专利名称：：生产特异于肽和mhc分子复合物的胞溶性t细胞的方法
技术领域：
：本发明涉及获得特异于一种肽/MHC复合物的胞溶性T细胞亚群的方法。
背景技术：
：免疫性的基础是免疫系统能识别外来分子(抗原)并与其反应，而同时能容忍机体自身组织的分子。淋巴细胞是负责识别并区分免疫系统遇到的各种抗原的细胞。每种淋巴细胞携带一能识别特定抗原的表面受体，虽然每种淋巴细胞只携带一种类型的受体并因此只能识别一种类型的抗原，但是不同的淋巴细胞具有不同的受体，因此淋巴细胞群作为一个整体能识别很宽范围的抗原。淋巴细胞有两种主要类型，即在骨髓或胎儿肝脏发育生成并能分化成抗体生成浆细胞的B细胞，以及在胸腺中分化并具有各种不同功能的T细胞。B细胞和T细胞使用的抗原受体是不同的，B细胞可识别溶液中游离的或在其它细胞表面的未修饰的抗原分子，而T细胞仅能识别与由主要组织相容性复合物(MHC)编码的分子一起被提呈到其细胞上的抗原。提呈抗原的细胞被称为抗原提呈细胞(“APCs”)，在人类中，MHCs被称为“HLAs”或“人白细胞抗原”。抗原提呈细胞吸收抗原并将其隔离在细胞内小体内，随后加工抗原并在一需要细胞存活性的耗能动力学过程中将加工后的抗原提呈到细胞表面的细胞膜上。有许多显著证据表明由T细胞识别的大多数可溶性蛋白质抗原即重新表达的表面抗原是非天然形式。动力学研究显示在原始抗原结合到提呈细胞和有效抗原提呈到T细胞之间有约1小时的延迟，当抗原结合到提呈细胞后立即而不是稍后给予升高溶酶体pH的试剂例如氨水和氯喹时可以抑制有效抗原提呈的发生。所有这些发现均得出这样一个概念即“抗原加工”，基于以上所述的信息，抗原加工已被推断涉及由提呈细胞对内在抗原的责任性部分降解，以及随后的抗原性片段以能与Ia分子一起被T细胞识别的形式在表面细胞膜上的重新表达。事实上，一种蛋白被加工并提呈到细胞表面的机制现在已得到很好的论述，这一领域发展的概述可参见Barinaga，“获得一些基本知识MHC如何结合肽”，科学257880(1992)；以及Fremont等人，科学257919(1992)；Matsumura等人，科学257927(1992)；Latron等人，科学257964(1992)。这些文献通常要求与MHC/HLA分子结合的肽约9个氨基酸长度(“九肽”)并且一些MHC分子优选在某些位置有特定的氨基酸，例如，九肽的第1位和第9位残基很重要。最近的研究工作提示其它氨基酸也可作为所谓的“锚着”位置。现有技术中产生特异于抗原/MHC复合物的胞溶性T细胞(CTLs)是将混合的淋巴细胞培养物与已在细胞内加工希望抗原的抗原提呈细胞混合，抗原提呈细胞起始具有识别该抗原/MHC复合物的T细胞受体的胞溶性T细胞前体的应答，由此那些T细胞被活化并开始细胞分裂和增殖。这种产生特异于一定抗原/MHC复合物的胞溶性T细胞克隆的方法有一系列缺点，特别是其依赖于加工细胞产生所需肽的能力，以及需要所提呈的肽的来源(例如，较大的抗原)，因此，目前仍需要改进的产生特异于抗原/MHC复合物的胞溶性T细胞的方法。本发明令人惊奇地发现将血单核细胞暴露于肽将使肽直接与血单核细胞表面存在的MHC分子结合，并且该暴露后的细胞能刺激特异于该肽和MHC分子的复合物的胞溶性T细胞。血单核细胞并不在细胞内加工肽。结果是，本发明提供了一种获得特异于特定肽/MHC复合物的胞溶性T细胞的方法以及鉴定抗原性肽的方法。发明概述本发明的一个目的在于提供一种改进的获得特异于一种肽/MHC复合物的胞溶性T细胞的方法。本发明的另一个目的在于提供一种鉴定能产生胞溶性T细胞应答的抗原性肽的方法。为实现这些和其它目的，本发明提供了一种获得特异于一种肽/MHC复合物的胞溶性T细胞亚群的方法，该方法包括将血单核细胞样品与所述的肽接触以使所述的肽直接与存在于所述的血单核细胞表面的MHC分子结合，以及在利于刺激任何特异于所述的肽和该肽所结合的所述的MHC分子的复合物的CD8β+细胞的条件下将所述的样品与CD8β+细胞群接触。本发明的其它目的、特征和优点将在以下的详细描述中变得清楚，然而应理解的是该详细描述和具体的实施例在指示本发明的优选实施方案的同时仅仅是举例说明，因为在本发明的精神和范围内的各种改变和修改对于本领域熟练技术人员在阅读详细描述后均是显而易见的。发明详述本发明涉及一种改进的获得特异于一种肽/MHC复合物的胞溶性T细胞亚群的方法，该方法包括将血单核细胞样品与所述的肽接触以使所述的肽直接与存在于所述的血单核细胞表面的MHC分子结合，以及在利于刺激任何特异于所述的肽和该肽所结合的所述的MHC分子的复合物的CD8β+细胞的条件下将所述的样品与CD8β+细胞群接触。与MHC分子结合的肽可以是任何能激起胞溶性T细胞应答的肽，已知某些MHC分子优选在肽的特定位置有特定的氨基酸，见Barinaga.，Matsumura等人，以及Latron，文献同上。1992年5月22日申请并转让给本申请的受让人的PCT申请PCT/US92/04354(引入本文作参考)，公开了一个人肿瘤排斥抗原前体编码基因家族，称为MAGE家族。在vanderBruggen等人，科学2541643(1991)中讨论了这些基因中的一些。现已清楚MAGE家族的各种基因在肿瘤细胞中表达，并可作为诊断这些肿瘤的标志，该文献中还讨论了其它用途。还可参见Traversari等人，免疫遗传学35145(1992)；vanderBruggen等人，科学2541643(1991)。对于MAGE家族基因的研究表明一些特定的肽被提呈在肿瘤细胞的表面，这种九肽的提呈需要提呈分子是HLA-A1。MAGE-1肿瘤排斥抗原(“TRA”)的复合物导致提呈该肽的细胞被胞溶性T细胞溶解。在一优选的实施方案中，该肽是MAGE衍生的肽。特别优选的是MAGE-1肽MZ2-E，或一种来源于MAGE-3并被HLA-A2分子提呈的肽，在本文由SEQIDNOS2，3和4描述。根据本发明在体外产生的胞溶性T细胞可以使用公知的技术给予患者以治疗肿瘤细胞相关的疾病。该胞溶性T细胞溶解肿瘤细胞，因此达到所希望的治疗目的。胞溶性T细胞在诊断方面也是有用的，例如，当获得特异于一种肽/MHC复合物的CTLs时，可使用熟知的技术如铬释放分析和TNF释放分析开发出检测特定肽/MHC复合物存在的分析方法。本发明还可用于鉴定抗原性肽，在这种实施方案中，将感兴趣的肽与血单核细胞接触以使该肽与细胞表面的MHC分子结合，然后在利于刺激任何特异于所述的肽/MHC分子的复合物的CD8β+细胞的条件下将该细胞与CD8β+细胞群接触。所述的肽优选长度为9-20个氨基酸，更优选9-12个氨基酸，最优选的是九聚体，即长度为9个氨基酸。实施例实施例1产生特异于Glu-Ala-Asp-Pro-Thr-Gly-His-Ser-Tyr/HLA-A1复合物的CTLsA.试剂本实施例所用培养基为“Iscove培养基”(GIBCO，GrandIsland，NY)，补加有10％浓集ABO脱补体人血清，L-精氨酸(0.55mM)，L-天冬酰胺(0.24mM)，L-谷氨酰胺(1.5mM)和2-巯基乙醇(5×10-5M)。MZ2-E肽由Glu-Ala-Asp-Pro-Thr-Gly-His-Ser-Tyr(SEQIDNO1)组成，并被冻干、以2mM重悬于水并在-80℃储存。该肽已知由HLA-A1分子提呈(Traversari等人，文献同上)。抗CD8β抗体是偶联有荧光素的单克隆抗体1A3.3，然而可使用任何抗CD8β抗体。白介素2(IL-2)用作刺激CD8β+细胞增殖的试剂，浓度为1单位/毫升能使得IL-2依赖细胞系CTLL-2半数最大增殖。也可使用其它刺激CD8β+细胞增殖的试剂，如其它白介素或细胞因子，T细胞生长因子，促有丝分裂剂，和其它现有技术熟知的物质。通过使用公知技术(不在此赘述)，将克隆有HLA-A1基因的质粒pcDSRα和带有遗传素(geneticin)抗性基因的质粒pSVtkneoβ共转染到EBV转化的B细胞系中产生克隆C1R-A1.c13。从遗传素抗性转染子中分离克隆。通过用抗HLA-A1单克隆抗体标记表明克隆C1R-A1.c13表达HLA-A1。B.分离CD8β+细胞通过密度梯度离心分离来自患者MZ2的血单核细胞并在含10％DMSO培养基中于-80℃储存。将这些细胞解冻并用荧光素偶联的mAb1A3.3标记。在ATC3000流式细胞计数器上挑选CD8β+淋巴细胞(在此例中为20％)，并将其用25mlIscove’s培养基以800个细胞/孔接种到V型底96孔微孔中。C.刺激CD8β+淋巴细胞将作为刺激细胞的血单核细胞解冻并将其以5×106细胞/ml重悬于含5mg/ml人β2微球蛋白和100mM上述MZ2-E肽的无血清培养基X-VIVO10中。在37℃温育2小时后，用3000rads铯源照射血单核细胞，并用培养基调整至4×105细胞/ml。加入IL-2(20U/ml)并将25ml悬液(相当于10000个刺激细胞)加入含步骤B得到的CD8β+淋巴细胞的微孔中。将该微型培养物于8％CO2中37℃温育。在第3天，通过加入含3mMMZ2-E肽和10U/mlIL-2的25ml培养基再刺激该微型培养物。在第7天，将自体血单核细胞与MZ2-E肽以上述相同的方式接触，将这些刺激细胞(10000/微型培养物)加到50ml补加了10U/mlIL-2的培养基中。在第11天，将刺激细胞转移到平底微孔(Nunc)中，并加入160ml含10U/mlIL-2的培养基。D.CD8β+淋巴细胞的溶解活性在第14、18和23天，将每份50ml的应答细胞转移到V型底微孔中分析它们的溶解活性，其体积由含5U/mlIL-2的培养基替代。在第15天，通过加入溶于含5U/mlIL-2的培养基中的MZ2-E肽至终浓度800nM再刺激微型培养物。微型培养物的溶解活性的测定采用不表达MZ2-E抗原的标记的EBV转化的B细胞系C1R-A1.c13及与肽MZ-2E接触的相同标记细胞。如Traversari等人(文献同上并引入本文作参考)所述用51Cr标记靶细胞，如下所述将标记的C1R-A1.c13细胞与MZ2-E肽接触以1-5×105细胞/ml将细胞重悬于含600nM肽的培养基中，并在37℃温育30分钟。对照细胞在不含肽的培养基中温育。将细胞离心，重悬于培养基中，计数并加入到效应细胞中(1000靶细胞/微孔)。发现了带有肽特异性溶解活性的微型培养物，其中的大多数是在第14天、第18天和第23天发现这一活性的。表1微型培养物的溶解活性(特异溶解率，％)表注用与MAGE-1MZ2-E九肽接触的经照射的自体血单核细胞刺激的MZ2CD8β+淋巴细胞微型培养物的溶解活性。特异性溶解百分比以在刺激的第14、18和23天分析的两套36个微型培养物中表示。靶细胞是表达HLA-A1但不表达MZ2-E抗原的EBV转化的B细胞系C1R-A1.c13，以及与MZ2-E肽接触的相同细胞。显示肽特异性的微型培养物的溶解活性用方框表示。显示MZ2-E肽特异性的23个微型培养物在体外用熟知的技术扩增，将胞溶性T细胞克隆转移到2ml孔中并在第28、37和44天通过加入补加MZ2-E肽(200nM)、IL-2(30U/ml)的培养基以及作为饲养细胞的照射过的(10000rads)同种EBV-B细胞(106/孔)再刺激。在第48天，用与MZ2-E肽接触的C1R-A1.c13细胞、MZ2-MEL肿瘤细胞、丧失MZ2-E抗原表达的抗原缺失变异体MZ2-MELE肿瘤细胞测定CTL克隆的溶解活性。仍有13个微型培养物显著溶解与肽接触的C1R-A1.c13细胞(在E/T比率为30时为大于20的溶解率)。它们还能溶解自体黑素瘤细胞，但不溶解不提呈MZ2-E抗原的变异体(见表2)。表2微型培养物的溶解活性(特异溶解率，％)</tables>表注抗MZ2九肽的微型培养物的溶解活性以及由这些微型培养物衍生的稳定抗MZ2-MELCTL克隆的溶解活性。仅示出了在第23天的特异于MZ2-E肽的微型培养物，在第23天观察到的溶解值示于表中。然后将这些微型培养物扩增并在第48天和68天以规定的效应子/靶细胞比率和附加的靶细胞分析其溶解活性，所述的附加的靶细胞为自体MZ2-MEL黑素瘤细胞系及其E抗原缺失变异体。抗MZ2-ECTL克隆82/30的溶解活性作为对照示出，这一CTL克隆在PCT/US92/04354(引入本文作参考)中有述。在第49天和58天，将来自该13个微型培养物的克隆用补加IL-2(50U/ml)的培养基、照射过(10000rads)的EBV-B细胞(106/孔)和照射过的MZ2-MEL肿瘤细胞(105/孔)再刺激。在第68天再次测试其溶解活性，仍然全部能溶解MZ2-MEL肿瘤细胞(表2)。实施例2产生特异于MAGE-3HLA-A2复合物的CTLA.试剂本实施例所用培养基为“Iscove培养基”，补加有10％浓集ABO脱补体人血清，L-精氨酸(0.55mM)，L-天冬酰胺(0.24mM)，L-谷氨酰胺(1.5mM)和2-巯基乙醇(5×10-5M)。分别将MAGE-3肽Phe-Leu-Trp-Gly-Pro-Arg-Ala-Leu-Val(SEQIDNO2)(密码子271-279；以下称为“LB-373-1”)，Ala-Leu-Ser-Arg-Lys-Val-Ala-Glu-Leu-Val(SEQIDNO3)(密码子108-117；以下称为“LB-373-2”)，和Ala-Leu-Val-Glu-Thr-Ser-Tyr-Val-Lys-Val(SEQIDNO4)(密码子277-286；以下称为“LB-373-3”)冻干，并以2mM浓度重悬于水中并于-80℃储存。已知这些肽由HLA-A2分子提呈(见在审专利USSN08/217,187，申请日为1994年3月24日，引入本文作参考)。B.分离CD8β+细胞通过密度梯度离心分离来自患者LB373的血单核细胞(该患者的肿瘤细胞提呈HLA-A2+并表达MAGE-3)并在含10％DMSO培养基中于-80℃储存。将这些血单核细胞解冻并用荧光素偶联的mAb1A3.3标记。在ATC3000流式细胞计数器上挑选CD8β+淋巴细胞，并将其用25ml培养基以1000个细胞/孔接种到V型底96孔微孔中。终体积中包括100μl补加有10％人血清、天冬酰胺-精氨酸-谷氨酰胺、10U/mlr-hu-IL-2和10ng/mlr-hu-IL-7的Iscove’s培养基。C.刺激CD8β+淋巴细胞将T2细胞重悬于无血清Iscove’s培养基+1/3(v/v)抗人I类mabW6/32培养物上清中，该T2细胞提呈HLA-A2但有抗原加工缺陷并因此具有增加的提呈外源肽的能力(Cerundolo等，自然345449(1990))，于4℃温育30分钟，然后用来自铯源的100Gy照射。而后离心细胞并将沉淀重悬于含2.5μg/ml人B2微球蛋白和100μg/mlLB-373-1、LB-373-2或LB-373-3肽的X-Vivo培养基中。在37℃温育细胞至少1小时，然后离心并重悬于补加10％人血清的Iscove’s培养基中。在第0天，将与LB-373-1、LB-373-2或LB-373-3肽预温育的3000个T2细胞加到含步骤B得到的CD8β+细胞的微孔中。在第7天，通过加入含10U/mlr-hu-IL-2和10ng/mlr-hu-IL-7的100μl新鲜培养基和6000个与LB-373-1、LB-373-2或LB-373-3肽预温育的LB373-PBLs再刺激微型培养物。这些均按如上所述制备。在第15天，将CD8β+细胞转移到平底微孔中并通过加入含10U/mlr-hu-IL-2和10ng/mlr-hu-IL-7的100μl新鲜培养基和6000个与LB-373-1、LB-373-2或LB-373-3肽预温育的LB373-PBLs再刺激微型培养物。这些均按如上所述制备。在第16天，由于强烈的增殖，将微型培养物分成两份(2/3和1/3)。D.CD8β+淋巴细胞的溶解活性在第21天，用与或未与三种MAGE-3肽之一预温育的HLA-A2+靶细胞测试淋巴细胞的溶解活性。在第23天，通过加入含10U/mlr-hu-IL-2和10ng/mlr-hu-IL-7的100μl新鲜培养基和25000个与LB-373-1肽预温育的LB373-PBL再刺激微型培养物(1/3)。随后，通过加入不同的同种异体的HLA-A2+和MAGE-3+照射的黑素瘤细胞、LG2-EBV饲养细胞、IL-2(50U/ml)和IL4(±5U/ml)每周对“阳性”微型培养物再刺激。用与或未与三种MAGE-3肽之一预温育的HLA-A2靶细胞测试来自不同微型培养物的淋巴细胞的溶解活性。在864个微型培养物中有22个微型培养物其淋巴细胞对与Phe-Leu-Trp-Gly-Pro-Arg-Ala-Leu-Val预温育的HLA-A2+靶细胞有更高的溶解活性，这是与未和肽预温育的相同靶细胞相比。随后每周用不同的HLA-A2+刺激细胞再刺激“阳性”微型培养物。下表示出某些“CTL克隆”的溶解活性。17.01.94第33天24.01.94第40天10.02.94第57天<p>表中结果证明所示的三个CTL系能识别被HLA-A2+靶细胞提呈的LB-373-1肽，因此证明本发明的可操作性。应意识到的是步骤的次序是不重要的，例如，尽管可能优选的是在与CD8β+细胞接触之前将APCs与肽合并，然而还可以在加入肽之前将两种细胞合并。类似地，可以在细胞合并之前或之后加入增殖刺激剂。另外，培养条件也可以变化，尽管实施例示出使用无血清培养基培养BMCs，但可以使用任何合适的培养基。任何对于本文的具体实施例的可能的变动对于本领域熟练技术人员均是显而易见的。在此不再赘述。序列表(1)一般信息(i)申请人皮埃尔·库利耶皮埃尔·范德布吕根蒂尔瑞·布恩-法勒尔(ii)发明名称生产特异于肽和MHC分子复合物的胞溶性T细胞的方法(iii)序列数目4(iv)通讯地址(A)收信人Felfe&Lynch(B)街道805ThirdAvenue(C)城市纽约市(D)州纽约州(E)国家美国(F)邮编10022(v)计算机可读形式(A)媒介类型软盘，5.25英寸，500kb储存容量(B)计算机IBM(C)操作系统PC/DOS(D)软件Wordperfect(vi)本申请资料(A)申请号08/261,541(B)申请日1994年6月17日(C)分类(viii)律师/代理人信息(A)姓名Bauer，JohnA.(B)注册号32,554(C)案号/文档号LUD5328(ix)电讯信息(A)电话212-688-9200(B)传真212-838-3884(2)SEQIDNO1的信息(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链性单链(D)拓扑线性(xi)序列描述SEQIDNO1Glu-Ala-Asp-Pro-Thr-Gly-His-Ser-Tyr(2)SEQIDNO2的信息(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链性单链(D)拓扑线性(xi)序列描述SEQIDNO2Phe-Leu-Trp-Gly-Pro-Arg-Ala-Leu-Val(2)SEQIDNO3的信息(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链性单链(D)拓扑线性(xi)序列描述SEQIDNO3A1a-Leu-Ser-Arg-Lys-Val-Ala-Glu-Leu-Val(2)SEQIDNO4的信息(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链性单链(D)拓扑线性(xi)序列描述SEQIDNO4Ala-Leu-Val-Glu-Thr-Ser-Tyr-Val-Lys-Va权利要求1.获得特异于一种肽/MHC复合物的胞溶性T细胞亚群的方法，包括(a)将由血单核细胞组成的样品与所述的肽接触以使所述的肽直接与所述血单核细胞表面上的MHC分子结合；(b)在利于刺激特异于所述的肽和该肽所结合的任何MHC分子的复合物的任何CD8β+细胞的条件下，将所述的样品与CD8β+细胞群接触；以及(c)获得特异于步骤(b)得到的所述肽/MHC复合物的胞溶性T细胞亚群。2.权利要求1的方法，其中所述的肽的长度为9-12个氨基酸。3.权利要求2的方法，其中所述的肽的长度为9个氨基酸。4.权利要求1的方法，其中所述的MHC分子为HLA-A1。5.权利要求4的方法，其中所述的肽是Glu-Ala-Asp-Pro-Thr-Gly-His-Ser-Tyr。6.权利要求1的方法，其中所述的MHC分子是HLA-A2。7.权利要求6的方法，其中所述的肽是Phe-Leu-Trp-Gly-Pro-Arg-Ala-Leu-Val。8.权利要求6的方法，其中所述的肽是Ala-Leu-Ser-Arg-Lys-Val-Ala-Glu-Leu-Val。9.权利要求6的方法，其中所述的肽是Ala-Leu-Val-Glu-Thr-Ser-Tyr-Val-Lys-Val。10.权利要求1的方法，进一步包括在与所述的CD8β+细胞接触之前将所述的血单核细胞与β2微球蛋白接触。11.权利要求1的方法，进一步包括在无血清培养基中将所述的血单核细胞与所述的CD8β+细胞接触。12.权利要求1的方法，进一步包括在与所述的CD8β+细胞接触之前照射所述的血单核细胞。13.权利要求1的方法，进一步包括将所述的CD8β+细胞与刺激所述的CD8β+细胞增殖的试剂接触。14.权利要求13的方法，其中所述的试剂是白介素2。15.权利要求1的方法，进一步包括在将步骤(a)得到的所述血单核细胞样品与步骤(b)的所述CD8β+细胞群接触后，向含有步骤(a)得到的所述血单核细胞样品和步骤(b)的所述CD8β+细胞群的培养物中加入另外一定量的所述的肽。16.权利要求15的方法，进一步包括向所述的培养物中加入CD8β+增殖刺激试剂。17.权利要求15的方法，其中所述的试剂是白介素2。18.鉴定能产生胞溶性T细胞应答的肽/MHC复合物的方法，包括(a)将由血单核细胞组成的样品与所述的肽接触以使所述的肽直接与所述血单核细胞表面上的MHC分子结合；(b)在利于刺激特异于所述的肽和该肽所结合的任何MHC分子的复合物的任何CD8β+细胞的条件下，将所述的样品与CD8β+细胞群接触；以及(c)确定是否产生胞溶性T细胞应答。19.权利要求18的方法，其中所述的肽的长度为9-12个氨基酸。20.权利要求19的方法，其中所述的肽的长度为9个氨基酸。21.权利要求18的方法，进一步包括在与所述的CD8β+细胞接触之前将所述的血单核细胞与β2微球蛋白接触。22.权利要求18的方法，进一步包括在无血清培养基中将所述的血单核细胞与所述的CD8β+细胞接触。23.权利要求18的方法，进一步包括在与所述的CD8β+细胞接触之前照射所述的血单核细胞。24.权利要求18的方法，进一步包括将所述的CD8β+细胞与刺激所述CD8β+细胞增殖的试剂接触。25.权利要求24的方法，其中所述的试剂是白介素2。26.权利要求18的方法，进一步包括在将步骤(a)得到的所述血单核细胞样品与步骤(b)的所述CD8β+细胞群接触后，向含有步骤(a)得到的所述血单核细胞样品和步骤(b)的所述CD8β+细胞群的培养物中加入另外一定量的所述的肽。27.权利要求26的方法，进一步包括向所述的培养物中加入CD8β+增殖刺激试剂。28.权利要求27的方法，其中所述的试剂是白介素2。全文摘要本发明涉及获得特异于一种肽/MHC复合物的胞溶性T细胞亚群的方法。文档编号G01N33/569GK1171156SQ95193563公开日1998年1月21日申请日期1995年6月14日优先权日1994年6月17日发明者皮埃尔·库利耶,皮埃尔·范德布吕根,蒂尔瑞·布恩-法勒尔申请人:路德维格癌症研究所