应，形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物；其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。
与现有技术相比，本发明的优点是：本发明通过氨基酸自动分析仪来检测样品中含有的氨基酸组份，通过氨基酸组份和含量进行成分对比分析，
以主成分分析得到的主成分作为判别分析的自变量，聚类分析得到的聚类号作为判别分析的分组变量，进行判别分析，得到判别函数。利用得到的判别函数，对未知年份的铁观音茶叶的氨基酸数据进行判别分类，即可判定未知年份茶叶样品的年份。
具体实施方式
下面就根据具体实施例对本发明作进一步描述，但本发明的实施方式不局限于此。
实施例一：一种不同年份铁观音茶叶的鉴别方法，包括以下步骤：
（1）混合氨基酸标准储备液的配制：分别准确称取单个氨基酸标准品于同一100ml容量瓶，用0.1mol/l的盐酸溶液溶解，并定容至刻度，混匀，得到2.5μmol/ml混合氨基酸标准储备液；
（2）混合氨基酸标准工作液的配制：准确移取混合氨基酸标准储备液0.2ml于5ml容量瓶中，用0.1mol/l的盐酸溶液定容至刻度，混匀，为100nmol/ml的标准上机液；
（3）样品制备：
a、称取样品1.000g（精确到0.01g）置于水解管中，加入10ml6mol/l的盐酸溶液，加3滴苯酚，氮气吹扫2min，在充氮气状态下封口；
b、将已封口的水解管放入110℃的电热鼓风恒温箱内，水解22h，取出，冷却至室温；
c、打开水解管，将水解液转移至50ml容量瓶，用少量水多次冲洗水解管，水洗液移入同一50ml容量瓶内，最后用水定容至刻度，混匀；
d、准确吸取1ml上述溶液至15ml离心管内，在45℃水浴氮吹至近干；
e、用1mlph2.2的柠檬酸钠缓冲溶液复溶解，震荡混匀，吸取溶解液过0.22μm水系滤膜后，转移至进样小瓶，供仪器分析用；
（4）氨基酸自动分析仪分析步骤（3）得到的样品：将步骤（3）得到的样品溶液注入至氨基酸自动分析仪分析，氨基酸自动分析仪分析样品中所含氨基酸的种类、每种氨基酸的含量。混合氨基酸标准工作液作为氨基酸检测定性和定量的依据;根据样品的保留时间和混合氨基酸标准工作液的保留时间进行定性;根据样品的峰面积和混合氨基酸标准工作液的峰面积比进行定量。
通过所述氨基酸自动分析仪得到的成分数据进行样品主成分分析：
主成分分析步骤
（1）指标数据标准化（spss软件自动执行）；
（2）指标之间的相关性判定；
（3）确定主成分个数m；
（4）主成分fi表达式；
（5）主成分fi命名。
将氨基酸自动分析仪得到的已知年份的铁观音茶叶中16种氨基酸数据进行主成分分析，得到主成分数据；
将主成分分析得到的主成分数据进行聚类分析；以主成分分析得到的主成分作为判别分析的自变量，聚类分析得到的聚类号作为判别分析的分组变量，进行判别分析，得到判别函数。
聚类分析指将物理或抽象对象的集合分组为由类似的对象组成的多个类的分析过程。
利用得到的判别函数，对未知年份的铁观音茶叶的氨基酸数据进行判别分类，即可判定未知年份茶叶样品的年份。
判别分析：判别分析又称“分辨法”，是在分类确定的条件下，根据某一研究对象的各种特征值判别其类型归属问题的一种多变量统计分析方法。其基本原理是按照一定的判别准则，建立一个或多个判别函数，用研究对象的大量资料确定判别函数中的待定系数，并计算判别指标。据此即可确定某一样本属于何类。当得到一个新的样品数据，要确定该样品属于已知类型中哪一类。
实施例二：一种不同年份铁观音茶叶的鉴别方法，包括以下步骤：
（1）混合氨基酸标准储备液的配制：分别准确称取单个氨基酸标准品于同一100ml容量瓶，用0.1mol/l的盐酸溶液溶解，并定容至刻度，混匀，得到2.5μmol/ml混合氨基酸标准储备液；
（2）混合氨基酸标准工作液的配制：准确移取混合氨基酸标准储备液0.2ml于5ml容量瓶中，用0.1mol/l的盐酸溶液定容至刻度，混匀，为100nmol/ml的标准上机液；
（3）样品制备：
a、称取样品1.000g置于水解管中，加入10ml6mol/l的盐酸溶液，加4滴苯酚，氮气吹扫3min，在充氮气状态下封口；
b、将已封口的水解管放入111℃的电热鼓风恒温箱内，水解24h，取出，冷却至室温；
c、打开水解管，将水解液转移至50ml容量瓶，用少量水多次冲洗水解管，水洗液移入同一50ml容量瓶内，最后用水定容至刻度，混匀；
d、准确吸取1ml上述溶液至15ml离心管内，在45℃水浴氮吹至近干；
e、用1mlph2.2的柠檬酸钠缓冲溶液复溶解，震荡混匀，吸取溶解液过0.22μm水系滤膜后，转移至进样小瓶，供仪器分析用；
（4）氨基酸自动分析仪分析步骤（3）得到的样品：将步骤（3）得到的样品溶液注入至氨基酸自动分析仪分析，氨基酸自动分析仪分析样品中所含氨基酸的种类、每种氨基酸的含量。
实施例三：一种不同年份铁观音茶叶的鉴别方法，包括以下步骤：
（1）混合氨基酸标准储备液的配制：分别准确称取单个氨基酸标准品于同一100ml容量瓶，用0.1mol/l的盐酸溶液溶解，并定容至刻度，混匀，得到2.5μmol/ml混合氨基酸标准储备液；
（2）混合氨基酸标准工作液的配制：准确移取混合氨基酸标准储备液0.2ml于5ml容量瓶中，用0.1mol/l的盐酸溶液定容至刻度，混匀，为100nmol/ml的标准上机液；
（3）样品制备：
a、称取样品1.000g置于水解管中，加入10ml6mol/l的盐酸溶液，加4滴苯酚，氮气吹扫3min，在充氮气状态下封口；
b、将已封口的水解管放入109℃的电热鼓风恒温箱内，水解20h，取出，冷却至室温；
c、打开水解管，将水解液转移至50ml容量瓶，用少量水多次冲洗水解管，水洗液移入同一50ml容量瓶内，最后用水定容至刻度，混匀；
d、准确吸取1ml上述溶液至15ml离心管内，在45℃水浴氮吹至近干；
e、用1mlph2.2的柠檬酸钠缓冲溶液复溶解，震荡混匀，吸取溶解液过0.22μm水系滤膜后，转移至进样小瓶，供仪器分析用；
（4）氨基酸自动分析仪分析步骤（3）得到的样品：将步骤（3）得到的样品溶液注入至氨基酸自动分析仪分析，氨基酸自动分析仪分析样品中所含氨基酸的种类、每种氨基酸的含量。
优选的，混合氨基酸标准工作液作为氨基酸检测定性和定量的依据。
优选的，混合氨基酸标准储备液包含有16中氨基酸，分别是：
l-天门冬氨酸质量33mg摩尔质量133.1g/mol
l-苏氨酸质量30mg摩尔质量119.1g/mol
l-丝氨酸质量26mg摩尔质量105.1g/mol
l-谷氨酸质量37mg摩尔质量147.1g/mol
l-脯氨酸质量29mg摩尔质量115.1g/mol
甘氨酸质量19mg摩尔质量75.07g/mol
l-丙氨酸质量22mg摩尔质量89.06g/mol
l-缬氨酸质量29mg摩尔质量117.2g/mol
l-蛋氨酸质量37mg摩尔质量149.2g/mol
l-异亮氨酸质量33mg摩尔质量131.2g/mol
l-亮氨酸质量33mg摩尔质量131.2g/mol
l-酪氨酸质量45mg摩尔质量181.2g/mol
l-苯丙氨酸质量41mg摩尔质量165.2g/mol
l-组氨酸盐酸盐质量52mg摩尔质量209.7g/mol
l-赖氨酸盐酸盐质量46mg摩尔质量182.7g/mol
l-精氨酸盐酸盐质量53mg摩尔质量210.7g/mol。
氨基酸自动分析仪利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将氨基酸组分分离，采用不同ph值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚三酮试剂混合，然后共同流至反应管中，于一定温度下（通常为130～140℃）进行显色反应，形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物；其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和结构的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同范围限定。