一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法与流程

1.本发明涉及体外诊断技术领域，具体的说，涉及一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法。


背景技术：

2.torch是指可导致先天性宫内感染及围产期感染而引起围产儿畸形的病原体，它是一组病原微生物的英文名称缩写，其中t(toxopasma)是弓形虫，r(rubella.virus)是风疹病毒，c(cytomegalo.virus)是巨细胞，h(herpes.virus)即是单纯疱疹i/ii型。这组微生物感染有着共同的特征，即可造成母婴感染。孕妇由于内分泌改变和免疫力下降易发生原发感染，既往感染的孕妇体内潜在的病毒也容易被激活而发生复发感染。孕妇发生病毒血症时，病毒可通过胎盘或产道传播感染胎儿，引起早产、流产、死胎或畸胎等，以及引起新生儿多个系统、多个器官的损害，造成不同程度的智力障碍等症状。特别在怀孕初的三个月胚胎处于器官形成期，此时受病毒感染，可破坏细胞或抑制细胞的分裂和增殖。器官形成期以后感染病毒，可破坏组织和器官结构，并可形成持续感染，出生后继续排毒，能引起相应的病变。torch的感染影响着人口素质，与优生优育有重要关系。
3.弓形虫（tox）孕早期弓形虫感染引起的胎儿畸形。主要包括：脑积水、小脑畸形、脉络膜视网膜炎及脑钙化。血行感染可引起胎儿多器官坏死性损害，如肝脾肿大、心肌炎及血小板减少症等。无症状感染科引起胎儿宫内发育迟缓及早产。孕晚期感染者一般不会引起胎儿发育异常。
4.风疹病毒（rv）孕早期感染风疹病毒通过胎盘可感染胎儿，引起流产、胎儿宫内发育迟缓及先天性风疹综合症 (crs)。先天性风疹综合症是指由于风疹病毒感染所引起的胎儿畸形综合征。主要包括眼部畸形(如先天性白内障、小眼畸形、斜视)、头小畸形、先天性心脏病、聋哑、腭裂、短指和并指、尿道下裂及溶血性贫血等。孕妇风疹感染越早，胎儿畸形发生率较高，畸形程度也越严重。
5.巨细胞病毒（cmv）孕早期感染可引起流产及胎死；孕中晚期感染可引起胎儿黄疸、肝脾大、小脑畸形、脑积水、脑软化、白内障、巨细胞病毒肺炎、先天性心脏病、唇裂、腭裂等。
6.单纯疱疹病毒（hsv）孕妇孕早期感染后会引起流产或胎儿畸形。它的致畸作用较巨细胞病毒感染弱。常见的畸形有眼部畸形(如小眼球、独眼、白内障及视乳头萎缩)、神经系统功能缺陷(如大脑皮质萎缩及痴呆)及骨骼和皮肤损伤。单纯疱疹病毒能引起多种感染，如黏膜皮肤表面感染、生殖器和肛门感染、中枢神经系统感染以及偶见的内脏感染。孕妇感染hsv可使胎儿产生先天性感染，诱发流产、早产、死胎、畸形，新生儿hsv感染死亡率高，幸存者常有后遗症。女性生殖器hsv感染与宫颈癌的发生关系密切。hsv分为hsv-1型和hsv-2型两种血清型。常见的为hsv-1型，主要引起皮肤黏膜感染，hsv-2型主要引起生殖器感染和新生儿感染，并与宫颈癌的发生有关。
7.torch感染是严重危害新生儿健康的重要因素之一。可导致多器官损害及一系列严重后遗症。 因此，为减少病残儿的出生率及提高出生人口素质，临床工作者应进一步加
强对孕妇的宣传教育，积极做好torch感染的血清学筛查以便及早发现不良妊娠并及时处理。对新生儿也应常规开展torch检测，了解新生儿torch感染情况，以便早干预、早治疗。torch感染的血清学筛查对优生优育具有重要现实意义，临床上应常规开展torch检测。
8.torch感染后，患者特异性抗体igm、igg可迅速升高，igm出现早，可持续6-12周，而igg出现晚，但可维持终生。torch-igg抗体为torch既往感染或感染期的重要指标；igm为早期感染指标，胎盘中特异性igm的检测是诊断胎儿宫内感染的可靠依据；而torch-igm/igg抗体的联合检测，是判断torch早期感染或既往感染的重要方法。
9.在优生全套(torch)检测中，每一种病原微生物的特异抗体igg和igm之间可以有以下4种不同的组合结果，可以粗略地提示不同的感染状态。
10.有两种可能性：(1)既往感染，此次为“再发”感染；(2)近期“新发”感染，igg已出现，igm尚未消失阶段。
11.如果torch感染系“新发”感染，其对胎儿发生先天性感染的机率和造成的危害远远超过“再发”感染。有研究报告称，孕妇cmv“新发”感染所致的先天性感染率平均约为30％～40％，“再发”感染所致的先天感染率则小于1.0％。所以根据以上筛查结果，如初步诊断为近期感染，特别是igg和igm均为(+)时，就必须及早区别是“新发”还是“再发”，因为追踪复查可能不止1次2次，需要等待一段时间，会增加感染孕妇的焦虑情绪，又会延误正确诊断和处理。
12.孕前检查和咨询至少应在孕前3～6个月进行，以便有充分时间采取一些可行的预防措施，适时选择受孕时机，做好孕前和孕期保健争取成功理想的妊娠结局。
13.torch检测分直接指标的检测和间接指标检测。直接指标主要对病原体核酸、病毒抗原或通过对病毒培养进行检测，检测的是病毒本身，主要适用于诊断，但其诊断的灵敏度较差。间接指标主要对病原体的igg/igm抗体及igg抗体的亲和力进行检测，是筛查和免疫状态评估的适用方法。目前，国际上公认的最方便、最先进的早期诊断方法是检测人体血清中的特异性igm、igg抗体，以判断受到感染的情况，保存检测过的剩余血清样本对可能的后续诊断有不可替代的参考价值。
14.市场现有产品针对单项检测或单一产品分别检测，无同一产品可同时检测五项病原体igm和igg抗体。


技术实现要素：

15.本发明的第一目的是提供一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法，可以快速、准确检测弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹i型病毒、单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体，可同时判断既往感染或近期感染。
16.为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法，包括样本稀释液的制备方法、样品垫的制备方法、中和垫的制备方法、金标垫的制备方法和固相抗体反应膜的制备方法；所述金标垫的制备方法包括如下步骤：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取双蒸水加热至沸腾，加入质量百分数1%的haucl4，加速搅拌，得金溶液；取质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得胶体金溶液；
2）、取胶体金溶液缓慢加入重组抗原，充分反应后，离心，弃上清，浓缩，静置，制得重组抗原-胶体金复合物溶液；3）、取胶体金溶液加入dnp-bsa，充分反应后，离心，弃上清，浓缩，制得dnp-bsa-胶体金复合物溶液；4）、取重组抗原-胶体金复合物溶液、dnp-bsa-胶体金复合物溶液、胶体金稀释液混匀后得到金标处理液；5）、使用金标处理液处理玻璃纤维得到金标垫。
17.所述重组抗原为tox重组抗原、rv重组抗原、cmv重组抗原、hsv-i型重组抗原、hsv-ii型重组抗原中的一种。
18.所述胶体金稀释液的制备方法为：取8g tris用超纯水900ml溶解，依次加入0.5g pvp40、7.5ml曲拉通100、10g酪蛋白钠、30g蔗糖、0.1g nan3，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得胶体金稀释液。
19.使用金标处理液处理玻璃纤维的具体步骤如下：取玻璃纤维放入不锈钢盘，取金标处理液倒入不锈钢盘，使金标处理液完全均匀吸收，置于37℃干燥条件下干燥12小时。
20.所述样本稀释液的制备方法包括如下步骤：制备200mm a液：取nah2po4·
2h2o 3.12g溶于超纯水，定溶至100ml；制备200mm b液：取na2hpo4·
h2o 7.17g溶于超纯水，定溶至100ml；取a液39ml、b液61ml，依次加入3g nacl、0.5g bsa、0.1ml吐温-80、1.5g枸橼酸钠、0.2g枸橼酸、8g葡萄糖、1ml proclin-300，超纯水定容至1l，得样本稀释液。
21.所述样品垫的制备方法包括如下步骤：按以下配方配制1l样品垫处理液：称取6.057g tris，超纯水900ml溶解，依次加入5g peg20000、5ml曲拉通100、5g酪蛋白、1g edta-4na，2ml proclin-300，hcl调节ph值至8，超纯水定容至1l，得样品垫处理液；使用样品垫处理液处理样品垫：每张30cm
×
25cm的样品垫，用50ml样品垫处理液均匀涂布后置于37℃干燥条件下干燥12小时，得样品垫。
22.所述中和垫的制备方法包括如下步骤：按以下配方配制1l中和垫处理液：称取8g tris，超纯水900ml溶解，依次加入10g酪蛋白钠、0.5g pvp10、3g柠檬酸三钠、5ml吐温20、20g葡萄糖、10mg阻断剂、20mg鼠抗人红细胞单抗，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得中和垫处理液；其中，阻断剂包括hbr-6 2.5mg、hbr-9 7.5mg；使用中和垫处理液处理中和垫：每张30cm
×
25cm的8964纤维垫，用40ml中和垫处理液均匀涂布后置于37℃干燥条件下干燥12小时，得中和垫。
23.所述固相抗体反应膜的制备方法包括如下步骤：将鼠抗人igm抗体、鼠抗人igg抗体和抗dnp抗体依次包被在硝酸纤维素膜上，依次形成检测t2线、检测t1线和质控c线；其中，鼠抗人igm抗体浓度为1.0mg/ml，鼠抗人igg抗体浓度为1.5mg/ml，抗dnp抗体浓度为1.8mg/ml，55℃电热鼓风干燥箱中干燥2小时，制得固相抗体反应膜。
24.一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的制备方法制备的试剂盒，包括检测卡和样本稀释液，检测卡包括上盖、下盖和五个检测试纸条，五个检测试纸条结构相同，检测试纸条包括样品垫、中和垫、金标垫、固相抗体反应膜、吸水纸和pvc板，五个检测试纸条的金
标垫分别为弓形虫igm/igg抗体金标垫、风疹病毒igm/igg抗体金标垫、巨细胞病毒igm/igg抗体金标垫、单纯疱疹i型病毒igm/igg抗体金标垫、单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体金标垫，上盖和下盖之间形成容纳腔，五个检测试纸条位于容纳腔内且平行设置，上盖上对应检测试纸条的位置依次设有加样孔、观察窗和产品标识窗。
25.所述固相抗体反应膜粘贴在pvc板上，固相抗体反应膜的两端分别搭接有金标垫的一端和吸水纸的一端，金标垫的另一端粘贴在pvc板上，金标垫的另一端搭接有中和垫的一端，中和垫的另一端粘贴在pvc板上，中和垫的另一端搭接有样品垫的一端，样品垫的另一端粘贴在pvc板上，吸水纸的另一端粘贴在pvc板上，吸水纸的另一端上方粘贴有标识签。
26.本发明的有益效果为：（1）本发明一次操作即可快速、准确联合检测优生优育十项igm/igg抗体，简化了操作过程，有效地诊断了机体免疫反应状态，达到真正的poct检测的目的。
27.（2）本发明采用免疫捕获法原理，标记重组抗原，最大限度的提高了试剂的灵敏度，相比天然抗原减少了由于抗原序列带来的可能非特异性结合，重组抗原易量产、稳定性好，为大批量生产提供了坚实基础；（3）本发明为消除与样本中的干扰物质如嗜异性抗体、人类抗动物抗体等产生非特异性反应，采用含有阻断剂hbr中和垫及独立质控体系dnp-bsa/抗dnp抗体，采用“dnp-bsa/抗dnp抗体”质控体系，将质控系统对检测体系的干扰降至最低；中和垫中添加阻断剂，显著提高了试剂的特异性。
28.（4）本试剂盒可同时检测血清、血浆、全血不同检测介质中的弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹i型病毒、单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体，尤其是全血样本，样本稀释液中的枸橼酸钠、枸橼酸，中和垫中的鼠抗人红细胞单抗都具有保护红细胞的作用，防止溶血；婴幼儿可以直接采指尖血、足跟血，可解决婴幼儿取样难、样本量小问题，可同时检测torch十项抗体，可更好的辅助临床针对不同时期优生优育做好指导。
29.下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步说明。
附图说明
30.图1为本发明一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒检测卡内部的结构示意图；图2为本发明一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒中五个检测试纸条的结构示意图；图3为本发明一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的检测卡上盖的结构示意图。
31.图中，1-检测试纸条，2-样品垫，3-中和垫，4-金标垫，5-固相抗体反应膜，6-吸水纸，7-标识签，8
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pvc板，9-检测t2线，10-检测t1线，11-质控c线，12-上盖，13-下盖，14-加样孔，15-观察窗，16-产品标识窗。
具体实施方式
32.下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以
通过市场购买获得的常规产品。
33.所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
34.实施例1：如图1-3所示，一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒，包括检测卡和样本稀释液，检测卡包括上盖12、下盖13和五个检测试纸条1，上盖12和下盖13相互卡扣连接，上盖12和下盖13之间形成容纳腔，五个检测试纸条1位于容纳腔内且平行设置。
35.五个检测试纸条1结构相同，检测试纸条1包括样品垫2、中和垫3、金标垫4、固相抗体反应膜5、吸水纸6和pvc板8，五个检测试纸条1的金标垫4分别为弓形虫igm/igg抗体金标垫、风疹病毒igm/igg抗体金标垫、巨细胞病毒igm/igg抗体金标垫、单纯疱疹i型病毒igm/igg抗体金标垫、单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体金标垫，固相抗体反应膜5粘贴在pvc板8上，固相抗体反应膜5的两端分别搭接有金标垫4的一端和吸水纸6的一端，金标垫4的另一端粘贴在pvc板8上，金标垫4的另一端搭接有中和垫3的一端，中和垫3的另一端粘贴在pvc板8上，中和垫3的另一端搭接有样品垫2的一端，样品垫2的另一端粘贴在pvc板8上，吸水纸6的另一端粘贴在pvc板8上，吸水纸6的另一端上方粘贴有标识签7；检测试纸条1的宽度为4.0mm，上盖12上对应检测试纸条1的位置依次设有加样孔14、观察窗15和产品标识窗16，加样孔14的位置对应样品垫2所在的位置，使待测样品能滴加到样品垫2上，产品标识窗16的位置对应标识签7，以便于区分产品和生产过程监督，防止放错检测条，造成错误结果。
36.一种检测优生优育十项抗体胶体金法联合检测试剂盒的制备方法，包括样本稀释液的制备方法、样品垫的制备方法、中和垫的制备方法、金标垫的制备方法和固相抗体反应膜的制备方法。
37.（1）样本稀释液的制备方法包括如下步骤：制备200mm a液：取nah2po4·
2h2o 3.12g溶于超纯水，定溶至100ml；制备200mm b液：取na2hpo4·
12h2o 7.17g溶于超纯水，定溶至100ml；取a液39ml、b液61ml，依次加入3g nacl、0.5g bsa、0.1ml吐温-80、1.5g枸橼酸钠、0.2g枸橼酸、8g葡萄糖、1ml proclin-300，超纯水定容至1l，得样本稀释液，静止过夜后，将配置好的样本稀释液混匀按0.5ml/支分装备用。
38.（2）样品垫的制备方法包括如下步骤：按以下配方配制1l样品垫处理液：称取6.057g tris，超纯水900ml溶解，依次加入5g peg20000、5ml曲拉通100、5g酪蛋白、1g edta-4na，2ml proclin-300，hcl调节ph值至8，超纯水定容至1l，得样品垫处理液；使用样品垫处理液处理样品垫：每张30cm
×
25cm的样品垫，用50ml样品垫处理液均匀涂布后置于37℃干燥条件下干燥12小时，得样品垫，干燥保存备用。
39.（3）中和垫的制备方法包括如下步骤：按以下配方配制1l中和垫处理液：称取8g tris，超纯水900ml溶解，依次加入10g酪蛋白钠、0.5g pvp10、3g柠檬酸三钠、5ml吐温20、20g葡萄糖、10mg阻断剂、20mg鼠抗人红细胞单抗，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得中和垫处理液；
其中，阻断剂包括hbr-6 2.5mg、hbr-9 7.5mg；使用中和垫处理液处理中和垫：每张30cm
×
25cm的8964纤维垫，用40ml中和垫处理液均匀涂布后置于37℃干燥条件下干燥12小时，得中和垫，干燥保存备用。
40.（4）金标垫的制备方法包括弓形虫igm/igg抗体金标垫的制备方法、风疹病毒igm/igg抗体金标垫的制备方法、巨细胞病毒igm/igg抗体金标垫的制备方法、单纯疱疹i型病毒igm/igg抗体金标垫的制备方法、单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体金标垫的制备方法。
41.①
弓形虫igm/igg抗体金标垫的制备方法包括如下步骤：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取247.5ml双蒸水加热至沸腾，加入2.5ml质量百分数1%的haucl4，加速搅拌，得金溶液；取7.5ml质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得金颗粒直径约15nm的胶体金溶液；2）、取50ml胶体金溶液缓慢加入0.5mg tox重组抗原，充分反应后，以8000rpm离心20min，弃上清，12倍浓缩，静置反应20min，制得tox重组抗原-胶体金复合物溶液；3）、取30ml胶体金溶液加入0.3mg dnp-bsa，充分反应后，以8000rpm离心30分钟，弃上清，10倍浓缩，制得dnp-bsa-胶体金复合物溶液；4）、取8ml tox重组抗原-胶体金复合物溶液、5ml dnp-bsa-胶体金复合物溶液、87ml胶体金稀释液混匀后得到100ml tox重组抗原-胶体金复合物溶液终浓度为8%、dnp-bsa-胶体金复合物溶液终浓度为5%的金标处理液ⅰ；胶体金稀释液的制备方法为：取8g tris用超纯水900ml溶解，依次加入0.5g pvp40、7.5ml曲拉通100、10g酪蛋白钠、30g蔗糖、0.1g nan3，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得胶体金稀释液；5）、使用金标处理液ⅰ处理8964玻璃纤维得到弓形虫igm/igg抗体金标垫，具体步骤如下：取8964玻璃纤维放入不锈钢盘，量取40ml金标处理液ⅰ倒入不锈钢盘，使金标处理液ⅰ完全均匀吸收，置于37℃干燥条件下干燥12小时，制得弓形虫igm/igg抗体金标垫，干燥保存备用。
42.②
风疹病毒igm/igg抗体金标垫的制备方法包括如下步骤：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取247.5ml双蒸水加热至沸腾，加入2.5ml质量百分数1% 的haucl4，加速搅拌，得金溶液；取2.5ml质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得金颗粒直径约50nm的胶体金溶液；2）、取100ml胶体金溶液缓慢加入3mg rv重组抗原，充分反应后，以12000rpm离心20min，弃上清，15倍浓缩，静置反应20min，制得rv重组抗原-胶体金复合物溶液；3）、取20ml胶体金溶液加入0.2mg dnp-bsa，充分反应后，以8000rpm离心30分钟，弃上清，10倍浓缩，制得dnp-bsa-胶体金复合物溶液；4）、取15ml rv重组抗原-胶体金复合物溶液、3ml dnp-bsa-胶体金复合物溶液、82ml胶体金稀释液混匀后得到100ml rv重组抗原-胶体金复合物溶液终浓度为15%、dnp-bsa-胶体金复合物溶液终浓度为3%的金标处理液ⅱ；胶体金稀释液的制备方法为：取8g tris用超纯水900ml溶解，依次加入0.5g pvp40、7.5ml曲拉通100、10g酪蛋白钠、30g蔗糖、0.1g nan3，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得1l胶体金稀释液；5）、使用金标处理液ⅱ处理8964玻璃纤维得到风疹病毒igm/igg抗体金标垫，具体
步骤如下：取8964玻璃纤维放入不锈钢盘，量取40ml金标处理液ⅱ倒入不锈钢盘，使金标处理液ⅱ完全均匀吸收，置于37℃干燥条件下干燥12小时，制得风疹病毒igm/igg抗体金标垫，干燥保存备用。
43.③
巨细胞病毒igm/igg抗体金标垫的制备方法包括如下步骤：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取247.5ml双蒸水加热至沸腾，加入2.5ml质量百分数1%的haucl4，加速搅拌，得金溶液；取3.75ml质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得金颗粒直径约30nm的胶体金溶液；2）、取50ml胶体金溶液缓慢加入0.75mg cmv重组抗原，充分反应后，以10000rpm离心20min，弃上清，10倍浓缩，静置反应20min，制得cmv重组抗原-胶体金复合物溶液；3）、取20ml胶体金溶液缓慢加入0.2mg dnp-bsa，充分反应后，以8000rpm离心30分钟，弃上清，10倍浓缩，制得dnp-bsa-胶体金复合物溶液；4）、取8ml cmv重组抗原-胶体金复合物溶液、4ml dnp-bsa-胶体金复合物溶液、88ml胶体金稀释液混匀后得到100ml cmv重组抗原-胶体金复合物溶液终浓度为8%、dnp-bsa-胶体金复合物溶液终浓度为4%的金标处理液ⅲ；胶体金稀释液的制备方法为：取8g tris用超纯水900ml溶解，依次加入0.5g pvp40、7.5ml曲拉通100、10g酪蛋白钠、30g蔗糖、0.1g nan3，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得1l胶体金稀释液；5）、使用所述金标处理液ⅲ处理8964玻璃纤维得到巨细胞病毒igm/igg抗体金标垫，具体步骤如下：取8964玻璃纤维放入不锈钢盘，量取40ml金标处理液ⅲ倒入不锈钢盘，使金标处理液ⅲ完全均匀吸收，置于37℃干燥条件下干燥12小时，制得巨细胞病毒igm/igg抗体金标垫，干燥保存备用。
44.④
单纯疱疹i型病毒igm/igg抗体金标垫的制备方法包括如下步骤：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取247.5ml双蒸水加热至沸腾，加入2.5ml质量百分数1%的haucl4，加速搅拌，得金溶液；取7.5ml质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得金颗粒直径约15nm的胶体金溶液；2）、取100ml胶体金溶液缓慢加入1mg hsv-i型重组抗原，充分反应后，以10000 rpm离心20min，弃上清，10倍浓缩，静置反应20min，制得hsv-i型重组抗原-胶体金复合物溶液；3）、取30ml胶体金溶液缓慢加入0.3mg dnp-bsa，充分反应后，以8000rpm离心30分钟，弃上清，10倍浓缩，制得dnp-bsa-胶体金复合物溶液；4）、取15ml hsv-i型重组抗原-胶体金复合物溶液、5ml dnp-bsa-胶体金复合物溶液、80ml胶体金稀释液混匀后得到100ml hsv-i型重组抗原-胶体金复合物溶液终浓度为15%、dnp-bsa-胶体金复合物溶液终浓度为5%的金标处理液ⅳ；胶体金稀释液的制备方法为：取8g tris用超纯水900ml溶解，依次加入0.5g pvp40、7.5ml曲拉通100、10g酪蛋白钠、30g蔗糖、0.1g nan3，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得1l胶体金稀释液；5）、使用金标处理液ⅳ处理8964玻璃纤维得到单纯疱疹i型病毒igm/igg抗体金标垫，具体步骤如下：取8964玻璃纤维放入不锈钢盘，量取40ml金标处理液ⅳ倒入不锈钢盘，使金标处理液ⅳ完全均匀吸收，置于37℃干燥条件下干燥12小时，制得单纯疱疹i型病毒
igm/igg抗体金标垫，干燥保存备用。
45.⑤
单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体金标垫的制备：1）、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液：取247.5ml双蒸水加热至沸腾，加入2.5ml质量百分数1%的haucl4，加速搅拌，得金溶液；取1.9ml质量百分数1%的柠檬酸三钠，迅速加入沸腾的金溶液中，继续搅拌煮沸15~30min，即得金颗粒直径约60nm的胶体金溶液；2）、取100ml胶体金溶液缓慢加入2mg hsv-ii型重组抗原，充分反应后，以12000 rpm离心20min，弃上清，10倍浓缩，静置反应20min，制得hsv-ii型重组抗原-胶体金复合物溶液；3）、取20ml胶体金溶液缓慢0.2mg dnp-bsa，充分反应后，以8000rpm离心30分钟，弃上清，10倍浓缩，制得dnp-bsa-胶体金复合物溶液；4）、取20ml hsv-ii型重组抗原-胶体金复合物溶液、3ml dnp-bsa-胶体金复合物溶液、77ml胶体金稀释液混匀后得到100ml hsv-ii型重组抗原-胶体金复合物溶液终浓度为20%、dnp-bsa-胶体金复合物溶液终浓度为3%的金标处理液
ⅴ
；胶体金稀释液的制备方法为：取8g tris用超纯水900ml溶解，依次加入0.5g pvp40、7.5ml曲拉通100、10g酪蛋白钠、30g蔗糖、0.1g nan3，hcl调节ph值至8.5，超纯水定容至1l，得1l胶体金稀释液；5）、使用金标处理液
ⅴ
处理8964玻璃纤维得到单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体金标垫，具体步骤如下：取8964玻璃纤维放入不锈钢盘，量取40ml金标处理液
ⅴ
倒入不锈钢盘，使金标处理液
ⅴ
完全均匀吸收，置于37℃干燥条件下干燥12小时，制得单纯疱疹ii型病毒igm/igg抗体金标垫，干燥保存备用。
46.（5）固相抗体反应膜的制备方法包括如下步骤：将鼠抗人igm抗体、鼠抗人igg抗体和抗dnp抗体依次包被在硝酸纤维素膜上，依次形成检测t2线9、检测t1线10和质控c线11；其中，鼠抗人igm抗体浓度为1.0mg/ml，鼠抗人igg抗体浓度为1.5mg/ml，抗dnp抗体浓度为1.8mg/ml，55℃电热鼓风干燥箱中干燥2小时，制得固相抗体反应膜，干燥保存备用。
47.实施例2 ：一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒的检测方法为：a、检测样本包括血清、血浆、全血。血清、血浆样本2～8℃可存放3天，超过3天-20℃冷冻保存，反复冻融不超过3次；加抗凝剂的全血样本2～8℃可存放3天，不可冻存；未加抗凝剂的全血样本需立即使用（若样本发生凝集现象，可用血清进行检测）。
48.b、分别取血清25
µ
l、血浆25
µ
l、全血50
µ
l加入到装有样本稀释液的试剂管中，混匀作为待测样本，滴加3~4滴待测样本（80-100
µ
l）到检测卡的加样孔，15分钟观察结果，20分钟后结果无效。
49.（3）结果判断a、阴性：仅质控c线11处出现一条红色条带，在检测t1线10、检测t2线9处无红色条带出现。
50.阴性结果表明：样本中不含待测抗体；b、阳性：
①
三条红色条带出现。两条红色条带分别出现于检测t1线10、检测t2线9处，另一条红色条带出现于质控c线11处。
51.结果表明：样本中同时含有igm、igg抗体；
②ꢀ
两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测t1线10处，另一条红色条带出现于质控c线11处。
52.结果表明：样本中含有igg抗体；
③
两条红色条带出现。一条红色条带分别出现于检测t2线9处，另一条红色条带出现于质控c线11处。
53.结果表明：样本中含有igm抗体；c、无效：质控c线11处未出现红色条带，表明操作失误或试剂失效，请重试。
54.实施例3 ：本发明试剂盒的特异性（抗干扰能力）试验：临床检验中，检测样本常包含与抗原结构相近或临床症状相似的其他病原体，选取临床确诊弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹ⅰ型病毒、单纯疱疹ⅱ型病毒、e-b病毒、细小病毒b19、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、水痘-带状疱疹病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、肺炎支原体igm、igg阳性样本各10例，用本发明的试剂盒检测，结果仍均为阴性，证明本试剂盒特异性好，不与上述常见病原体igm、igg阳性样本产生交叉反应，同时torch病原体之间不存在相互干扰。
55.最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，实施方式的举例，其中未详细述及的部分均为本领域普通技术人员的公知常识，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对所述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。