专利名称：全血免疫检测试剂中红细胞和血清的分离方法
技术领域：
本发明涉及免疫检测试剂检测全血时红细胞和血清的分离方法。
已知免疫检测试剂检测人或动物血液中的抗原、抗体时，需分离血清和血球。普遍使用的方法是事先用离心机离心分离，离心后吸取血清进行检测，血球、血清的分离和血清的检测在时间和空间上不能同时进行，检测对象实际上是血清；另一种分离血球和血清的方法是将全血通过一定孔径的聚酯材料进行过滤，红细胞体积小于或等于聚酯材料而被后者过滤，血清得以通过，该方法可实现血球、血清的分离和检测同时进行，检测对象是全血，但该方法因聚脂材料本身具有一定体积，象海绵一样吸取一定量全血，检测时全血使用量大，同时，为保证分离效果，聚酯孔径要小于等于红血球直径，血清和血球因过滤孔径较小，分离速度慢，使整个反应时间延长，该聚酯材料已有商品化产品，生产厂家是美国格尔曼科学公司(Gelman Sciences Inc.)，其商品名为HemasepL(水平红血胞分离材料)和HemasepV(垂直红血胞分离材料)。
本发明的目的是提供一种快速分离微量末梢血中红细胞和血清的方法，实现全血的快速免疫检测。红细胞在凝集因子作用下可相互凝集成团，凝集团体积在瞬间比单个红细胞体积增大数千倍。因此很容易被玻璃纤维垫或其它大孔径滤材过滤掉，很容易在短时间(几秒)实现血清和红细胞的分离，玻璃纤维垫本身不吸附血清，因此全血使用量较少，仅需末梢血100-200ul能引起红细胞凝集的因子有两类物质，一类是植物凝集素，另一类是用红细胞免疫动物得到的抗红细胞抗体。一定浓度的植物凝集素和抗红细胞抗体与全血混合，十多秒钟肉眼即可观察到红细胞凝集成团，显微镜下观察，可观察到数千红细胞凝集粘连在一起。红细胞与血清分离剂配方如下一、水剂(一)缓冲液0.01M PH 7.2磷酸盐缓冲液 (PB)0.85％NaCL(氯化钠)0.2％ BSA(牛血清白蛋白)0.6％ 柠檬酸三钠(也可使用其它抗凝剂，如肝素、EDTA等)5/万 NaN3(叠氮钠)(二)凝集因子稀释度用上述缓冲液倍比稀释凝集因子，稀释度1∶2-1∶1024。取各稀释度的分离剂10ul，加入全血四滴(约160ul)，肉眼观察15秒或显微镜观察5秒，出现红细胞凝集的稀释度，即为凝集因子的最适稀释度。
因凝集因子包括数量众多的、不同种类的植物凝集素和不同种类的动物抗红细胞抗体，凝集因子的效价也不同，使用何种稀释度，需具体按上述方法确定。
(三)按凝集因子的最适稀释度将凝集因子和缓冲液混合即成水剂分离剂。二、固态分离剂按上述方法确定的水剂用玻璃纤维垫或其它多孔性吸附材料吸附饱和后冻干即成。
本发明写明了红细胞与血清分离剂的缓冲液的配方、凝集因子稀释度的确定方法，以及水剂、固态分离剂的制备方法。
本发明提出的方法可用于全血快速免疫检测试剂的制备，与现有方法比，制备的试剂可检测末梢全血，用血量少，血清、红细胞分离速度快，特别适合家庭、野外、医生办公室、诊所等不具有仪器设备场所的使用。
以下所述实例详述了本发明。1、配制0.01M PH7.2磷酸盐缓冲液100ml2、加入NaCL 0.85克，柠檬酸三钠0.6克NaN350毫克牛血清白蛋白200毫克，混匀3、用上述缓冲液倍比稀释山羊抗红细胞血清1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64.........4、各取上述倍比稀释物10ul滴于载玻片上，分别加指尖全血四滴(约160ul)，轻摇混匀，15秒左右观察，1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32均有红细胞凝集，1∶32即为抗血清凝集效价。5、取上述缓冲液31ml加山羊抗人红细胞血清1ml，混匀即成分离剂。6、将分离剂与乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)免疫层析试纸组成试剂盒，即成乙肝HBsAg全血免疫层析试剂。使用时，用毛细管或加样器取10ul分离剂加于免疫层析试纸反应端暴露玻璃纤维上，然后滴指尖血四滴于玻璃纤维上，红细胞迅速凝集成团而被玻璃纤维垫及反应膜阻挡过滤，分离的血清可以与金标抗-HBsAg反应并因反应膜的毛细作用沿反应膜向吸水垫端移动，10-20分钟，血清大部分被吸水垫通过反应膜吸走，血清在通过反应膜时可进一步与包被在膜上的抗-HBsAg发生反应，而红细胞被完全阻挡过滤在玻璃纤维垫上。结果判定如血中含有HBsAg，则在反应面形成两条紫红线如血中不含有HBsAg，则在反应面形成一条紫红线
权利要求
本发明为全血免疫检测试剂中红细胞和血清的分离方法，其特征是在全血中混入红细胞凝集因子如抗-红细胞抗体、植物凝集素等，使数千个红细胞凝集成肉眼可见或显微镜可观察到的团块(抗-红细胞抗体和植物凝集可单独使用，也可联合使用)。红细胞因凝集成团，不能通过过滤材料和小孔径膜，而血清可以通过过滤材料和小孔径膜，从而达到免疫层析检测试剂和免疫渗滤检测试剂检测过程中血球和血清的分离，实现全血快速免疫检测。
全文摘要
本发明为全血免疫检测试剂中红细胞和血清的分离方法,是属于疾病诊断领域中血液的检测方法。通过在全血中混入能引起红细胞凝集的因子,使红细胞凝集成团,凝集成团的红细胞因体积增大不能通过过滤材料和小孔径的膜被过滤,而血清可以通过膜,从而达到分离血清和红细胞的目的,实现全血的快速检测。
文档编号G01N33/50GK1243251SQ98116438
公开日2000年2月2日 申请日期1998年7月28日 优先权日1998年7月28日
发明者李晨阳 申请人:华美生物工程公司郑州分公司