新型荧光报道分子及其应用,包括对胱天肽酶的测定的制作方法

专利名称：：新型荧光报道分子及其应用,包括对胱天肽酶的测定的制作方法
背景技术：
：描述发明领域本发明属于应用发荧光或荧光探针对酶的细胞内检测的领域之中。本发明涉及新型荧光染料，以及这些染料在制备作为蛋白酶及肽酶底物的新型发荧光或荧光肽或氨基酸衍生物方面的用途。本发明尤其涉及新型发荧光或荧光肽衍生物，它们是与细胞凋亡有关的酶如胱天肽酶(caspase)和淋巴细胞衍生的丝氨酸蛋白酶粒酶B的底物。本发明也涉及测定胱天肽酶和其它酶活性的方法，这些酶在来源于任何健康、病患、感染或癌器官或组织的活或死的全细胞、细胞系或组织样品中参与细胞凋亡。本发明也涉及发荧光或荧光底物在新型测定系统中用于在化合物集合或化合物文库中发现或检测细胞凋亡抑制剂或诱导剂的应用。此外，本发明涉及发荧光或荧光底物在测定癌细胞对化疗药治疗敏感性方面的应用。本发明也涉及新型发荧光或荧光肽衍生物，它们是外肽酶(如氨肽酶A和N、甲硫氨酸氨肽酶和二肽基肽酶IV)、内肤酶(如钙激活蛋白酶)、蛋白酶(如HIV蛋白酶、HCMV蛋白酶、HSV蛋白酶、HCV蛋白酶和腺病毒蛋白酶)的底物。相关技术生物通过一种被不同地称为调控性细胞死亡、程序性细胞死亡或细胞凋亡的方法来消除不需要的细胞。这种细胞死亡作为动物发育的正常方面，并在组织内环境稳定和老化中发生(Glucksmann，A.，剑桥哲学学会生物学综述(Biol.Rev.CambridgePhilos.Soc.)26:59-86(1951)；Glucksmann，A.，生物学文献(ArchivesdeBiologie)76:419-437(1965)；Ellis等人，发育(Dev.)112:591-603(1991)；Vaux等人，细胞(Cell)76:777-779(1994))。细胞凋亡调节细胞数量、利于形态发生、去除有害的或其它异常的细胞，并消除已经行使其功能的细胞。另外，细胞凋亡可随多种生理应激反应如低氧或局部缺血而发生(PCT公布申请WO96/20721)。经历调节细胞死亡的细胞具有多种形态学改变，包括质膜与核膜起泡、细胞皱缩(核质和细胞质的凝聚)、细胞器再定位和压缩、染色质凝聚以及凋亡体(包含胞内物质的膜包围的颗粒)的产生(Orrenius，S.等人，内科学杂志(J.InternalMedicine)237:529-536(1995))。细胞凋亡是通过一种细胞自杀的内源机制实现的(Wyllie，A．H.，于《生物学与病理学中的细胞死亡》(CellDeathInBiologyandPathology)，Bowen和Lockshin编，ChapmanandHall(1981)，9-34页)。由于内部或外部信号细胞激活其内部编码的自杀程序。该自杀程序是通过精细调节的遗传程序的激活而实现的(Wylie等人，国际细胞学综述(Int.Rev.Cyt.)68:251(1980)；Ellis等人，细胞生物学年述(Ann.Rev.CellBio.)7:663(1991))。凋亡细胞和凋亡体通常在裂解前被邻居细胞或巨噬细胞识别并清除。由于这种清除机制，尽管大量细胞被清除但不诱发炎症(Orrenius，S.，内科学杂志237:529-536(1995))。哺乳动物白细胞介素-1β(IL-1β)在许多病理过程中起重要作用，包括慢性及急性炎症和自身免疫病(Oppenheim，J.H.等人，今日免疫学(ImmunologyToday)，7,45-56(1986)。IL-1β是作为一种细胞结合的前体多肽(前IL-1β)而合成的，它不能结合IL-1受体，并且无生物学活性(Mosley等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)262:2941-2944(1987))。通过抑制前体IL-1β向成熟IL-1β的转化，白细胞介素-1的活性可受到抑制。IL-1也是一种参与介导多种生物学反应的细胞因子，包括炎症、脓毒性休克、创伤愈合、血细胞生成和某些白血病的发展(Dinarello，C.A.血液(Blood)77:1627-1652(1991)；diGiovine等人，今日免疫学11:13(1990))。白细胞介素-1β转化酶(ICE)是一种负责白细胞介素-1β(IL-1β)激活的蛋白酶(Thornberry，N．A.等人，自然(Nature)356:768(1992)；Yuan，J.等人，细胞75:641(1993))。ICE是一种底物特异性半胱氨酸蛋白酶，它切割无活性的前白细胞介素-1，产生成熟的IL-1。编码ICE和CPP32的基因是哺乳动物ICE/Ced-3基因家族的成员，该家族目前至少包括12个成员ICE、CPP32/Yama/Apopain、mICE2、ICE4、ICH1、TX/ICH-2、MCH2、MCH3、MCH4、FLICE/MACH/MCH5、ICE-LAP6和ICEre1Ⅲ。该半胱氨酸蛋白酶家族的蛋白水解活性在介导细胞死亡中似乎是关键的，其活性位点半胱氨酸残基对于ICE介导的细胞凋亡是必不可少的(Miura等人，细胞75:653-660(1993))。该基因家族最近被命名为胱天肽酶(Alnernri，E.S.等人，细胞87:171(1996))。死亡触发物，如肿瘤坏死因子、FAS-配体、氧或养分丧失、病毒、毒素、抗癌药等等，能以类似于级联(cascade)的方式激活细胞内的胱天肽酶，其中级联上游的胱天肽酶(例如FLICE/MACH/MCH5)能激活级联下游的胱天肽酶(例如CPP-32/Yama/Apopain)。胱天肽酶级联的激活导致细胞死亡。大量科学证据表明，在多种疾病中，当不应激活时胱天肽酶级联得到激活。这导致过度的细胞自杀和器官衰竭。与胱天肽酶级联的不适当激活及随后细胞自杀有关的疾病包括心肌梗死、充血性心力衰竭、自身免疫病、AIDS、病毒感染、肾衰竭、肝衰竭、风温性关节炎、局部缺血性中风、神经变性疾病、动脉粥样硬化等。因此，能阻断或抑制胱天肽酶级联激活的新药物的发现对大多数-如果不是全部的话-人体器官系统的退行性疾病的治疗将有广泛影响。也认为胱天肽酶在癌症的发展和治疗中是重要的。有可靠的证据表明，当含有胱天肽酶时，癌细胞缺少能激活胱天肽酶级联的部分分子机器(Los等人，血液，90卷，8号3118-3129(1997))。这使癌细胞丧失了经历细胞自杀的能力，于是细胞成为无限增殖的一它们成为癌细胞。已经显示，化疗(抗癌)药物能通过再激活休眠的胱天肽酶级联而触发癌细胞经历自杀。这可能是大多数-如果不是全部的话-已知抗癌药的作用方式的重要方面(Los等人，血液，90卷，8号3118-3129(1997)；Friesen等人，自然杂志医学分册(Nat.Med.)2:574(1996))。化疗药可能在激活不同类型癌症胱天肽酶系统的能力上有所不同。此外，抗癌药也可能在激活特定癌症(例如肺癌)及不同患者中胱天肽酶级联的能力上有所不同。换句话说，在如肺癌细胞对不同抗癌药的化学敏感性方面，患者与患者之间存在差异。总之，胱天肽酶级联的过度激活在多种退行性器官疾病中起重要作用，而无功能性胱天肽酶系统是癌细胞的标志。抑制或刺激胱天肽酶级联的新药物可能使许多人类疾病的治疗发生巨大变化，包括传染病、心血管病、内分泌病、肾病、肝病和脑病与免疫系统疾病及癌症。为了发现抑制或刺激胱天肽酶级联的药物，发展高流通量胱天肽酶激活(HTCA)测定是必要的。这些HTCA测定必须能够测定活细胞或全细胞内胱天肽酶级联的激活或抑制。理想地，HTCA测定应能足以通用于测定任何活细胞或全细胞内胱天肽酶级联的活性，无论其来源如何癌细胞、肿瘤细胞、免疫细胞、脑细胞、内分泌系统的细胞、来自不同器官系统的细胞或细胞系、活组织检查标本等。此外，这些HTCA测定应能够测定-活细胞或全细胞内-任何胱天肽酶或参与胱天肽酶级联的任何其它酶的激活或抑制。发展这些通用的HTCA测定代表了药物筛选领域中的极大进展。当前可应用的HTCA测定不允许对能激活或抑制胱天肽酶级联的化合物进行细胞内筛选。只有可用的无细胞、高流通量筛选测定能测定个别分离的胱天肽酶的活性，或者能测定例如用渗压震扰透化处理的死细胞中胱天肽酶活性的试验(Los等人，血液，90卷，8号3118-3129(1997))。但是这些酶测定不能预测化合物对活细胞中胱天肽酶级联的影响，这是由于下列原因1)无细胞测定，或者使用透化处理的死细胞的测定，不能预测化合物穿透细胞膜的能力。这是十分重要的，因为胱天肽酶级联存在于细胞内部。为了成为有活性的，化合物必须不仅能够调节胱天肽酶或其它酶，而且必须能够穿透完整的细胞膜。无细胞测定或使用死细胞的测定因而不能确定一种化合物是否能用作药物。2)在无细胞测定中分离的胱天肽酶对氧化作用和能引起酶氧化的化合物高度敏感。分离的胱天肽酶的这种性质使无细胞胱天肽酶筛选试验极易出现人为假象，并且阻碍了这些试验对组合(或其它)化学文库的高流通量筛选的成功应用。以前应用无细胞胱天肽酶测定的大量筛选尝试已经导致许多氧化胱天肽酶的抑制剂的发现，但未发现可用作有效药物的化合物。其他人也报道了相似的困难。3)许多细胞受体、蛋白质、细胞组分和辅因子-其中有很多仍未知-能影响活细胞中的胱天肽酶级联。无细胞胱天肽酶测定或应用透化处理的死细胞的测定未考虑这些细胞受体和辅因子。因此，在无细胞或死细胞胱天肽酶测定中鉴定的化合物可能在活细胞中不起作用。另一方面，可能通过一种细胞受体或辅因子间接地抑制或刺激胱天肽酶级联的化合物将在无细胞或死细胞胱天肽酶测定中被漏掉。4)非常可能的是胱天肽酶级联在来源于不同器官的细胞中起不同作用。有越来越多的证据表明，影响胱天肽酶级联的受体和辅因子随细胞型的不同而不同。利用无细胞或死细胞测定，鉴定细胞型或胱天肽酶级联的器官特异性调节剂实际上是不可能的。HTCA测定系统测定细胞内胱天肽酶或参与细胞凋亡的其它任何酶的一种潜在重要应用是人类癌症的化学敏感性试验。公知人类癌症对当前市售抗癌药的敏感性具有遗传差异例如，一名患者的肺癌细胞可能对药物A敏感，而另一名患者的肺癌可能对药物A不敏感，而对药物B敏感。不同个体癌细胞化学敏感性的这种药物遗传学差异是一种众所周知的现象。过去，试图在设计应用一种或多种市售抗癌药的治疗方案之前确定取自个体患者的癌细胞的化学敏感性。然而，化学敏感性试验未获得广泛应用，因为有关方法具有一些固有的技术困难该试验非常耗时(每次筛选需6天或更长)，并且需要在筛选之前培养细胞。细胞培养导致细胞的克隆选择，于是培养的细胞不再代表患者的癌症。用于快速测定细胞内胱天肽酶活性的一种HTCA测定系统能用来极快速地测定新切下的癌细胞的化学敏感性分布图。如果该试验具有高流通量，则检测取自同一患者如不同转移灶的多个标本的化学敏感性将是可行的。然后能利用该信息设计使用细胞对其显示最大敏感性的市售抗癌药组合的治疗方案。显然，存在对HTCA测定和用于这些测定的试剂的需要，它们能用于药物发现或诊断方法中，来快速检测并测定化合物的活性，这些化合物能激活或抑制活或死全细胞内部的胱天肽酶级联或参与细胞凋亡的其它酶。用于这类细胞测定的试剂理想地应满足下列条件a)在胱天肽酶或参与细胞凋亡的其它酶切开肽-报道分子的酰胺键后，在肽-报道分子与报道分子之间的荧光信号应当具有巨大差别，优选地肽-报道分子应当是无荧光的，最优选地肽-报道分子应当是无荧光且无色的；b)肽-报道分子应当是可透过细胞的，因此在分子中应当有最低数量的亲水基团，并且分子大小优选地应当较小；c)一旦肽-报道分子穿过细胞膜之后，优选地不能扩散到细胞之外；d)一旦肽释放后，报道分子优选地不能扩散到细胞之外。与无细胞酶测定相比，在全细胞中筛选细胞凋亡抑制剂或诱导剂的方法也能用于筛选胱天肽酶之外的酶的抑制剂。传统上，首先用无细胞酶测定鉴定酶抑制剂。然后用细胞培养物进行第二次试验，来估计完整细胞中活性化合物的活性。可透过细胞的发荧光或荧光底物使得直接在活全细胞中筛选蛋白酶和肽酶以及其它酶的抑制剂成为可能。相比无细胞酶测定，全细胞测定有几个优点。其中一个优点是，在全细胞测定中，抑制剂必须要穿过被检测的细胞。因为活细胞中的许多蛋白酶受其它蛋白质、受体或基因的调节，所以应用活细胞的筛选将允许鉴定能通过结合活性位点而干扰细胞蛋白酶的小分子化合物，以及鉴定能通过干扰转录、翻译、生物合成、亚基装配、细胞辅因子或信号转导机制(或者对于病毒蛋白酶，病毒向宿主细胞的进入)而调节蛋白酶功能的化合物。此外，在细胞中存在丰富的氨肽酶，这些氨肽酶能用于对全细胞测定的发荧光或荧光底物设计，其在无细胞酶测定中不起作用。因此，需要发展全细胞中的高流通量筛选(HTS)试验和用于这些试验的试剂，以能用于药物发现或诊断方法。AGM-1470(也称作TNP-470)是一种在临床试验中用于多种癌症的血管生成抑制剂。最近两个独立的研究组发现了AGM-1470的作用机制(Sin，N.等人，美国国家科学院院刊(Pro.Natl.Acad.Sci.U.SA.)94:6099-6103(1997)；Griffith，E.C.等人，化学与生物学(Chem.Biol.)4:461-471(1997))。他们发现，AGM-1470及类似物是2型甲硫氨酸氨肽酶(MetAP-2)的抑制剂。对一系列AGM-1470类似物测定了内皮细胞增殖抑制及甲硫氨酸氨肽酶活性抑制的能力，发现两种活性之间有显著相关性。公知血管生成抑制剂能够选择性杀伤癌细胞，因此对MetAP-2抑制剂的细胞筛选试验可产生新型抗癌药。因此MetAP-2的可透过细胞的发荧光或荧光底物能用于内皮细胞中MetAP-2抑制剂的筛选，这将产生新型抗癌剂。最近显示HIV蛋白酶抑制剂如ritonavir和viracept在对HIV感染患者的治疗中非常有效。这些抑制剂是根据HIV蛋白酶底物的结构而设计的。首先测定这些抑制剂对HIV蛋白酶的活性。然后对活性化合物检测细胞培养物中HIV感染的抑制。HIV蛋白酶的可透过细胞的发荧光或荧光底物能用于HIV感染细胞中HIV蛋白酶抑制剂的筛选，这将加速新型HIV蛋白酶抑制剂的发现过程，并产生对HIV感染的更好的新型疗法。由于HIV蛋白酶在病毒复制后期加工病毒前体蛋白质，所以也能用HIV蛋白酶之可透过细胞的发荧光或荧光底物筛选在HIV感染早期抑制基因转录或翻译、病毒进入或其它关键蛋白质的化合物。发荧光或荧光底物也能用于对HIV感染的诊断，它可能比当前应用的方法更灵敏。根据相同的原理，组织蛋白酶B之可透过细胞的发荧光或荧光底物也能用于组织蛋白酶B抑制剂的筛选。二肽基肽酶IV之可透过细胞的发荧光或荧光底物能用于二肽基肽酶IV抑制剂的筛选。肾素之可透过细胞的发荧光或荧光底物能用于肾素抑制剂的筛选，而腺病毒蛋白酶或其它病毒蛋白酶之可透过细胞的发荧光或荧光底物能用于腺病毒蛋白酶或其它病毒蛋白酶抑制剂的筛选。美国专利号4,557,862和4,640,893公开了罗丹明110衍生物，它们是具有下式的蛋白酶的荧光底物其中R1和R2相同或不同的，选自氨基酸、氨基酸衍生物、保护的氨基酸、保护的氨基酸衍生物和肽。典型的(AA)2-罗丹明和(肽)2-罗丹明是(Z-Arg)2-罗丹明110、(Arg)2-罗丹明110、(Z-Ala-Arg)2-罗丹明110、(Z-Gln-Arg)2-罗丹明110、(Z-Glu-Arg)2-罗丹明110、(Z-Gly-Arg)2-罗丹明110、(Z-Leu-Arg)2-罗丹明110、(Z-Met-Arg)2-罗丹明110、(Z-Phe-Arg)2-罗丹明110、(Z-Pro-Arg)2-罗丹明110、(Z-Trp-Arg)2-罗丹明110、(Z-Val-Arg)2-罗丹明110和(Z-Ile-Pro-Arg)2-罗丹明110。WO96/36729公开了用来测定代谢活性全细胞内酶活性的化合物或其盐。据说该试验化合物包含一种离去基团和一种指示基团。离去基团选自氨基酸、肽、糖类、硫酸、磷酸、酯、磷酸酯、核苷酸、多核苷酸、核酸、嘧啶、嘌呤、核苷、脂类及混合物。指示基团选自当与离去阶段连接时具有第一种状态、而当用酶从指示基团上切除离去基团时具有第二种状态的化合物。优选的指示化合物据认为是罗丹明110、对甲氨基酚和荧光素及这些化合物的类似物。该专利申请列出了许多酶和酶的底物。美国专利5,576,424公开了用来分析细胞代谢活性的报道分子的卤烷基衍生物，其具有通式XR-间隔区-报道分子-保护区其中-保护区是一种选择的基团，可通过特异性分析物的作用去除，产生不同于底物的报道光谱特性；报道分子是这样一种分子，当不再通过保护区-报道分子键与保护区结合时，其具有不同于底物的光谱特性；间隔区是一种共价键；XR-是一种卤烷基部分，它能与细胞内硫醇共价反应，形成一种硫醚共轭物。优选的报道化合物据认为包括罗丹明110、对甲氨基酚、荧光素等等。发明概述本发明涉及具有通式Ⅰx-y-z(Ⅰ)的发荧光或荧光报道化合物或其生物学可接受的盐或前报道分子(pro-reporter)(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中x和z相同或不同，为肽或氨基酸或酰基或其它结构，使得通式Ⅰ的化合物成为胱天肽酶的底物，或其它蛋白酶或肽酶或其它酶的底物；当x与z相同时，易分裂键只是通式Ⅰ中x-y和y-z键之一或两者均是，或者当x与z不同时，易分裂键只是通式Ⅰ中x-y或y-z键之一。y是发荧光或荧光部分。优选的化合物表示为通式ⅡR1-(AA)n-Asp-y-Asp-(AA)n-R1(Ⅱ)或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1是N端保护基，如叔丁氧羰基、酰基和苄氧羰基；每个AA独立地为任何天然或非天然α-氨基酸或β-氨基酸的残基，或α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物；每个n独立地为0-5；y是发荧光或荧光部分。优选的y是罗丹明，包括罗丹明110、罗丹明116和罗丹明19。最优选的y是罗丹明110。特别优选的化合物表示为通式Ⅲ或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、AA、n如前通式Ⅱ中所述。优选的R1是叔丁氧羰基、酰基和苄氧羰基。优选的n值为1-3。本发明也涉及通式Ⅲ的化合物的制备方法，包括(a)使罗丹明与N-fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯一起缩合，产生(Fmoc-Asp(OBu-t))2-罗丹明；(b)除去Fmoc基，得到(Asp(OBu-t))2-罗丹明；(c)使(Asp(OBu-t))2-罗丹明与Z-(AA)n缩合，产生(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))2-罗丹明；及(d)除去OBu-t保护基。在一个优选实施方案中，-(AA)n为WEHSEQIDNO:1、YVASEQIDNO:2、LEHSEQIDNO:3、DETSEQIDNO:4、DEVSEQIDNO:5、DEHSEQIDNO:6、VEHSEQIDNO:7、LETSEQIDNO:8、LEVSEQIDNO:9、SHVSEQIDNO:10、DELSEQIDNO:11、DGPSEQIDNO:12、DEPSEQIDNO:13、DGTSEQIDNO:14、DLNSEQIDNO:15、DEESEQIDNO:16、DSLSEQIDNO:17、DVPSEQIDNO:18、DEASEQIDNO:19、DSYSEQIDNO:20、ELPSEQIDNO:21、VEDSEQIDNO:22、IEPSEQIDNO:23或IETSEQIDNO:24，含羧基的氨基酸用OBu-t基保护，在最后步骤中除去该OBu-t基。在通式Ⅰ范围内的另一组优选化合物包括x与z不同的化合物。该组的优选化合物包括如下化合物，其中x是一种肽或其它结构，使该化合物成为胱天肽酶的底物，或其它蛋白酶或肽酶或其它酶的底物；并且通式Ⅰ中的x-y键在生物学条件下是易分裂键。z是保护基团，通式Ⅰ中的y-z键在生物学条件下不是易分裂键。尤其，本发明的新型发荧光或荧光报道化合物具有通式ⅤR1-(AA)n-Asp-y-R6(Ⅴ)或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、AA、n和y如前通式Ⅱ中所述；并且R6是一种保护基团，不是氨基酸或氨基酸的衍生物。尤其，通式Ⅴ的化合物的优选实施方案表示为通式Ⅶ或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、R6、AA和n如前通式Ⅱ及Ⅴ中所述；R2和R3相同或不同，独立地为氢、烷基或芳基；并且R4和R5相同或不同，独立地为氢或烷基。通式Ⅰ的化合物的另一组优选实施方案表示为通式Ⅷ或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、R6、AA和n如前通式Ⅱ及Ⅴ中所述；m是0-3的整数；R2和R3相同或不同，独立地为氢、烷基或芳基；并且R4和R5相同或不同，独立地为氢或烷基。通式Ⅰ的化合物的另一组优选实施方案表示为通式Ⅸ或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、R6、AA和n如前通式Ⅱ及Ⅴ中所述；m是0-3的整数；R2和R3相同或不同，独立地为氢、烷基或芳基；并且R4和R5相同或不同，独立地为氢或烷基。本发明也涉及通式Ⅶ的化合物的制备方法，包括(a)使罗丹明与乙酸酐反应，产生通式Ⅵ的N-乙酰基-罗丹明；(b)使通式Ⅵ的N-乙酰基-罗丹明与N-fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯一起缩合，产生N-(Fmoc-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；(c)除去Fmoc基，得到N-(Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；(d)使N-(Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明与Z-(AA)n缩合，产生N-(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；及(e)除去OBu-t保护基，得到N-(Z-(AA)n-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明；或者备择地(a)使罗丹明与乙酸酐反应，产生通式Ⅵ的N-乙酰基-罗丹明；(b)使通式Ⅵ的N-乙酰基-罗丹明与Z-(AA)n-Asp(β-OBu-t)缩合，产生N-(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；及(c)除去OBu-t保护基，得到N-(Z-(AA)n-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明。在该实施方案中，(AA)n包括如谷氨酸或天冬氨酸的氨基酸，羧基作为OBu-t基受到保护，其在最后一步被切除。因此，本发明也涉及作为罗丹明衍生物的通式Ⅵ的新型荧光染料。这些化合物的制备方法是将保护基团R6引入罗丹明的两个氨基之一。通式Ⅵ中的R2HN基提供了附着点，用于与可能的酶底物如N端保护肽的羧基反应，形成肽酰胺键。该反应将使通式Ⅵ的荧光分子转化为通式Ⅶ-Ⅸ的非荧光肽-报道分子，后者是蛋白酶或肽酶的底物。蛋白酶或肽酶对肽-报道分子中易分裂肽-报道分子酰胺键的切割产生通式Ⅵ或Ⅵ'的荧光化合物。尤其，本发明的新型荧光染料具有通式Ⅵ或生物学可接受的盐，其中R2和R3相同或不同，独立地为氢、烷基或芳基；R6是一种保护基团，不是氨基酸或氨基酸衍生物；R4和R5相同或不同，独立地为氢或烷基。优选的R2和R3是氢、甲基或乙基；优选的R4和R5是氢或甲基。本发明也涉及一种方法，其应用通式Ⅰ所代表的报道化合物测定活或死全细胞或组织中胞内胱天肽酶的活性或参与细胞凋亡的其它酶的活性。本发明也涉及应用通式Ⅰ所代表的化合物的方法和此处所述的测定法，用于测定试验物质对任何活或死全细胞或(正常或癌)组织内任何胱天肽酶的激活或抑制。通式Ⅰ所代表的化合物是可透过细胞的，即，它们能被引入全细胞或组织标本中。这些化合物是发荧光或荧光的，可以设计为对于任何已知的胱天肽酶或参与细胞凋亡的其它任何胞内酶而言特异的。Thornberry，N.A.等人，生物化学杂志272:17907(1997)描述了多种胱天肽酶底物和粒酶B底物的最佳序列。这些最佳底物序列示于表1中。表1*这些酶用新的及旧的(括号中)命名法标识。**用氨基酸的标准单字母缩写表示最佳氨基酸序列。利用Thornberry等人所述的最佳序列，按此处所述的方法能合成特异性胱天肽酶的发荧光或荧光底物。利用已知或潜在的胱天肽酶天然底物的已知或潜在切割位点肽序列，也能够设计已知或未知胱天肽酶的其它发荧光或荧光底物。表2描述了对应于可能是胱天肽酶天然底物的蛋白质中已知或潜在切割位点的肽序列。表2*用氨基酸的标准单字母缩写表示氨基酸序列。通过设计能由超过一种的参与胱天肽酶级联的酶所识别并切割的底物，发荧光或荧光底物也能用来同时测定超过一种的酶。用此处所述的测定法，可以应用对于超过一种胱天肽酶而言为“混杂的”发荧光或荧光底物测定至今仍未知的胱天肽酶的活性。当胱天肽酶级联由诱导细胞死亡的刺激所激活时，此处所述的发荧光或荧光报道分子被切割，并具有荧光发射大大增强的反应。能用分光荧光法测定荧光的变化。也能用报道分子测定不经受凋亡的细胞中的基线胱天肽酶活性。该方法适用于高流通量或超高流通量筛选试验。该测定系统是多用途的。下面列出了该测定系统的多用途性的实例1．能用该试验就任何胱天肽酶或参与细胞凋亡的其它任何酶的基线活性筛选细胞或组织。2．能同样容易地利用该试验筛选能激活或抑制胱天肽酶级联的化合物。这意味着能用该试验筛选治疗退行性疾病的药物或治疗癌症的药物。3．能用该试验筛选任何活的或死的细胞(或细胞系)中的胱天肽酶级联激活或抑制，这些细胞来源于身体的任何器官系统，包括但不限于毛发、脑、周围神经系统、眼、耳、鼻、口、扁桃体、牙齿、食道、肺、心脏、血液、血管、骨髓、淋巴结、胸腺、脾、免疫系统、肝、胃、肠道、胰、内分泌腺及组织、肾、膀胱、生殖器及生殖腺、关节、骨和皮肤。能用该试验筛选在身体任何器官系统的任何与胱天肽酶级联功能失常有关的疾病中具有潜在用途的药物。4．能用该试验筛选可直接或间接调节胱天肽酶级联的药物，即，通过调节胱天肽酶本身或通过调节影响胱天肽酶级联的细胞受体和辅因子来调节。5．能用该试验确定胱天肽酶级联调节剂所干扰的作用位点。即，该试验能有助于查明新型胱天肽酶级联调节药物作用的分子机制。本发明也涉及通式Ⅰ所代表的发荧光或荧光底物的应用，用于发现新化合物，或已知化合物在减少、预防或治疗凋亡性细胞死亡为其病因或结果的疾病方面的新用途。本发明的应用实例包括筛选在病灶性局部缺血和完全性缺血后能保护神经系统的化合物；筛选能治疗神经变性疾病的化合物，如阿尔茨海默病、huntington舞蹈病、朊病毒病、帕金森氏症、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化，共济失调、毛细管扩张和脊髓延髓萎缩；筛选能治疗心脏病的化合物，包括心肌梗死、充血性心力衰竭和心肌病；筛选能治疗视网膜疾病的化合物；筛选治疗自身免疫病的化合物，包括红斑狼疮、风湿性关节炎、Ⅰ型糖尿病、舍格伦综合征和肾小球肾炎；筛选治疗多囊肾病和贫血/红细胞生成的化合物；筛选治疗免疫系统疾病包括AIDS和SCIDS的化合物；筛选减少或防止移植期间细胞、组织及器官损伤(例如在骨髓移植过程中的移植物抗宿主病)的化合物；筛选在工业生物工程中减少或防止细胞系死亡的化合物；筛选减少或防止脱毛(毛发损失)的化合物；以及筛选减少皮肤细胞成熟前死亡的化合物。本发明也涉及通式Ⅰ所代表的发荧光或荧光底物在筛选方法中的应用，其中为了具有抗肿瘤或抗癌活性的化合物筛查已知药物的文库或组合或其它化合物文库。癌细胞或细胞系可来源于身体任何内脏或外部器官系统的任何癌症，包括但不限于脑、周围神经系统、眼、耳、鼻、口、扁桃体、牙齿、食道、肺、心脏、血液、血管、骨髓、淋巴结、胸腺、脾、免疫系统、肝、胃、肠道、胰、内分泌腺及组织、肾、膀胱、生殖器及生殖腺(例如前列腺)、关节、骨和皮肤。本发明也涉及通式Ⅰ所代表的发荧光或荧光底物在诊断方法中的应用，用于确定取自动物或人类的癌细胞对化疗药治疗的化学敏感性或抗性。癌细胞或细胞系可来源于身体任何内脏或外部器官系统的任何癌症，包括但不限于脑、周围神经系统、眼、耳、鼻、口、扁桃体、牙齿、食道、肺、心脏、血液、血管、骨髓、淋巴结、胸腺、脾、免疫系统、肝、胃、肠道、胰、内分泌腺及组织、肾、膀胱、生殖器及生殖腺(例如前列腺)、关节、骨和皮肤。本发明尤其涉及检测一种或多种细胞中参与细胞凋亡级联的酶的方法，包括(a)在一定条件下使一种或多种细胞与根据本发明的报道化合物接触，从而使该报道化合物被一种或多种细胞吸收，和(b)记录一种或多种细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞或接触报道化合物和一种已知竞争性酶抑制剂的对照细胞相比，一种或多种细胞内荧光在数值(即增加)或波长上的变化表明酶的存在。本发明也涉及一种测定一种或多种细胞中参与细胞凋亡级联的酶活性的方法，包括(a)在一定条件下使一种或多种细胞与根据本发明的报道化合物接触，从而使该报道化合物被一种或多种细胞吸收，和(b)记录一种或多种细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞或接触报道化合物和一种已知竞争性酶抑制剂的对照细胞相比，一种或多种细胞内荧光在数值或波长上的相对变化是酶活性的量度。本发明也涉及一种方法，用于确定试验物质对一种或多种试验细胞中参与细胞凋亡级联的酶是否有影响，包括(a)在一定条件下使一种或多种试验细胞与试验物质和根据本发明的报道化合物相接触，从而使报道化合物被该一种或多种细胞吸收，而试验物质或者与外膜受体相互作用，或者被该细胞吸收，和(b)记录试验细胞的荧光，其中与只接触报道化合物、未接触试验物质的对照细胞相比，该细胞内荧光在数值或波长上的变化表明该试验物质对待检测的细胞凋亡酶具有直接或间接的影响。在本发明该方面的实施中，试验细胞可在接触根据本发明的报道化合物之前、之后或基本上同时接触所述试验物质。可用该方法检查试验物质是否刺激或抑制酶活性。本发明也涉及在第一种试验物质的存在下进一步使试验细胞与第二种试验物质或试验物质的混合物接触。在一个优选实施方案中，试验细胞是一种癌细胞或细胞系，来源于需要用化疗药治疗的病人，而试验物质是一种化疗剂或化疗剂的混合物。本发明也涉及一种方法，用于确定患有癌症的动物对一种或多种化疗剂治疗的敏感性，包括(a)在一定条件下使取自该动物的癌细胞与一种或多种化疗剂及根据本发明的报道化合物相接触，从而使报道化合物被癌细胞吸收，而一种或多种药剂或者与外膜受体相互作用，或者被该细胞吸收，和(b)记录癌细胞的荧光，其中与只接触该报道化合物的对照细胞相比，癌细胞内荧光在数值或波长上的变化表明该癌细胞对一种或多种药剂是化学敏感的，并且该动物对该治疗敏感。本发明也涉及一种监测应用一种或多种化疗药对动物的治疗的方法，包括(a)对动物施用一种或多种化疗药，(b)在一定条件下将施用后采自该动物的细胞与根据本发明的报道化合物接触，从而使该报道化合物被该细胞吸收，和(c)记录与报道化合物接触的细胞的荧光，与施用前取自该动物的对照细胞相比，施用后取自该动物的细胞内荧光在数值或波长上的变化表明该动物对该化疗剂敏感。在该实施方案中，动物可能患有凋亡性细胞死亡是其病因或结果的一种疾病。本发明也涉及一种方法，用于确定试验物质是否抑制或阻止一种或多种试验细胞中的细胞死亡，包括(a)在一定条件下使试验细胞与试验物质及根据本发明的报道化合物相接触，从而使该试验物质或者与外膜受体相互作用或者被该细胞吸收，而报道化合物被该细胞吸收，和(b)记录试验细胞的荧光，其中与只接触报道化合物的对照细胞相比，试验细胞内荧光在数值或波长上的变化表明该试验物质抑制或阻止细胞死亡。本发明也涉及一种方法，用于确定试验物质是否引起或增强一种或多种试验细胞的细胞死亡，包括(a)在一定条件下使试验细胞与试验物质及根据本发明的报道化合物相接触，从而使该试验物质与外膜受体相互作用或被该细胞吸收，并且报道化合物被该细胞吸收，和(b)记录试验细胞的荧光，其中与只接触报道化合物的对照细胞相比，试验细胞内荧光在数值或波长上的变化表明该试验物质引起或增强细胞死亡。本发明也涉及一种应用通式Ⅸ所代表的报道化合物测定活全细胞中胞内肽酶和蛋白酶活性的方法，这些酶包括但不限于内皮细胞中的2型甲硫氨酸氨肽酶和HIV感染细胞中的HIV蛋白酶。本发明也涉及应用通式Ⅸ所代表的化合物的方法和此处所述的测定法，用来测定一种或多种试验化合物对活全细胞内酶的抑制或激活。通式Ⅸ所代表的报道化合物是可透过细胞的，即，它们能被引入全细胞中。这些化合物是发荧光或荧光的，并且能设计为对于已知目的酶如甲硫氨酸氨肽酶或HIV蛋白酶特异的。本发明也涉及一种检测一种或多种细胞中病毒蛋白酶的方法，包括(a)在一定条件下使该细胞与根据本发明的报道化合物相接触，从而使报道化合物被该细胞吸收，和(b)记录该细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，该细胞内荧光的变化或增强表明病毒蛋白酶的存在。本发明也涉及一种测定一种或多种病毒感染细胞中病毒蛋白酶活性的方法，包括(a)在一定条件下使一种或多种病毒感染细胞与根据本发明的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被一种或多种病毒感染细胞吸收，和(b)记录该一种或多种细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，一种或多种病毒感染细胞内荧光的变化或增强是病毒蛋白酶活性的量度。本发明也涉及一种方法，用于确定试验物质对一种或多种病毒感染细胞中的病毒蛋白酶活性是否有影响，包括(a)在一定条件下使病毒感染的试验细胞与试验物质及根据本发明的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被感染的试验细胞吸收，和(b)记录感染试验细胞的荧光，与只接触该报道化合物的感染对照细胞相比较，其中与感染的对照细胞相比，感染的试验细胞内荧光的变化或增强表明该试验物质对病毒蛋白酶有影响。在一个优选实施方案中，细胞是HIV感染的细胞，病毒蛋白酶是HIV蛋白酶。在另一个优选实施方案中，细胞是腺病毒感染的细胞，病毒蛋白酶是腺病毒蛋白酶。在另一个优选实施方案中，细胞是HSV感染的细胞，病毒蛋白酶是HSV蛋白酶。在另一个优选实施方案中，细胞是HCMV感染的细胞，病毒蛋白酶是HCMV蛋白酶。在另一个优选实施方案中，细胞是HCV感染的细胞，病毒蛋白酶是HCV蛋白酶。本发明也涉及一种测定细胞内蛋白酶或肽酶活性的方法，包括(a)在一定条件下使试验细胞与根据本发明的报道化合物接触，从而使报道化合物被试验细胞吸收，或者报道化合物与该细胞的外膜蛋白酶或肽酶相互作用，和(b)记录细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，试验细胞内荧光的变化或增强是蛋白酶或肽酶活性的量度。本发明也涉及一种方法，用于确定试验物质对试验细胞内的蛋白酶或肽酶活性是否有影响，包括(a)在一定条件下使试验细胞与试验物质及根据本发明的报道化合物相接触，从而使报道化合物被试验细胞吸收，或者报道化合物与该细胞的外膜蛋白酶或肽酶相互作用，和(b)记录试验细胞的荧光，与只接触报道化合物的对照细胞相比较，其中与对照细胞相比，试验细胞内荧光的变化或增强表明该试验物质对该蛋白酶或肽酶有影响。在一个优选实施方案中，细胞是内皮细胞，肽酶是2型甲硫氨酸氨肽酶。在另一个优选实施方案中，细胞是T细胞，肽酶是二肽基肽酶IV。在另一个优选实施方案中，细胞是神经元细胞，蛋白酶是钙激活蛋白酶。附图简述图1A-1F描述用N-辛氧羰基-罗丹明110(图1A)、N-癸氧羰基-罗丹明110(图1B)、N-十二烷基氧羰基-罗丹明110(图1C)、N-己氧羰基-罗丹明110(图1D)、N-(乙硫基)羰基-罗丹明110(图1E)和罗丹明110(图1F)染色的HL-60细胞的照片。图2A-2L描述与HL-60对照(DMSO处理的)裂解物(图2F、2I和2L)相比，长春花碱处理的(图2C、2E、2H和2K)和r-胱天肽酶-3处理的(图2A、2B、2D、2G和2J)HL-60细胞裂解物对胱天肽酶底物裂解的条形图，底物N-Z-VD-N'-乙氧羰基-R110、N-Z-EVD-N'-乙氧羰基-R110、N-Z-DEVD-N'-乙氧羰基-R110SEQIDNO:5、N-Ac-DEVD-N'-乙氧羰基-R110SEQIDNO:5、N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5、N-Ac-DEVD-N'-己氧羰基-R110SEQIDNO:5和N-Z-DEVD-N'-(乙硫基)羰基-R110SEQIDNO:5。图3A-3E描述通过与N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5温育染色的细胞的照片。长春花碱(图3A)和DMSO(图3B)处理的HL-60细胞、在测定阶段加入N-Ac-DEVD-CHOSEQIDNO:5的长春花碱处理的HL-60细胞(图3C)、抗Fas(图3D)和PBS(图3E)处理的Jurkat细胞。图4描述了一幅图，显示抗FAS和PBS处理的Jurkat细胞对N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5切割试验的结果。图5描述一幅条形图，显示胱天肽酶-3、-6、-7及-8对N-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基-R110SEQIDNO:5切割试验的结果。图6描述一幅条形图，为HL-60裂解物对N-Z-G-N'-辛氧羰基-R110和N-G-N'-辛氧羰基-R110切割试验的结果。图7A-B描述用N-Z-G-N'-辛氧羰基-R11O(A)和N-G-N'-辛氧羰基-R110(B)处理的HL-60细胞的照片。发明详述本发明的发荧光或荧光底物是具有通式Ⅰx-y-z(Ⅰ)的化合物或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中x与z相同或不同，为肽或氨基酸或酰基或其它结构，使得通式Ⅰ的化合物成为胱天肽酶或其它蛋白酶或肽酶或其它酶的底物；当x与z相同时，易分裂键只是通式Ⅰ中x-y和y-z键之一或两者均是，或者当x与z不同时，易分裂键只是通式Ⅰ中x-y或y-z键之一。y是发荧光或荧光部分。处于通式Ⅰ范围之内的优选化合物包括x与z相同并且与y连接的第一个氨基酸为Asp的化合物。最优选地，x与z相同，并且是胱天肽酶的N端保护的四肽底物，包括WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26、IETDSEQIDNO:24，或者是粒酶B的N端保护的四肽底物，包括IEPDSEQIDNO:23和VEPDSEQIDNO:27；或者x与z相同，并且是N端保护的肽，对应于由胱天肽酶四肽底物的1、2或3个氨基酸组成的羧基端或氨基端片段，包括WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、IETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26、IETDSEQIDNO:24，及粒酶B的底物包括IEPDSEQIDNO:23和VEPDSEQIDNO:27。处于通式Ⅰ范围之内的优选化合物包括其中y是罗丹明110的化合物。尤其，通式Ⅰ的化合物的优选实施方案表示为通式ⅡR1-(AA)n-Asp-y-Asp-(AA)n-R1(Ⅱ)或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1是N端保护基，包括叔丁氧羰基、乙酰基和苄氧羰基；每个AA独立地为任何天然或非天然α-氨基酸或β-氨基酸的残基，或α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物；每个n独立地为0-5；y是发荧光或荧光部分。前报道分子的一个实例是组成通式Ⅱ化合物的含羧基氨基酸残基的甲酯形式。前报道分子的另一个实例是通式Ⅱ化合物的含羧基氨基酸残基的乙酸基(AM)甲酯形式。已知含羧基化合物的AM酯是细胞可透性的，并能被细胞内的酯酶水解。一旦水解后，含羧基的化合物即成为不能透过细胞的，并且被捕获于细胞内(Adams等人，美国化学学会杂志(J.Am.Chem.Soc.)111:7957-7968(1989))。通过使相应的含羧基化合物与乙酸溴甲酯反应能制备AM酯。通式I之化合物的特别优选实施方案表示为通式Ⅲ或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、AA、n如前通式Ⅱ中所述。优选的R1是叔丁氧羰基、乙酰基和苄氧羰基。优选的n值是1-3。在通式Ⅰ范围内的另一组优选化合物包括其中x与z不同的化合物。该组的优选化合物包括如下化合物，其中x是一种肽或其它结构，使该化合物成为胱天肽酶或其它蛋白酶或肽酶或其它酶的底物；并且通式Ⅰ中的x-y键在生物学条件下为易分裂键；z是保护基团，通式Ⅰ中的y-z键在生物学条件下不是易分裂键。最优选地，x是胱天肽酶的N端保护的四肽底物，包括:WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26、IETDSEQIDNO:24，或者是粒酶B的N端保护的四肽底物，包括IEPDSEQIDNO:23和VEPDSEQIDNO:27；或者x是N端保护的肽，对应于由胱天肽酶四肽底物的1、2或3个氨基酸组成的羧基端或氨基端片段，包括WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26、IETDSEQIDNO:24，或粒酶B的底物，包括IEPDSEQIDNO:23和VEPDSEQIDNO:27；或者x是N端保护的肽，对应于由胱天肽酶四肽底物的1、2、3或4个氨基酸组成的羧基端或氨基端片段，包括:WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26、IETDSEQIDNO:24，和粒酶B的底物，包括IEPDSEQIDNO:23和VEPDSEQIDNO:27，加上对应于胱天肽酶底物P'1-P'2部分的1-2个氨基酸，包括G、A、GA、GG和AG。尤其，本发明的新型发荧光或荧光报道化合物具有通式ⅤR1-(AA)n-Asp-y-R6(Ⅴ)或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1是N端保护基，包括叔丁氧羰基、乙酰基、辛酰基和苄氧羰基；每个AA独立地为任何天然或非天然α-氨基酸或β-氨基酸的残基，或α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物；n为0-5；y是发荧光或荧光部分；且R6是一种保护基团，不是氨基酸或氨基酸的衍生物。尤其，本发明的通式Ⅶ-Ⅸ的新型发荧光或荧光报道分子是罗丹明的衍生物，包括罗丹明110、罗丹明116和罗丹明19。这些新型发荧光或荧光报道分子的制备方法是，首先将保护基团R4引入罗丹明的两个氨基之一中，产生通式Ⅵ的新型荧光染料。剩余的HNR2基与一种有效的酶底物反应，产生通式Ⅶ-Ⅸ的发荧光底物。通过保护罗丹明的两个氨基之一，与双重取代的罗丹明如双肽-罗丹明相比底物的总体积降低。更为重要的是，选择保护基团使得a)它在生物学条件下稳定且不能水解，于是排除了氨基酸，因为细胞中存在的肽酶能有效地切开形成的肽键；b)优选地不要太庞大(例如较小)，以降低肽-报道分子的总体积，使得它成为一种较好的酶底物；c)优选地在性质上是疏水的，以便提高发荧光或荧光报道分子的细胞通透性。优选的R6保护基团包括但不限于C2-12烷氧羰基，如甲氧羰基、乙氧羰基、己氧羰基、辛氧羰基、癸氧羰基和十二烷氧羰基；C2-12(烷硫基)羰基，如(乙硫基)羰基、(己硫基)羰基、(辛硫基)羰基；芳烷基氧羰基，如苄氧羰基、C2-12酰基(烷酰基)，如乙酰基和辛酰基、氨基甲酰基，如二甲基氨基甲酰、N-甲基-N-己基氨基甲酰，和烷基、卤烷基或芳烷基，磺酰基如甲磺酰基。特别优选的R6保护基团是CH3OCO-、CH3(CH2)pOCO-(p=1-11)、Cbz、Cl3CCH2OCO-和PhCH2CH2OCO-(氨基甲酸酯系列)；Me(OCH2CH2)qOCO-(q=1-4)和CH3(CH2)r(OCH2CH2)sOCO-(r=0-5，s=1-4)(烷氧基烷基氨基甲酸酯系列)；EtSCO-、H3(CH2)5SCO-、CH3(CH2)7SCO-、CH3(CH2)9SCO-和CH3(CH2)tSCO-(t=0-11)(硫代氨基甲酸酯系列)；Ts-、PhSO2-、MeSO2、CH3(CH2)uSO2-(u=0-11)、PhCH2SO2-和CF3SO2-(氨磺酰系列)；Me2NCO-、Et2NCO-和N-Me-N-CH3(CH2)vNCO-(v=0-9)(尿素系列)；和HCO-、H3CO-、CH3(CH2)wCO(W=0-9)、PhCH2CO-和PhCO-(酰胺系列)。最优选的R6保护基团含有一种类似于膜脂的疏水基，从而提高发荧光或荧光报道分子的细胞通透性，以及靶向蛋白酶或肽酶切割底物后荧光部分在细胞中的保留。这些优选的R6保护基团包括但不限于CH3(CH2)pOCO-(p=1-11)(氨基甲酸酯系列)；Me(OCH2CH2)qOCO-(q=1-4)和CH3(CH2)r(OCH2CH2)sOCO-(r=0-5，s=1-4)(烷氧基烷基氨基甲酸酯系列)；EtSCO-、CH3(CH2)5SCO-、CH3(CH2)7SCO-和CH3(CH2)9SCO-(硫代氨基甲酸酯系列)；CH3(CH2)tSO2-(t=0-11)(氨磺酰系列)；N-Me-N-CH3(CH2)uNCO-(u=0-9)(尿素系列)；和CH3(CH2)wCO(W=0-9)(酰胺系列)。通式Ⅶ-Ⅸ的新型发荧光或荧光报道分子的制备方法是，使通式Ⅵ的新型荧光染料的氨基NHR2与潜在的酶底物如N端保护肽的羧基反应，形成肽酰胺键。该反应使通式Ⅵ的荧光分子转化为通式Ⅷ-Ⅸ的无荧光肽-报道分子，它是蛋白酶或肽酶的底物。因此通式Ⅶ的保护基团R6-N键不应被切割而肽-报道分子酰胺键在生物学条件下应为易分裂键是非常重要的。蛋白酶或肽酶对通式Ⅶ-Ⅸ的易分裂肽-报道分子酰胺键的酶切产生通式Ⅵ或Ⅵ'的荧光化合物。通式Ⅴ的化合物的特别优选实施方案表示为通式Ⅶ或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R2和R3相同或不同，独立地为氢、烷基或芳基；R6是一种保护基团，不是氨基酸或氨基酸的衍生物；R4和R5相同或不同，独立地为氢或烷基；R1是N端保护基；每个AA独立地为任何天然或非天然α-氨基酸或β-氨基酸的残基，或α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物；n为0-5；易分裂键是通式Ⅶ中的Asp-N键。优选的R2和R3是氢、甲基或乙基；优选的R4和R5是氢或甲基。优选的氨基酸包括天然氨基酸，包括酪氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、色氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺和半胱氨酸。非天然氨基酸包括叔丁基甘氨酸和N,N-二甲基谷氨酰胺。前报道分子的一个实例是包含通式Ⅶ化合物的含羧基氨基酸残基的甲酯形式。前报道分子的另一个实例是通式Ⅶ化合物的含羧基氨基酸残基的乙酸基甲基(AM)酯形式。通式Ⅰ的化合物的另一组优选实施方案表示为通式Ⅷ或其生物学可接受的盐或前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、R6、AA和n如前通式Ⅱ和Ⅴ中所述；m为0-3的整数；R2和R3相同或不同，独立地为氢、烷基或芳基；而R4和R5相同或不同，独立地为氢或烷基。通式Ⅷ的化合物是胱天肽酶或与细胞凋亡有关的其它酶的新型发荧光或荧光底物。当m为0时，Asp与罗丹明之间酰胺键的裂解使发荧光底物转化为通式Ⅵ的荧光染料。当m不是0时，Asp与(AA)m之间酰胺键的裂解将使罗丹明与NH2-(AA)m连接。然后细胞中存在的氨肽酶除去剩余的氨基酸(AA)m，产生通式Ⅵ的荧光染料。可将(AA)m设计为符合胱天肽酶或凋亡相关酶底物酶切位点的P'序列。胱天肽酶或凋亡相关酶的已知底物的P'序列的引入预计将提高发荧光底物的特异性及亲和力。由于氨肽酶广泛存在于细胞中，所以对于全细胞测定，能在通式Ⅷ的底物设计时插入(AA)m序列。这是全细胞测定法优于无细胞酶测定法的另一个优点。例如，当(AA)m为Gly时，通式Ⅷ的底物可适用于全细胞测定，而在无细胞胱天肽酶测定中则不适用，因为Asp-Gly酰胺键的裂解将使Gly与罗丹明连接，它是无荧光的。前报道分子的一个实例是包含通式Ⅷ化合物的含羧基氨基酸残基的甲酯或乙酯形式。前报道分子的另一个实例是通式Ⅷ化合物的含羧基氨基酸残基的乙酸基甲基(AM)酯或新戊酸甲基(PM)酯形式。已知含羧基化合物的AM酯是可透过细胞的，并能被细胞内的酯酶水解。一旦水解，含羧基化合物即变为细胞不透性的，并被捕获至细胞内(Adams等人，美国化学学会杂志111:7957-7968(1989))。通过使相应的含羧基化合物与乙酸溴甲酯反应能制备AM酯。通式Ⅰ的化合物的再另一组优选实施方案表示为通式Ⅸ或其生物学可接受的盐或其前报道分子(如含羧基氨基酸残基的甲酯形式)，其中R1、R6、AA和n如前通式Ⅱ和Ⅴ中所述；m为0-3的整数；R2和R3相同或不同，独立地为氢、烷基或芳基；而R4和R5相同或不同，独立地为氢或烷基。优选的R1是叔丁氧羰基、乙酰基、辛酰基、十二烷酰基和苄氧羰基。优选的n为1-4。优选的R2和R3为氢、甲基或乙基。优选的R4和R5为氢或甲基。优选的R6保护基包括但不限于C2-12烷氧羰基，如甲氧羰基、乙氧羰基、己氧羰基、辛氧羰基、癸氧羰基和十二烷氧羰基；C2-12(烷硫基)羰基，如(乙硫基)羰基、(己硫基)羰基、(辛硫基)羰基；芳基烷氧羰基，如苄氧羰基；C2-12酰基(烷酰基)，如乙酰基和辛酰基；氨基甲酰基，如二甲基氨基甲酰基、N-甲基-N-己基氨基甲酰基；和烷基、卤烷基或芳烷基磺酰基如甲磺酰基。在通式Ⅸ中，(AA)n设计为一种氨基酸或肽，它作为p侧序列被特异性肽酶或蛋白酶识别，并能被靶向肽酶或蛋白酶酶切。(AA)m设计为一种氨基酸或肽，它作为P'侧序列被特异性肽酶或蛋白酶识别，并能被细胞中存在的氨肽酶去除。当R1是N端保护基如叔丁氧羰基、Cbz或乙酰基时，通式Ⅸ的化合物是内肽酶(如组织蛋白酶D)或蛋白酶(如HIV蛋白酶)的底物；当R1是H时，通式Ⅸ的化合物是外肽酶(如甲硫氨酸氨肽酶)的底物。特别将通式Ⅸ的化合物设计为2型甲硫氨酸氨肽酶(MetAP-2)的底物。最近两个研究小组(Griffith，E.C.等人，化学与生物学4:461-471(1997)和Sin，N.等人，美国国家科学院院刊94:6099-6103(1997))鉴定MetAP-2为血管生成抑制剂AGM-1470-目前经受临床试验的一种抗癌药-的常见目标。MetAP-2是一种双功能酶，它也通过影响eIF-2的磷酸化状态调节蛋白质合成。据报道AGM-1470只抑制MetAP-2的氨肽酶活性，对MetAP-2的调节活性没有影响(Griffith，E.C.等人，化学与生物学4:461-471(1997))。由于公知血管生成抑制剂如AGM-1470能够选择性杀伤癌细胞，所以预计MetAP-2的抑制剂具有抗血管生成性质，是一种潜在的新型抗癌剂。MetAP-2是一种依赖钴的酶，能水解某些蛋白质的氨基端甲硫氨酸。其优选的底物是Met-X-Y。X是含有不带电的小侧基的氨基酸，如Gly、Ala、Ser，而公知Leu、Met、Arg和Tyr将导致无活性的底物。Y可以是Ser、Met、Gly或其它氨基酸(Li，X.和Y.-H.，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem.Biophy.Res.Com.)227:152-159(1996))。因为罗丹明比氨基酸大很多，所以甲硫氨酸直接连接于罗丹明的化合物很可能不是MetAP-2的底物。利用全细胞中氨肽酶的存在，甲硫氨酸与罗丹明之间(AA)m序列的插入将形成MetAP-2的一种良好底物。预计这类底物适用于全细胞测定，但在无细胞MetAP-2酶测定中则不适用。对于设计为MetAP-2底物的通式Ⅸ的化合物，优选的R1是H，优选的(AA)n是Met，优选的(AA)m是Gly、Ala、Gly-Gly、Ala-Gly或Gly-Ala。在内皮细胞中2型甲硫氨酸氨肽酶将切下甲硫氨酸，产生与(AA)m连接的罗丹明。然后存在于细胞内的氨肽酶切除(AA)m，产生通式Ⅵ的荧光染料。通式Ⅸ的化合物可用于内皮细胞中MetAP-2抑制剂的筛选，预计这将导致新型抗癌药的鉴定。也能将通式Ⅸ的化合物设计为HIV蛋白酶的底物。HIV蛋白酶是一种天冬氨酸蛋白酶，它能加工由gag和pol基因转录的多肽，对于传染性病毒的成熟是至关重要的。因此，HIV蛋白酶是HIV的化学治疗性干预的重要目标之一。最近，几种HIV蛋白酶抑制剂显示在HIV治疗中具有极大的潜能，并获准上市。这些HIV蛋白酶抑制剂中的大多数是根据蛋白酶底物的结构设计的。因此，这些化合物是肽或肽结构模拟物(peptidomimetics)。对新型HIV蛋白酶抑制剂的寻找预期将得到对抗这种致死性疾病的更有效的药物。HIV蛋白酶的优选底物是在P1-P1'之间具有易分裂疏水-疏水肽键或芳族-脯氨酸肽键的肽(West，M.L．和Fairlie，D.P.，药理学趋势(Trand.Pharm.Sci.)16:67-74(1995))。已经发现病毒gag和gag-pol蛋白质中的九个独特位点能被蛋白酶切开(Martin，J.A.等人，药物化学进展(Prog.Med.Chem.)32:239-287(1995)。这九个位点的P4-P3'序列是Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-ValSEQIDNO:28、Ala-Arg-Val-Leu-Ala-Glu-AlaSEQIDNO:29、Ala-Thr-Ile-Met-Met-Gln-ArgSEQIDNO:30、Arg-Gln-Ala-Asn-Phe-Leu-GlySEQIDNO:31、Pro-Gly-Asn-Phe-Leu-Gln-SerSEQIDNO:32、Ser-Phe-Ser-Phe-Pro-Gln-IleSEQIDNO:33、Thr-Leu-Asn-Phe-Pro-Ile-SerSEQIDNO:34、Ala-Glu-Thr-Phe-Tyr-Val-AspSEQIDNO:35和Arg-Lys-Val-Leu-Phe-Leu-AspSEQIDNO:36。根据这些天然底物已为HIV蛋白酶活性测定制备了HIV蛋白酶的多种发荧光、放射性或显色底物。根据p24/p15酶切位点衍生的六肽底物制备了一种分子内淬灭的发荧光底物-2-氨基苯甲酰-Thr-Ile-Nle-(4-NO2-Phe)-gln-Arg-NH2SEQIDNO:141，其中易分裂键是Nle-(4-NO2-Phe)(Toth，M.V.和Marshall，G.R.，国际肽与蛋白质研究杂志(Int.J.Pept.ProteinRes.)36:544-550(1990))。Tamburini等人报道了利用HPLC用底物N-Dns-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-ValSEQIDNO:28对HIV蛋白酶活性的荧光测定(Tamburini，P.P.等人，分析生物化学(Anal.Biochem.)186:363-368(1990))，其中Tyr-Pro是易分裂键。已经发展了许多其它的HIV蛋白酶底物，其中从HIV蛋白酶底物切割位点的P侧和P'侧都引入了序列，包括发荧光的N-α-苯甲酰基-Arg-Gly-Phe-Pro-MeO-β-萘酰胺SEQIDNO:37，其含有能被HIV-1蛋白酶识别的Phe-Pro二肽键(Tyagi，S.C.和Carter，C.A.，分析生物化学200:143-148(1992))；放射性标记的七肽底物，[酪氨酰-3,5-3H]Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2SEQIDNO:38，它是基于在病毒多蛋白底物Pr55gag中发现的p17-p24切割位点Tyr-Pro(Hyland，L.J.等人，分析生物化学188:408-415(1990))；基于血管紧张肽Ⅰ的肽Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-Leu-Glu-Glu-SerSEQIDNO:39，它产生血管紧张肽Ⅰ(AngⅠ)和Leu-Glu-Glu-SerSEQIDNO:40(Evans，D.B.等人，分析生物化学206:288-292(1992))；分子内荧光共振能量转移(FRET)底物4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸(DABCYL)-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-5-[(2-氨乙基)氨基]萘-1SEQIDNO:41磺酸(EDANS)，其中Tyr-Pro是切割位点(Matayoshi，E.D.等人，科学247:954-958(1990))；和发色肽底物H-Ser-Gln-Asn-Leu-Phe(NO2)-Leu-Asp-Gly-NH2SEQIDNO:42和乙酰基-Arg-Lys-Ile-Leu-Phe(NO2)-Leu-Asp-Gly-NH2SEQIDNO:43，其中对硝基苯丙氨酰和亮氨酰残基之间的酰胺键是易分裂键。另外，报道了发色底物Lys-Ala-Arg-Val-Leu-Phe(NO2)-Glu-Ala-MetSEQIDNO:44，其中Leu-Phe(NO2)是切割位点(Richards，A.D.等人，生物化学杂志265:7733-7736(1990))。SAR研究发现，如在不同pH值时所测定的，用正亮氨酸、Met、Phe或Tyr取代P1中的Leu残基对动力学参数(Kcat和Kcat/Km)具有最小的影响，而发现在P1中含有Ile或Val的肽水解极其缓慢。利用全细胞中非特异性氨肽酶的存在，通式Ⅸ的HIV蛋白酶的发荧光或荧光底物能设计为从HIV底物P侧与P'侧都掺入氨基酸，以用于全细胞测定。预计在HIV蛋白酶切下P侧肽序列后，P'侧的肽序列将被细胞中存在的氨肤酶切除。对于设计为HIV蛋白酶底物的通式Ⅸ的化合物，优选的R1是乙酰基或Cbz，优选的(AA)n是Thr-Ile-Nle，优选的(AA)m是Phe-Gln-Arg、Phe-Gln或Phe；或者优选的(AA)n是Ser-Leu-Asn-PheSEQIDNO:54，或Leu-Asn-Phe，优选的(AA)m是Pro-Ile-Val、Pro-Ile或Pro；或者优选的(AA)n是Ser-Gln-Asn-TyrSEQIDNO:45，或Gln-Asn-Tyr，优选的(AA)m是Pro-Ile-Val-GlnSEQIDNO:46、Pro-Ile-Val、Pro-Val-Val-NH2、Pro-Val-NH2、Pro-Ile或Pro；或者优选的(AA)n是Arg-Gly-Phe，优选的(AA)m是Pro；或者优选的(AA)n是Lys-Ala-Arg-Val-LeuSEQIDNO:47、Ala-Arg-Val-LeuSEQIDNO:48或Arg-Val-Leu，优选的(AA)m是Phe-Glu-Ala-MetSEQIDNO:49、Phe-Glu-Ala、Phe-Glu或Phe；或者优选的(AA)n是Pro-Phe-His-LeuSEQIDNO:50或Phe-His-Leu，优选的(AA)m是Leu-Glu-Glu-SerSEQIDNO:40、Leu-Glu-Glu、Leu-Glu或Leu；或者优选的(AA)n是Ser-Gln-Asn-Leu-pheSEQIDNO:140、Gln-Asn-Leu-PheSEQIDNO:51、Asn-Leu-Phe、Arg-Lys-Ile-Leu-PheSEQIDNO:52、Lys-Ile-Leu-PheSEQIDNO:53或Ile-Leuphe，优选的(AA)m是Leu-Asp-Gly-NH2、Leu-Asp-NH2或Leu-NH2。更优选的(AA)n是Ser-Leu-Asn-PheSEQIDNO:54或Leu-Asn-Phe，更优选的(AA)m是Pro-Ile-Val、Pro-Ile或Pro；或者更优选的(AA)n是Arg-Gly-Phe，更优选的(AA)m是Pro。通式Ⅸ的HIV蛋白酶的底物预计适用于全细胞测定，但不适用于无细胞酶测定。HIV感染的细胞中HIV蛋白酶对(AA)n-(AA)m酰胺键的切割产生与(AA)m连接的罗丹明。然后细胞内存在的氨肽酶切下(AA)m，产生通式Ⅵ的荧光染料。通式Ⅸ的化合物可用于HIV感染的细胞中HIV蛋白酶抑制剂的筛选。这将加速新型HIV蛋白酶抑制剂的发现进程，尤其是非肽或非肽结构模拟物HIV蛋白酶抑制剂的发现进程，这可能产生比目前使用的药物更好的抗HIV剂。由于HIV蛋白酶在病毒复制末期加工病毒前体蛋白质，所以也能用HIV蛋白酶的可透过细胞的发荧光或荧光底物，筛选抑制基因转录或翻译、病毒进入或HIV感染早期的其它关键蛋白质的化合物。因此该方法能导致具有新型机制的HIV感染抑制剂的鉴定，它不能在无细胞酶测定中鉴定。另外，由于HIV感染细胞中的HIV蛋白酶能切割可透过细胞的通式Ⅸ的底物而在细胞内产生通式Ⅵ的荧光染料，因此通式Ⅴ的底物也能用于HIV感染的诊断。也能将通式Ⅸ的化合物设计为腺病毒蛋白酶的底物。腺病毒是几种疾病的病因，包括能导致肺炎的散发性呼吸道疾病和流行性急性呼吸道疾病。腺病毒蛋白酶是一种半胱氨酸蛋白酶，它能切割几种病毒蛋白质，是病毒成熟和传染性所必需的(Weber，J.M.，微生物学与免疫学当前主题(Curr.Top.Microbiol.Immunol.)199/I:227-235(1995))。腺病毒蛋白酶的优选的底物包括(M,L,I)XGX-G和(M,L,I)DXGG-X。底物的特异性主要取决于P2和P4氨基酸(Diouri，M.等人，生物化学杂志271:32511-32514(1996))。疏水性氨基酸如Met、Leu和Ile在P4中是优选的。小氨基酸如Gly在P2中是优选的。对于P1和P1'，疏水性小氨基酸也是优选的，如Ala和Gly；而P3能适应几乎任何氨基酸。这些发现得到最近确定的人腺病毒蛋白酶晶体结构的支持，其11个氨基酸辅因子和底物根据晶体结构建模(Ding，J.等人，EMBOJ.15:1778-1783(1996))。利用全细胞中氨肽酶的存在，腺病毒蛋白酶的发荧光或荧光底物能设计为只从腺病毒蛋白酶底物的P侧或从P侧及P'侧两侧掺入氨基酸，用于全细胞测定。对于设计为腺病毒蛋白酶底物的通式Ⅸ的化合物，优选的R1是乙酰基或Cbz，优选的(AA)n是Leu-Arg-Gly-GlySEQIDNO:55、Met-Arg-Gly-GlySEQIDNO:56、Ile-Arg-Gly-GlySEQIDNO:57、Leu-Val-Gly-GlySEQIDNO:58、Met-Val-Gly-GlySEQIDNO:59或Ile-Val-Gly-GlySEQIDNO:60，优选的(AA)m是Gly、Ala或m=0。当m为O时，腺病毒蛋白酶对(AA)n-罗丹明酰胺键的酶切将产生通式Ⅵ的荧光染料。当m不是0时，细胞中腺病毒蛋白酶对(AA)n-(AA)m酰胺键的酶切产生与(AA)m连接的罗丹明。然后细胞内存在的氨肽酶除去(AA)m，产生通式Ⅵ的荧光染料。通式Ⅸ的化合物可用于腺病毒感染的细胞中腺病毒蛋白酶抑制剂的筛选。也能将通式Ⅸ的化合物设计为1型单纯疱疹病毒(HSV-1)蛋白酶的底物。人1型单纯疱疹病毒可引起唇疱疹(感冒疮)。HSV-1蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，担负其自身与ICP35的蛋白水解加工，用于病毒壳体的装配(Gao，M.等人，病毒学杂志(J.Viroi.)68:3702-3712(1994))。已经确定两个蛋白水解位点为蛋白酶内的Ala247和Ser248与Ala610和Ser611(Dilanni，C.L．等人，生物化学杂志268:25449-25454(1993))。最近，发现八氨基酸共有肽LCLASSFSEQIDNO:61能象20-mer成熟位点肽一样被有效切割，而P4到P1序列被确定为HSV-1蛋白酶的最小底物识别区(O'Boyle，D.R．等人，病毒学(Virology)236:338-347(1997))。也已经报道，HSV-1蛋白酶的特异性存在于切割位点的P4-P1'区内(McCann，P.J．等人，病毒学杂志68:526-529(1994))。利用全细胞中氨肽酶的存在，HSV-1蛋白酶的发荧光或荧光底物能设计为只从HSV-1蛋白酶底物的P4-P1侧或从P4-P1和P1'侧两侧掺入氨基酸，用于全细胞测定。对于设计为HSV-1蛋白酶底物的通式Ⅸ的化合物，优选的R1是乙酰基或Cbz，优选的(AA)n是Leu-Val-Leu-AlaSEQIDNO:62，优选的(AA)m是Ser、Ser-Ser或m=0。当m为0时，HSV-1蛋白酶对(AA)n-罗丹明酰胺键的酶切将产生通式Ⅵ的荧光染料。当m不是0时，细胞中HSV-1对(AA)n-(AA)m酰胺键的酶切产生与(AA)m连接的罗丹明。然后细胞内存在的氨肽酶除去(AA)m，产生通式Ⅵ的荧光染料。通式Ⅸ的化合物可用于HSV-1感染的细胞中HSV-1蛋白酶抑制剂的筛选。也能将通式Ⅸ的化合物设计为人巨细胞病毒(HCMV)蛋白酶的底物。HCMV能在先天感染的婴儿、无免疫应答的个体和免疫抑制性癌症或移植患者中引起危及生命的感染。人巨细胞病毒(HCMV)编码一种能切割其自身及HCMV装配蛋白质的蛋白酶，并且是病毒复制所必需的，因此它是治疗性干预的有效目标。HCMV蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，蛋白酶内的两个蛋白水解加工位点确定在Ala256-Ser257(释放位点)和Ala643-Ser644(成熟位点)处。(Sztevens，J.T.等人，欧洲生物化学杂志(Eru.J.Biochem.)226:361-367(1994))。合成了一种发荧光底物，DABCYL-Arg-Gly-Val-Val-Asn-Ala-Ser-Ser-Arg-Leu-Ala-EDANSSEQIDNO:63，发现它能被CMV蛋白酶在Ala-Ser肽键处切开(Holskin，B.P.等人，分析生物化学227:148-155(1995))。最近据报道，用优化的Tbg-Tbg-Asn(NMe2)(Tbg，叔丁基甘氨酸)序列代替对应于酶成熟位点P4-P2残基的Val-Val-Asn序列明显提高了底物对蛋白酶的亲和力。AMC发荧光底物是用包含这些修饰氨基酸的P侧肽序列制备的(Bonneau，P.R.等人，分析生物化学255:59-65(1998))。利用全细胞中氨肽酶的存在，HCMV蛋白酶的发荧光或荧光底物能设计为只从HCMV蛋白酶的P侧或从P侧及P'侧两侧掺入氨基酸，以用于全细胞测定。对于设计为HCMV蛋白酶底物的通式Ⅸ的化合物，优选的R1是乙酰基或Cbz，优选的(AA)n是Val-Val-Asn-AlaSEQIDNO:64、Tbg-Tbg-Asn-AlaSEQIDNO:65，优选的(AA)m是Ser、Ser-Ser或m=0。当m为0时，HCMV蛋白酶对(AA)n-罗丹明酰胺键的酶切将产生通式Ⅵ的荧光染料。当m不是0时，细胞中HCMV对(AA)n-(AA)m酰胺键的酶切产生与(AA)m连接的罗丹明。然后细胞内存在的氨肽酶除去(AA)m，产生通式Ⅵ的荧光染料。通式Ⅸ的化合物可用于HCMV感染的细胞中HCMV蛋白酶抑制剂的筛选。也能将通式Ⅸ的化合物设计为丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶的底物。HCV是胃肠道外传播及散发性非甲非乙型肝炎的主要病原体，它在世界范围内感染了估计5千万人。HCV蛋白酶NS3及其蛋白质激活剂NS4A参与病毒多蛋白的加工，因此NS3/4A蛋白酶复合体是针对HCV的抗病毒治疗的一种有吸引力的目标。HCV蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，已经确定Cys-Ser为切割位点。底物序列之一是Asp-Asp-Ile-Val-Pro-Cys-Ser-Met-Ser-TyrSEQIDNO:66，并发现P1Cys和P3Val是关键的(Zhang，R.等人，病毒学杂志71:6208-6213(1997))。利用全细胞中氨肽酶的存在，HCV蛋白酶的发荧光或荧光底物能设计为从HCV蛋白酶底物的P侧和P'侧两侧掺入氨基酸，用于全细胞测定。对于设计为HCV蛋白酶底物的通式Ⅸ的化合物，优选的R1是乙酰基或Cbz，优选的(AA)n是Asp-Asp-Ile-Val-Pro-CysSEQIDNO:67、AsP-Ile-Val-Pro-CysSEQIDNO:68或He-Val-Pro-CysSEQIDNO:69，优选的(AA)m是Ser-Met-Ser-TyrSEQIDNO:70、Ser-Met-Ser、Ser-Met、Ser或m=0。当m为0时，HCV蛋白酶对(AA)n-罗丹明酰胺键的酶切将产生通式Ⅵ的荧光染料。当m不是O时，细胞中HCV对(AA)n-(AA)m酰胺键的酶切产生与(AA)m连接的罗丹明。然后细胞内存在的氨肽酶除去(AA)m，产生通式Ⅵ的荧光染料。通式IX的化合物可用于HCV感染的细胞中HCV蛋白酶抑制剂的筛选。本发明也涉及通式Ⅵ的新型化合物，它们是罗丹明的衍生物，通过向罗丹明两个氨基之一上引入保护基团R6而获得。通式Ⅵ中的R2HN基提供附着点，用于与潜在酶底物如N端保护肽的羧基反应，形成肽酰胺键。该反应使通式Ⅵ的荧光分子转化为通式Ⅶ-Ⅸ的非荧光分子，并产生一种作为蛋白酶或肽酶的底物的肽-报道分子。通式Ⅶ-Ⅸ中的肽-报道分子酰胺键在生物学条件下是易分裂键。蛋白酶或肽酶对肽-报道分子中易分裂肽-报道分子酰胺键的酶切产生通式Ⅵ或Ⅵ'的荧光化合物。更为重要的是，保护基团中能引入疏水基。该疏水基用来提高底物的膜通透性，并导致细胞内底物的积累，并且提高在被靶向蛋白酶或肽酶酶切后细胞内荧光部分的保留。本发明的新型荧光染料具有通式Ⅵ或其生物学可接受的盐，其中R2-R6如上对于通式Ⅶ所述。优选的R2和R3为氢、甲基或乙基；优选的R4和R5是氢或甲基。本发明的通式Ⅵ的化合物可以以互变异构形式存在，尤其是通式Ⅵ'的开环形式。本发明包括所有互变异构形式包括Ⅵ和Ⅵ'。本发明的优选的发荧光或荧光底物是具有通式Ⅱ的化合物，包括但不限于(Z-WEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:1(Z-YVAD)2-罗丹明110，SEQIDNO:2(Z-DETD)2-罗丹明110，SEQIDNO:4(Z-DEVD)2-罗丹明110，SEQIDNO:5(Z-DEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:6(Z-VEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:7(Z-LETD)2-罗丹明110，SEQIDNO:8(Z-LEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:3(Z-LEVD)2-罗丹明110，SEQIDNO:9(Z-IEPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:23(Z-VEPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:27(Z-SHVD)2-罗丹明110，SEQIDNO:10(Z-DELD)2-罗丹明110，SEQIDNO:11(Z-DGPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:12(Z-DEPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:13(Z-DGTD)2-罗丹明110，SEQIDNO:14(Z-DLND)2-罗丹明110，SEQIDNO:15(Z-DEED)2-罗丹明110，SEQIDNO:16(Z-DSLD)2-罗丹明110，SEQIDNO:17(Z-DVPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:18(Z-DEAD)2-罗丹明110，SEQIDNO:19(Z-DSYD)2-罗丹明110，SEQIDNO:20(Z-ELPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:21(Z-VEID)2-罗丹明110，SEQIDNO:26(Z-IETD)2-罗丹明110，SEQIDNO:24(Z-VD)2-罗丹明110，(Z-TD)2-罗丹明110，(Z-AD)2-罗丹明110，(Z-VAD)2-罗丹明110，(Boc-WEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:1(Boc-YVAD)2-罗丹明110，SEQIDNO:2(Boc-DETD)2-罗丹明110，SEQIDNO:4(Boc-DEVD)2-罗丹明110，SEQIDNO:5(Boc-DEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:6(Boc-VEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:7(Ac-YVAD)2-罗丹明110，SEQIDNO:2(Ac-LETD)2-罗丹明110，SEQIDNO:8(Ac-LEHD)2-罗丹明110，SEQIDNO:3(Ac-DEVD)2-罗丹明110，SEQIDNO:5(Ac-LEVD)2-罗丹明110，SEQIDNO:9(Ac-IEPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:23(Ac-VEPD)2-罗丹明110，SEQIDNO:27(Ac-VD)2-罗丹明110，(Ac-TD)2-罗丹明110，(Ac-AD)2-罗丹明110，(Ac-VAD)2-罗丹明110，(Z-YVAD)2-罗丹明116，SEQIDNO:2(Z-LEHD)2-罗丹明116，SEQIDNO:3(Z-DETD)2-罗丹明116，SEQIDNO:4(Z-DEVD)2-罗丹明116，SEQIDNO:5(Z-YVAD)2-罗丹明19，SEQIDNO:2(Z-LEHD)2-罗丹明19，SEQIDNO:3(Z-DETD)2-罗丹明19，SEQIDNO:4(Z-DEVD)2-罗丹明19，SEQIDNO:5(Z-YVAD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:2(Z-LE(OAM)HD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:3(Z-D(OAM)E(OAM)TD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:4(Z-D(OAM)E(OAM)VD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:5(Z-D(OMe)E(OMe)VD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:5(Z-D(OME)E(OMe)VD)2-罗丹明11O，SEQIDNO:5本发明的优选的发荧光或荧光底物是具有通式Ⅶ的化合物，包括但不限于:N-(Z-WEHD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-LEHD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Z-LEVD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Z-DETD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Z-DEVD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-DEHD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Z-VEHD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Z-LETD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Z-IEPD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-VEPD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:27N-(Z-SHVD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:10N-(Z-DELD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:11N-(Z-DGPD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:12N-(Z-DEPD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:13N-(Z-DGTD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:14N-(Z-DLND)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:15N-(Z-DEED)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:16N-(Z-DSLD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:17N-(Z-DVPD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:18N-(Z-DEAD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:19N-(Z-DSYD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:20N-(Z-ELPD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:21N-(Z-VEID)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:26N-(Z-IETD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:24N-(Z-VD)-N'-乙酰基-罗丹明110，N-(Z-TD)-N'-乙酰基-罗丹明110，N-(Z-AD)-N'-乙酰基-罗丹明110，N-(Z-VAD)-N'-乙酰基-罗丹明110，N-(Boc-WEHD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Boc-YVAD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-LETD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-LEHD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Z-DEVD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-YVAD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-LEVD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Z-LEHD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-WEHD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(AC-DETD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(AC-LETD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(AC-VEHD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(AC-IEPD)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-乙氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-乙氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-己氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-辛氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-癸氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-癸氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:1N-(Ac-YAVD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-癸氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:3N-(AC-LETD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(AC-VEHD)-N-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-DEVD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-YVAD)N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-LEVD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Z-LEHD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-WEHD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N-(甲硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(辛确基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明10，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明11O，SEQIDNQ:9N-(Ac-WEHD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-AT1-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LECD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-LETD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-(二甲基氨基甲酰基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-WEHD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰)基-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Z-YVAD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-LEVD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-WEHD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:1N-(Ac-YVAD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Ac-DEVD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Ac-DEHD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:6N-(Ac-DETD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:4N-(Ac-LEVD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:9N-(Ac-LEHD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:3N-(Ac-LETD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:8N-(Ac-VEHD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:7N-(Ac-IEPD)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:23N-(Z-DECD)-N'-甲磺酰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-YVAD)-N'-甲磺酰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-乙酰基-罗丹明116，SEQIDNO:5N-(Z-YVAD)-N'-甲磺酰基-罗丹明116，SEQIDNO:2N-(Z-DEVD)-N'-乙酰基-罗丹明19，SEQIDNO:5N-(Z-YVAD)-N'-甲磺酰基-罗丹明19，SEQIDNO:2N-(Z-YVAD(OAM))-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:2N-(Z-LE(OAM)HD(OAM))-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:3N(Z-D(OAM)E(OAM)TD(OAM))-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:4N(Z-D(OAM)E(OAM)VD(OAM)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-D(OMe)E(OMe)VD(OAM))-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-D(OMe)E(OMe)VD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:5N-(Z-VD(OAM))-N'-乙酰基-罗丹明110，和N-(Z-E(OAM)VD(OAM))-N'-乙酰基-罗丹明110。本发明的其它优选的发荧光或荧光底物是具有通式Ⅷ的化合物，包括但不限于:N-(Z-WEHDG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Z-YVADG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Z-LEHDG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:73N-(Z-LEVDG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:74N-(Z-DETDG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:75N-(Z-DEVDG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-LETDG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:77N-(Ac-LEHDG)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:73N-(Ac-WEHDG)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-甲氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Z-WEHDGG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:79N-(Z-YVADG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Z-DEVDG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Z-LEVDG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:74N-(Ac-WEHDG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEVDG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(AC-DEVDG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(AC-DEHDG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-癸氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-(己硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-(辛硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADGG)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:142N-(Ac-DEVDG)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-(癸硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(Ac-YVADG)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Ac-DEVDG)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Ac-DEHDG)-N'-(二甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Ac-WEHDG)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:71N-(AC-YVADG)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(AC-DEVDG)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(AC-DEHDG)-N'-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110，SEQIDNO:78N-(Z-DEVDG)-N'-甲磺酰基-罗丹明110，SEQIDNO:76N-(Z-YVADG)-N'-甲磺酰基-罗丹明110，SEQIDNO:72N-(Z-DEVDG)-N'-乙酰基-罗丹明116，SEQIDNO:76N-(Z-YVADG)-N'-甲磺酰基-罗丹明116，SEQIDNO:72N-(Z-DEVDG)-N'-乙酰基-罗丹明19，SEQIDNO:76N-(Z-TVADG)-N'-甲磺酰基-罗丹明19，SEQIDNO:72。本发明的其它优选的发荧光或荧光底物是具有通式Ⅸ的化合物，包括但不限于N-(GP)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(GPG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(GP)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-(GPG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-(GPA)N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-(GP)-N'-己氧羰基-罗丹明110，N-(GPG)-N'-己氧羰基-罗丹明110，N-(GP)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，N-(GPG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，N-(MG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(MA)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(MGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(MGA)-N-辛氧羰基-罗丹明110，N-(MAG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-G-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(MG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-(MA)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-G-N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-(MG)-N'-己氧羰基-罗丹明110，N-(MA)-N'-己氧羰基-罗丹明110，N-G-N'-己氧羰基-罗丹明110，N-(MG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，N-G-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，N-(Boc-LM)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(Ac-LM)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，N-(Boc-LM)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-(Ac-LM)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，N-(Boc-LM)-N'-己氧羰基-罗丹明110，N-(Ac-LM)-N'-己氧羰基-罗丹明110，N-(Boc-LM)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，N-(Ac-LM)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，N-(Ac-SLNFPIV)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:80N-(Ac-SLNFPI)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:81N-(Ac-SLNFP)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:82N-(Ac-LNFPIV)-K'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:83N-(Ac-LNFPI)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:84N-(Ac-LNFP)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:85N-(Ac-RGFP)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:37N-(Z-LNFPIV)-N-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:83N-(Z-LNFPI)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:84N-(Z-LNFP)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:85N-(Z-RGFP)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:37N-(Z-RQANFLG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:31N-(Z-RQANFL)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:86N-(Z-RQANF)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:87N-(Z-RKVLFLD)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:36N-(Z-RKVLFL)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:88N-(Z-RKVLF)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEOIDNO:89N-(Z-ARVLFLG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:90N-(Z-ARVLFL)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:91N-(Z-ARVLF)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:92N-(Z-SQNYFLG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:93N-(Z-SQNYFL)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:94N-(Z-SQNYF)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:95N-(Ac-SLNFPIV)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:80N-(Ac-SLNFPD-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:81N-(Ac-SLNFP)-N-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:82N-(Ac-RGFP)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:37N-(Ac-SLNFPIV)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:80N-(Ac-SLNFPD-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:81N-(Ac-SLNFP)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:82N-(Ac-RGFP)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:37N-(Ac-MRGGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:96N-(Ac-IRGGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:97N-(Ac-LVGGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:98N-(Ac-MVGGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:99N-(Ac-IVGGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:100N-(Ac-LRGGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:101N-(Ac-LRGGA)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:102N-(Ac-LRGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:55N-(Z-LRGGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:101N(Z-LRGGA)-N-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:102N-(Z-LRGG)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:55N-(Ac-LRGGG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:101N-(Ac-LRGGA)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:102N-(Ac-LRGG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:55N-(Ac-LRGGG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:101N-(Ac-LRGGA)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:102N-(Ac-LRGG)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:55N-(Ac-LVLASSS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:103N-(Ac-LVLASS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:104N-(Ac-LVLAS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:105N-(Ac-LVLA)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:62N-(Z-LVLASSS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:103N-(Z-LVLASS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:104N-(Z-LVLAS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:105N-(Z-LVLA)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:62N-(Ac-LVLASS)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:104N-(Ac-LVLAS)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:105N-(Ac-LVLA)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:62N-(Ac-LVLASS)-N'(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:104N-(Ac-LVLAS)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:105N-(Ac-LVLA)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:62N-(Ac-VVNASS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:106N-(Ac-VVNAS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:107N-(Ac-VVNA)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:64N-(Ac-Tbg-Tbg-NASS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:108N-(Ac-Tbg-Tbg-NAS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:109N-(Ac-Tbg-Tbg-NA)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:110N-(Z-Tbg-Thg-NASS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:108N-(Ac-Tbg-Tbg-NAS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:109N-(Ac-Tbg-Tbg-NA)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:110N-(Ac-Tbg-Tbg-NASS)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:108N-(Ac-Tbg-Tbg-NAS)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:109N-(Ac-Tbg-Tbg-NA)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:110N-(Ac-Tbg-Tbg-NASS)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:108N-(Ac-Tbg-Tbg-NAS)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:109N-(Ac-Thg-Thg-NA)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:110N-(Ac-DDIVPCSMST)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:111N-(Ac-DIVPCSMST)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:112N-(Ac-IVPCSMST)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:113N-(Ac-IVPCSMS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:114N-(Ac-IVPCSM)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:115N-(Ac-IVPCS)-N-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:116N-(Ac-IVPC)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:69N-(Z-IVPCSMST)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:113N-(Z-IVPCSMS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:114N-(Z-IVPCSM)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:115N-(Z-IVPCS)-N'-辛氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:116N-(Ac-IVPCSMS)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:114N-(Ac-IVPCSM)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:115N-(Ac-IVPCS)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:116N-(Ac-IVPCSMS)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:114N-(Ac-IVPCSM)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:115N-(Ac-IVPCS)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:116。其中Z是苄氧羰基，BOC为叔丁氧羰基，Ac为乙酰基，Tbg为叔丁基甘氨酸，AM为乙酸基甲基。本发明的优选的新型荧光染料是具有通式Ⅵ的化合物，包括但不限于N-甲酰基-罗丹明110，N-乙酰基-罗丹明110，N-己酰基-罗丹明110，N-辛酰基-罗丹明110，N-癸酰基-罗丹明110，N-十二烷酰基-罗丹明110，N-甲氧羰基-罗丹明110，N-乙氧羰基-罗丹明110，N-丁氧羰基-罗丹明110，N-己氧羰基-罗丹明110，N-辛氧羰基-罗丹明110，N-癸氧羰基-罗丹明110，N-十二烷氧羰基-罗丹明110，N-苄氧羰基-罗丹明110，N-(2-丁氧基乙氧羰基)-罗丹明110，N-(2,5,8-三氧杂癸氧羰基)-罗丹明110，N-(甲硫基)羰基-罗丹明110，N-(乙硫基)羰基-罗丹明110，N-(丁硫基)羰基-罗丹明110，N-(己硫基)羰基-罗丹明110，N-(辛硫基)羰基-罗丹明110，N-(癸硫基)羰基-罗丹明110，N-(十二烷硫基)羰基-罗丹明110，N-甲磺酰基-罗丹明110，N-乙磺酰基-罗丹明110，N-己磺酰基-罗丹明110，N-辛磺酰基-罗丹明110，N-癸磺酰基-罗丹明110，N-十二烷基磺酰基-罗丹明110，N-三氟甲磺酰基-罗丹明110，N-二甲基氨基甲酰基-罗丹明110，N-二乙基氨基甲酰基-罗丹明110，N-(N-甲基-N-己基氨基甲酰基)-罗丹明110，N-(N-甲基-N-辛基氨基甲酰基)-罗丹明110，N-(N-甲基-N-癸基氨基甲酰基)-罗丹明110，N-乙酰基-罗丹明116，N-甲氧羰基-罗丹明116，N-乙氧羰基-罗丹明116，N-辛氧羰基-罗丹明116，N-己氧羰基-罗丹明116，N-苄氧羰基-罗丹明116，N-甲磺酰基-罗丹明116，N-三氟甲磺酰基-罗丹明116，N-辛磺酰基-罗丹明116，N-乙酰基-罗丹明19，N-乙氧羰基-罗丹明19，N-辛氧羰基-罗丹明19，N-甲氧羰基-罗丹明19，和N-甲磺酰基-罗丹明19。典型的芳基是C6-10芳基，包括苯基、萘基、芴基等等，其中任何一种都可以用卤素或烷基取代。典型的烷基是C1-10烷基，包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基及其支链异构体。典型的酰基(烷酰基)是C2-10烷酰基，如乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基等等，及其支链异构体。本发明化合物的典型的生物学可接受的盐包括钠盐、钾盐、铵盐、TRIS等等。本发明的某些化合物可以是互变异构形式，尤其是通式Ⅰ中的y部分。本发明包括所有这些互变异构体。本发明也包括立体异构体、这些立体异构体的外消旋混合物，以及个别的对映体，它们可以按照本领域普通技术人员众所周知的方法分离。本发明的化合物可以用本领域技术人员公知的方法制备。具体地，通式Ⅰ-Ⅲ的化合物能如方案1-5中示例反应所述进行制备。方案1是最低优选的方法，因为用HBr/HOAc去保护引起叔丁氧基和苄氧羰基(Z)的去除，这使下一步偶联反应复杂化。因此，需要叔丁氧基时，必须重新引入。当用N-(9-芴基甲氧羰基)(fmoc)作为N端保护基团时(方案2)，它能用吗啉、哌啶或其它胺碱选择性地去除，而不去除叔丁氧保护基，从而允许其它Z保护的氨基酸或肽的方便引入(参见方案2-4)。最后的Z-保护的化合物能用三氟乙酸(TFA)选择性地去保护，以除去叔丁氧基而不去除Z基。方案1方案2方案3方案4方案5因此，本发明也涉及通式Ⅲ的化合物的制备方法，包括(a)使罗丹明110与N-fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯一起缩合，产生(Fmoc-Asp(OBu-t))2-罗丹明110；(b)除去Fmoc基，得到(Asp(OBu-t))2-罗丹明110；(c)使(Asp(OBu-t))2-罗丹明110与Z-(AA)n缩合，产生(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))2-罗丹明110；及(d)除去OBu-t保护基。在一个优选实施方案中，-(AA)n为WEH、YVA、LEH、DET、DEV、DEH、VEH、LET、SHV、DEL、DGP、DEP、DGT、DLN、DEE、DSL、DVP、DEA、DSY、ELP、VED、IEP或IET。当氨基酸被羧基取代时，它用OBu-t保护基保护，在最后一步除去该保护基。可以使用用于肽合成的任何常规缩合剂进行缩合反应。在一个优选实施方案中，缩合剂是1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)或2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)。该反应的溶剂可以是吡啶或二甲基甲酰胺(DMF)。该反应一般在室温下进行。缩合剂与罗丹明的比例大约为10∶1，受保护的氨基酸或肽与罗丹明或(Asp(OBu-t)2-罗丹明110的比例也是大约10∶1。Fmoc基的去除一般是通过用吗啉、哌啶或其它胺碱的极性非质子溶剂如DMF溶液处理。通常，加入过量的吗啉，并在室温下进行反应。α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧羰基(Ddz)是能用来代替fmoc的另一种N端保护基。因此，能用N-Ddz-L-天冬氨酸β-叔丁酯代替N-fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯。在叔丁氧基存在下，1％的TFA二氯甲烷溶液能选择性地裂解Ddz。OBu-t基可以用三氟乙酸的非质子溶剂如二氯甲烷溶液在室温下去除。具有通式Ⅵ的化合物能如方案6中示例反应所述制备。方案6具有通式Ⅶ-Ⅸ的化合物能如方案7-10中示例反应所述制备。方案7方案8方案9方案10因此，本发明也涉及通式Ⅶ的化合物的制备方法，包括(a)使罗丹明与乙酸酐反应，产生N-乙酰基-罗丹明；(b)使N-乙酰基-罗丹明与N-fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯一起缩合，产生N-(Fmoc-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；(c)除去Fmoc基，得到N-(Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；(d)使N-(Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明与Z-(AA)n缩合，产生N-(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；及(e)除去OBu-t保护基，得到N-(Z-(AA)n-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明；或者备择地(a)使罗丹明与乙酸酐反应，产生N-乙酰基-罗丹明；(b)使N-乙酰基-罗丹明与Z-(AA)n-Asp(OBu-t)缩合，产生N-(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；及(c)除去OBu-t保护基，得到N-(Z-(AA)n-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明。在一个优选实施方案中，-(AA)n为WEH、YVA、LEH、DET、DEV、DEH、VEH、LET、SHV、DEL、DGP、DEP、DGT、DLN、DEE、DSL、DVP、DEA、DSY、ELP、VED、IEP或IET。通式Ⅶ的化合物也能用酰基(烷酰基)氯代替乙酸酐而制备，如乙酰氯、己酰氯、辛酰氯和癸酰氯。能用来代替乙酸酐的其它试剂包括但不限于氨基甲酰氯，如二甲基氨基甲酰氯、二乙基氨基甲酰氯和N-甲基-N-己基氨基甲酰氯；氯甲酸酯，如氯甲酸甲基酯、氯甲酸乙基酯、氯甲酸辛基酯、氯甲酸2-丁氧乙基酯和氯甲酸2,5,8-三氧杂癸基酯；氯硫甲酸酯，如氯硫甲酸甲基酯、氯硫甲酸乙基酯、氯硫甲酸辛基酯；烷基、卤烷基和芳烷基磺酰卤，如甲磺酰氯、辛磺酰氯、三氟甲磺酰氯和甲苯磺酰氯。该反应在碱如(Et)3N、(i-Pr)2-NEt或吡啶的存在下进行。优选的溶剂是DMF。该反应一般在室温下进行。酸酐或酰氯与罗丹明的比例约为1∶1。可以使用用于肽合成的任何常规缩合剂进行缩合反应。在一个优选实施方案中，缩合剂是EDC或EEDQ，反应溶剂为吡啶或二甲基甲酰胺(DMF)。该反应一般在室温下进行。缩合剂与N-乙酰基-罗丹明的比例约为3∶1，受保护氨基酸或肽与N-乙酰基-罗丹明或N-(Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明的比例约为3∶1。在一步反应中使N-乙酰基-罗丹明与一种肽如Z-(AA))n-Asp(OBu-t)缩合产生N-(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明是一种优选的方法。因此，通式Ⅵ的化合物提供了荧光染料，它们能与任何肽或其它结构缩合，用于制备作为蛋白酶或肽酶底物的发荧光或荧光化合物。原则上，也能如下制备通式Ⅷ的化合物，首先使肽与罗丹明缩合产生N-肽-罗丹明，然后使N-肽-罗丹明与乙酸酐或其它酰化剂反应，产生例如N-乙酰基-N'-肽-罗丹明。然而，a)肽通常比酰氯或酐贵得多，b)肽与罗丹明的缩合反应不是一种高效的反应。由于这些原因，优选的是使肽与N-乙酰基-罗丹明连接，而不是使酰基与N-肽-罗丹明连接。一方面，本发明涉及一种方法，用于确定试验底物对试验细胞中参与细胞凋亡级联的酶是否有影响，包括(a)在一定条件下使试验细胞与试验物质及根据本发明的报道化合物相接触，从而使试验物质或者与细胞的外膜受体相互作用，或者被该细胞吸收，而报道化合物被该细胞吸收，和(b)记录试验细胞的荧光，其中与只接触报道化合物而未接触试验物质的对照细胞相比，试验细胞内荧光在数值或波长上的变化表明该试验物质对该酶有影响。能将该方法获得的结果与应用已知可影响参与细胞中细胞凋亡级联的酶的试验化合物所获得的结果相比较，产生试验物质相对效能的量度。能使用的化合物包括参与凋亡级联的酶的公知激活剂和抑制剂。通过直接或间接机制参与凋亡级联的酶的激活剂包括但不限于已知的化疗剂，如依托泊甙(YoonHJ，ChoiIY，KangMR，KimSS，MullerMT，SpitznerJR，ChungIK(1998)，生物化学与生物物理学学报(BiochimBiophysActa)1395:110-120)和阿霉素(GamenS，AnelA，LasierraP，AlavaMA，Martinez-LorenzoMJ，PineiroA，NavalJ(1997)，FEBSLett417:360-364)，它们是拓扑异构酶Ⅱ抑制剂；顺铂(MaldonadoV，Melendez-ZajglaJ，OrtegaA(1997)，突变研究(MutatRes)381:67-75)；苯丁酸氮芥(HickmanJA.(1992)，癌症转移综述(CancermetastasisRev)11:121-139)，它是一种烷化剂；和氟尿嘧啶，一种RNA/DNA抗代谢物(HickmanJA.(1992)，癌症转移综述11:121-139)。当在全细胞中筛选凋亡抑制剂时也能用这些凋亡激活剂诱导细胞凋亡。通过直接或间接机制参与凋亡级联的酶的灭活剂包括但不限于内源蛋白质，包括Bcl-2(JoensuuH，PylkkanenL，ToikkanenS(1994)，美国病理学杂志(Am.J.Pathol.)5:1191-1198)、病毒产生因子p53(MillerLK(1997)，细胞生理学杂志(J.CellPhysiol.)173:178-182)和合成的胱天肽酶抑制剂Z-VAD-FMK(AnS，KnoxKA(1996)，FEBSLett.386:115-122)。本发明尤其涉及具有通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ的报道化合物在全细胞测定中的应用，该测定法使用已被诱导经历凋亡的全细胞或组织标本，来筛选直接或间接抑制参与细胞凋亡(程序性细胞死亡)的酶的化合物。应用具有通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ的化合物的这些筛选试验预计将导致新药物或已知药物的新用途的发现，这些药物能在发生细胞、组织或完整器官损失的多种临床条件下减缓或阻断细胞死亡。具有通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ的报道化合物和本发明的筛选试验能用来鉴定在多种局部缺血和兴奋中毒条件下减少或防止神经系统(脑、脊髓和周围神经系统)中细胞死亡的药物，包括但不限于中风引起的病灶性局部缺血和心搏停止引起的完全性缺血。也能用该筛选试验鉴定能减少或防止神经系统中细胞死亡的化合物，该细胞死亡是由于创伤性损伤(如头损伤或脊髓损伤)、病毒感染或辐射诱导的神经细胞死亡(例如，癌症放射治疗的副作用)或环境毒性(例如，某些卤代烃类引起的)。也能用该筛选试验鉴定可用于减少或防止多种神经变性疾病中细胞死亡的细胞死亡抑制剂，这些疾病包括但不限于阿尔茨海默病、huntington舞蹈病、帕金森氏症、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化和脊髓延髓萎缩。能用本发明的筛选试验鉴定在可能引起心肌死亡的任何疾病中防止细胞死亡的化合物。这包括心肌梗死、充血性心力衰竭和心肌症。该筛选试验的一种特殊用途是鉴定能减少或防止某些心脏病毒感染中发生的心肌细胞死亡的化合物。能用本发明的筛选试验鉴定可防止视网膜神经元细胞死亡的化合物，这种细胞死亡发生于与眼压增高有关的疾病(如青光眼)中或与老化过程有关的视网膜疾病(如年龄相关的黄斑变性)中。也能用该试验鉴定可治疗遗传性退行性视网膜疾病如色素性视网膜炎的化合物。也能用本发明的筛选试验鉴定如下的细胞死亡抑制剂，它们能用来减少或防止免疫系统中细胞的成熟前死亡，尤其可用于鉴定在治疗免疫缺陷疾病如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、重度联合免疫缺陷综合征(SCIDS)及相关疾病中有用的抑制剂。也能用该筛选试验鉴定能用来治疗辐射诱导的免疫抑制的细胞死亡抑制剂。也能用本发明的筛选试验鉴定在器官移植过程中有用的药物。人器官及组织的移植是一种对器官衰竭的常用疗法。然而，在移植过程中，供体器官或组织具有细胞死亡的危险，因为它在植入宿主之前缺乏正常的血液供应。这种局部缺血状态能用细胞死亡抑制剂来治疗，方法是将其输入供体器官或组织中，或直接向器官/组织贮存介质中加入细胞死亡抑制剂。这类细胞死亡抑制剂能用本发明所述的筛选试验鉴定。移植后，也可用细胞死亡抑制剂减少或防止供体器官/组织中的细胞死亡，以保护其免于通过触发细胞凋亡而杀伤其目标的宿主免疫细胞的作用。本发明所述的筛选试验能用来鉴定可用于保护移植器官免受排斥的细胞死亡抑制剂。也能用细胞死亡抑制剂的细胞保护作用防止体外受精过程使用的人或动物精子和卵子的死亡。这些抑制剂能在收获过程中使用，并且也能包含于贮存介质中。利用本发明所述的筛选试验能鉴定在受精方法中有用的细胞死亡抑制剂。哺乳动物细胞系和酵母细胞通常用来产生大量重组蛋白质(如抗体、酶或激素)，供工业或医药应用。这些细胞系中某些的寿命由于生长条件、所表达重组分子的性质(某些是毒性的)及其它未知因素而受限制。生长培养基中含有细胞死亡抑制剂能延长工业细胞系的寿命。可用于延长细胞系寿命的细胞死亡抑制剂能用本发明所述的筛选测定法来鉴定。负责毛发生长及损失的因素大部分未知。然而有一些证据表明，毛囊退化(称为退化期毛发)可能至少部分地是由于细胞凋亡。因此，细胞死亡抑制剂能用来治疗由于多种病症而发生的毛发损失，包括但不限于男性型秃发、辐射诱导或化学治疗诱导的毛发损失，和情绪应激引起的毛发损失。也有证据表明细胞凋亡可能在毛色的损失中起作用。因此，细胞死亡抑制剂也能用于治疗毛发过早变灰的病症。可用于治疗或预防毛发损失或毛发变灰的细胞死亡抑制剂能用本发明所述的筛选测定法来鉴定。暴露于高水平的射线、热或化学药品后能发生皮肤上皮细胞的死亡。细胞死亡抑制剂能用来减少或防止此类皮肤损伤。在一种具体应用中，能以软膏的形式施用细胞死亡抑制剂，来治疗对日光的急性过度暴露，并防止皮肤的起泡和脱皮。可用于治疗或防止皮肤细胞死亡的细胞死亡抑制剂能用本发明所述的筛选测定法来鉴定。本发明的另一重要方面在于具有通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ的报道化合物在全细胞测定中的应用，该方法使用活的或死的全细胞或组织标本，用于筛选直接或间接刺激参与细胞凋亡的酶的化合物。因此，这些应用具有通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ的化合物的筛选试验预计将导致新药的发现，或发现在如癌症、肿瘤及细胞增生等疾病中用作抗癌剂的已知药物的新用途。可利用筛选试验发现的化合物和此处所述的试剂可用于治疗癌症、肿瘤或组织增生，包括但不限于脑、周围神经系统、眼、耳、鼻、口、扁桃体、牙齿、食道、肺、心脏、血液、血管、骨髓、淋巴结、胸腺、脾、免疫系统、肝、胃、肠道、胰、内分泌腺及组织、肾、膀胱、生殖器及生殖腺、关节、骨和皮肤的癌症或肿瘤。本发明的另一重要方面在于具有通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ的报道化合物在全细胞测定中的应用，该方法使用酵母及其它真菌和细菌为抗真菌或抗细菌药物筛查化合物文库，这些药物通过直接或间接地诱导胱天肽酶级联或在这些细胞中参与细胞凋亡的其它酶而起作用。本发明的另一重要方面在于使用具有通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ和Ⅷ的报道化合物监测对患者施用的治疗剂或治疗的治疗效果，该治疗旨在减少、预防或治疗凋亡性细胞死亡是其原因或结果的疾病。本发明的另一重要方面在于用具有通式Ⅸ的报道化合物在HIV感染细胞中筛选HIV蛋白酶抑制剂，包括(a)在一定条件下使试验细胞与试验物质和根据本发明的报道化合物相接触，从而使该试验物质或者与外膜受体相互作用，或者被该细胞吸收，而报道化合物被该细胞吸收，和(b)记录试验细胞的荧光，其中与只接触报道化合物、未接触试验物质的对照细胞相比，试验细胞内荧光在数值或波长上的变化表明该试验物质对HIV蛋白酶具有抑制作用。本发明的再另一重要方面在于用具有通式Ⅸ的报道化合物诊断HIV感染，包括(a)在一定条件下使取自怀疑有HIV感染的个体的试验细胞与根据本发明的报道化合物相接触，从而使报道化合物被该细胞吸收，和(b)记录试验细胞的荧光，其中与接触报道化合物的对照细胞相比，试验细胞内荧光在数值或波长上的变化表明试验细胞已被HIV病毒感染，并且该个体已感染了HIV。应用与在HIV感染细胞中筛选HIV蛋白酶抑制剂相同的方法，能用本发明具有通式Ⅸ的报道化合物在腺病毒感染的细胞中筛选腺病毒蛋白酶抑制剂。本发明具有通式Ⅸ的报道化合物也能用来在1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染的细胞中筛选HSV-1蛋白酶抑制剂。也能用该报道化合物在人巨细胞病毒(HCMV)感染的细胞中筛选HCMV蛋白酶抑制剂；在丙型肝炎病毒(HCV)感染的细胞中筛选HCV蛋白酶抑制剂；在T细胞中筛选DPP-IV抑制剂；以及在内皮细胞中筛选2型甲硫氨酸氨肽酶(MetAP-2)抑制剂。另外，应用与HIV感染的诊断相同的方法，也能用本发明具有通式Ⅸ的报道化合物诊断腺病毒、1型单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒和丙型肝炎病毒。本发明范围内的组合物包括所有这样的组合物，其中以能有效实现预期目标的量包含本发明的发荧光或荧光化合物。虽然其量可能随测定法不同而不同，但对每种成分有效量最佳范围的确定在本领域的技术之中。一般地，发荧光或荧光底物化合物可应用于来源于哺乳动物如人或其它动物的细胞或细胞系，方法是使细胞或含有细胞的组织与大约0.01纳摩尔到大约1摩尔浓度的发荧光或荧光底物一起温育，或与其等量的盐或前报道分子的生理学相容缓冲液温育。这些缓冲液包括细胞生长培养基，它是一种用于白血病衍生的癌细胞的实例，为含或不含10％胎牛血清的RPMI-1640。其它公知的细胞温育缓冲液可能包括用磷酸盐或HEPES缓冲的等渗溶液。本领域的一名普通技术人员能仅用常规实验确定其它合适的缓冲液。细胞可能来源于任何器官或器官系统，希望能利用筛选试验发现能用于治疗凋亡介导疾病的药物，这些疾病包括例如神经元细胞死亡、心脏疾病、肝脏疾病、视网膜疾病、肾、关节及骨疾病、免疫系统疾病、癌症、肿瘤争组织增生，等等。合适的增溶剂可用于向组织、细胞或细胞系递呈本发明的发荧光或荧光化合物。合适的增溶剂包括水溶形式的活性化合物水溶液，例如，水溶性盐和碱性溶液。另外，可以向细胞或组织递呈为适当油状悬液的化合物悬液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(这些化合物在PEG-400中可溶)或二甲亚砜(DMSO)或其它合适的增溶剂。任选地，该悬液或溶液也可含有稳定剂。任选地，脂质体或去污剂中报道分子的电穿孔或呈递可用来提高发荧光或荧光报道分子的细胞通透性。一般地，细胞与本发明的报道分子和试验物质接触大约30分钟到大约5小时，最优选地大约1小时。本发明也涉及本发明的化合物的前报道分子衍生物。这些前报道分子衍生物包括可由内源酶原位酶切产生通式Ⅰ-Ⅲ、Ⅴ和Ⅶ-Ⅸ的化合物的化合物。这些前报道分子衍生物包括含羧基氨基酸残基如Asp和Glu的低级烷基酯。特别优选的前报道分子衍生物包括含Asp和Glu的化合物的甲酯和乙酸基甲(AM)酯。下列实施例证明了本发明在测定胱天肽酶活性及参与细胞及组织中凋亡的其它酶的活性方面的有效性。这些实施例也证明了本发明在能用来发现细胞凋亡增强剂或抑制剂的药物筛选试验中的有效性。这些实施例用来说明而不是限制本发明的方法及组合物。在体外测定、药物筛选方法或诊断方法中常常遇到对多种条件及参数的其它适当修改和改进，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，都落在本发明的精神与范围之内。实施例1[Fmoc-Asp(OBu-t]2-罗丹明1100℃下，向溶解于二甲基甲酰胺与吡啶无水1∶1混合物(30mL)的Fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯(4.9g，11.91mmol)溶液中加入EDC(2.28g，11.91mmol)。将该溶液搅拌45分钟，然后加入罗丹明110HCl(0.44g，1.19mmol)在相同溶剂(2mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物60小时，并在真空中浓缩为大约10mL。然后用100mL水稀释残余物，并用乙酸乙酯(3×50mL)抽提。用1NHCl(2×50mL)和水(2×50mL)洗涤有机相。该溶液在Na2SO4上干燥并浓缩，产生粗制品，通过柱层析(CH2Cl2/EtOAc10∶1)纯化，得到0.89g(67％)为无色固体的标题化合物，熔点为156-158℃。1HNMR(CDCl3):δ8.75(bs，2H),8.02(d,J=9.3Hz,2H),7.80-6.70(m,26H),6.12(bs,2H),4.64(bs,2H),4.46(d,J=6.8Hz,4H),4.22(t,J=6.8Hz,2H),2.82(m,4H),1.45(s,18H).实施例2[Asp(OBu-t)]2-罗丹明1102HCl将预冷的DMF/吗啉溶液(3mL，1∶1)逐滴加入搅拌的[Fmoc-Asp(OBu-t)]2-罗丹明110(150mg，0.13mmol)二甲基甲酰胺溶液(3mL)中。搅拌该溶液20分钟，倒入冰水中(100mL)，并用乙酸乙酯(2×100mL)抽提。用水(3×100mL)洗涤有机相，在Na2SO4上干燥。向该溶液中加入1NHCl的醚溶液(0.39mL)，浓缩后得到一种红色固体。收集该红色固体，溶解于甲醇(1mL)中，用乙醚(50mL)沉淀，得到为红色固体的标题化合物(65mg，77％)，熔点为200℃(分解)。实施例3[Z-Ala-Asp(OBu-t)]2-罗丹明1100℃下苄氧羰基-L-丙氨酸(376mg，1.69mmol)、EDC(258mg，1.35mmol)和[Asp(OBu-t)]2-罗丹明1102HCl(50mg，0.072mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液(10mL)获得63mg(86％)固体标题化合物，熔点为124-126℃。1HNMR(CDCl3):δ8.85(d,2H),7.90(m,2H),7.60(m,4H),7.32(m,10H),7.10(m,2H),6.68(m,2H),5.20(s,2H),5.10(d，4H),4.90(s,2H),4.18(m,2H),2.82(m,4H),1.42(m,24H).实施例4(Z-Ala-Asp)2-罗丹明110向冷却(0℃)的[Z-Ala-Asp(OBu-t)]2-罗丹明110(41mg，0.038mmol)二氯甲烷溶液(5mL)中加入50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(16mL)。溶液变为橙色，在室温下搅拌3小时。除去溶剂，用快速柱层析(EtOAc/CF3CO2H=20∶0.5)纯化粗制品，得到34mg(91％)标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.02(d,J=8.1Hz,1H),7.85(s,2H),7.73(t,J=7.5Hz,2H),7.34-6.60(m,15H).5.08(d,4H).4.05(m,2H),2.95(m,4H),1．38(d,J=6.4Hz,6H).实施例5[Z-Asp(OBu-t)]2-罗丹明1100℃下苄氧羰基-L-天冬氨酸β-叔丁酯(4.41g,13.63mmol)、EDC(2.61g，13.63mmol)和罗丹明110HCl(0.50g,1.36mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液(40mL)获得1.09g(82％)为无色固体的标题化合物，熔点为127-129℃。1HNMR(CDCl3):δ8.75(bs,2H),8.06(d,J=6.3Hz,2H),7.68-7.56(m,4H),7.40-6.60(m,15H),6.12(bs,2H),5.16(s,4H),4.62(bs,2H),2.97(dd,J1=17.1Hz,J2=33Hz,2H),2.69(dd,J1=17．3Hz,J=6.9Hz,2H),1.44(s,18H).实施例6(Asp)2-罗丹明1102HBr将预冷的30％HBr醋酸溶液(5mL)逐滴加入[Z-Asp(OBu-t)]2-罗丹明110(200mg，0.21mmol)的醋酸搅拌溶液(2mL)中。在室温下搅拌该溶液1小时，然后在真空中浓缩。向残余物中加入100mL无水乙醚，产生红色沉淀，离心后分离该沉淀，得到118mg(78％)的固体，熔点为130℃。1HNMR(DMSO-d6):δ10.81(s,2H),8.35(bs,6H),8.05-6.79(m,10H),4.25(bs,2H),2.96(m,4H).实施例7(Z-Val-Asp)2-罗丹明1100℃下苄氧羰基-L-缬氨酸(628mg，25mmol)、EDC(383mg，2mmol)和(Asp)2-罗丹明1102HBr(72mg，0.1mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液(12mL)获得38mg(37％)标题化合物，熔点为169-171℃。1HNMR(DMSO):δ8.70(d,2H),8.04(d,J=7.5Hz,1H),7.80(m,2H),7.48-7.20(m,11H),7.05(m,2H),5.02(bs,4H),4.70(m,2H),3.85(t,2H),3.20(m,2H),2.60(m,2H),2.05(bs,2H),0.85(t,12H).实施例8[Z-Val-Ala-Asp(OBu-t)]2-罗丹明1100℃下苄氧羰基-L-缬氨酸-L-丙氨酸(200mg，0.62mmol)、EDC(110mg，0.57mmol)和[Asp(OBu-t)]2-罗丹明1102HCl(31mg，0.043mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液获得45mg(85％)标题化合物，熔点为85-87℃。1HNMR(CDCl3):δ9.10(bs,1H),8.90(bs,1H),8.80(d,1H),7.80-6.60(m,19H),5.42(bs,2H),5.10(bs,4H),4.90(s,2H),4.00(d,2H),2.90(m,4H),2.12(m,2H),1.35(s,18H),1.30(d,J=6.4Hz,6H),0.92(m,12H).实施例9(Z-Val-Ala-Asp)2-罗丹明1100℃下[Z-Val-Ala-Asp(OBu-t)]2-罗丹明110(28mg,0.022mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(30mL)获得23mg(88％)标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.00(s,1H),7.92(bs,1H),7.86(bs,1H),7.70(m,2H),7.40-7.21(m,13H),6.70(s,1H),6.68(s,1H),5.08(d,4H),4.22(m,2H),3.90(m,2H),2.92(m,4H),2.06(m,2H),1.34(d,J=6.4Hz,6H),0.95(m,12H).实施例10[Z-Tyr-Val-Ala-Asp(OBu-t)]2-罗丹明110SEQIDNO:20℃下苄氧羰基-L-Tyr-L-Val-L-Ala(339mg，0.70mmol)、EDC(122mg，0.64mmol)和[Asp(OBu-t)]2-罗丹明1102HCl(39mg，0.058mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液获得61mg(65％)标题化合物，熔点为155-157℃。1HNMR(CD3OD):δ8.02-6.60(m,28H),5.02(bs,4H),4.92(t,2H),4,80(t,2H),4.38(m,2H),4.22(n,2H),3.05-2.62(m,8H),2.02(m,2H),1.42(s,18H),1.32(d,J=6.6Hz,6H),0.92(m,12H).实施例11(Z-Tyr-Val-Ala-Aspt)2-罗丹明110SEQIDNO:20℃下[Z-Tyr-Val-Ala-Asp(OBu-t)]2-罗丹明110SEQIDNO:2(47mg，0.029mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(30mL)获得36mg(82％)标题化合物，熔点为115℃。1HNMR(CD3OD):δ8.02(bs,2H),7.82(bs,2H),7.70(m,2H),7.40-6.60(m,22H),5.02(bs,4H),4.80(m,2H),4.38(m,2H),4.22(m,2H),4.10(m,2H),3.10-2.60(m,6H),2.06(m,2H),1.36(d,J=7.2Hz,6H),0.91(d,J=7.5Hz,12H).实施例12N-乙酰基-罗丹明1100℃下罗丹明110(500mg，1.36mmol)的DMF溶液(20mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(176mg，1.36mmol)，然后向上述溶液中逐滴加入乙酸酐(167mg，1.64mmol)。在室温下搅拌反应溶液24小时，然后用100mL水稀释，并用乙酸乙酯(3×50mL)抽提。用水(2×100mL)洗涤有机相，在Na2SO4上干燥并浓缩得到粗制品，通过柱层析(己烷/EtOAc1∶1)纯化得到210mg(41％)为无色固体的标题化合物，熔点为179℃(分解)。Rf=0.36(EtOAc/CH2Cl2=1∶1).1HNMR(CDCl3):δ8.00(d,J=6.7Hz,1H),7.78-7.52(m,4H),7.14(d,J=6.7Hz,1H),6.93(d,J=6.7Hz,1H),6.64(d,J=7.9Hz.1H),6.54-6.28(m,3H),3.86(bs,2H)，2.15(s,3H).实施例13N-[Fmoc-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明1100℃下Fmoc-L-天冬氨酸叔丁酯(739mg，1.79mmol)、EDC(302mg，1.57mmol)和N-乙酰基-罗丹明110(160mg，0.43mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液(8mL)获得276mg(84％)为无色固体的标题化合物。Rf=0.75(EtOAc/CH2Cl2=1∶1).1HNMR(CDCl3):δ8.72(bs,1H),8.02(d,J=6.3Hz,1H),7.80-6.68(m,17H),6.12(bs,1H),4.63(bs,1H),4.47(d,J=5.5Hz,2H),4.22(t,J=7.2Hz,1H),2.96(m,1H),2.68(m,1H),2.20(s,3H),1.46(s,9H).实施例14N-[Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110由预冷的DMF/吗啉溶液(3mL，1∶1)和N-[Fmoc-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110(100mg，0.13mmol)获得固体标题化合物(67mg，95％)，熔点为131-133℃。1HNMR(CDCl3):δ9.73(s,1H),8.01(d,J=7.2Hz,1H),7.72(s,1H),7.70-6.65(m,9H),3.80(m,1H),2.88(d,J=16.5Hz,1H),2.70(m,1H),2.17(s,3H),1.90(bs,2H),1.44(s,9H).实施例15N-[Z-Ala-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明1100℃下苄氧羰基-L-丙氨酸(43mg，0.19mmol)、EDC(37mg，0.19mmol)和N-Asp(OBu-t)-N'-乙酰基-罗丹明110(30mg，0.055mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液获得38mg(92％)固体标题化合物，熔点为138-140℃。Rf=0.42(EtOAc/己烷4∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.82(bs,1H),8.01(d,J=6.6Hz.1H),7.70-6.67(m,14H),5.20(m,1H),5.16(bs,2H),4.90(m,1H),4.20(m,1H),3.12(m,1H),2.61(m,1H),2.19(s,3H),1.56(bs,3H),1.43(s,9H).实施例16N-(Z-Ala-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明-1100℃下N-[Z-Ala-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110(38mg，0.052mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(3mL)获得34mg(96％)标题化合物。Rf=0.6(10mLEtOAc加5滴CF3CO2H)。1HNMR(CD3OD):δ8.02(d,J=7.5Hz,1H),7.80-6.69(m,14H),5.10(bs,2H),2.92(m,2H),2.14(s,3H),1.37(d,J=7.5Hz,3H).实施例17N-[Z-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明1100℃下苄氧羰基-L-缬氨酸(49mg，0.19mmol)、EDC(37mg，0.19mmol)和N-Asp(OBu-t)-N'-乙酰基-罗丹明110(30mg，0.055mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液(4mL)获得40mg(94％)固体标题化合物，熔点为155-157℃。Rf=05(EtOAc/己烷4∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.87(s,1H),8.01(d,J=7.5Hz,1H),7.64-6.66(m,14H),5.32(bs,1H),5.11(d,J=3.3Hz,2H),4.92(m,1H),4.02(m,1H),3.06(d,J=15.6Hz,1H),2.62(m,J=15.8Hz,1H),2.20(s,3H),1.43(s,9H),1.26(bs,1H),0.96(m,6H).实施例18N-(Z-Val-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明1100℃下N-[Z-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110(40mg，0.051mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(3mL)获得37mg(99％)标题化合物。Rf=0.6(10mLEtOAc加5滴CF3CO2H)。1HNMR(CD3OD):δ8.01(d,J=7.5Hz,1H),7.78-6.60(m,14H),5.08(d,J=6.5Hz,2H),4.83(m,1H),3.89(d,J=5.7Hz,1H),3.02(m,1H),2.85(m,1H),2.14(s,3H),1.25(m,1H),0.97(bs,6H).实施例19N-[Z-Val-Ala-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明1100℃下苄氧羰基-L-缬氨酸-L-丙氨酸(63mg，0.019mmol)、EDC(37mg，0．19mmol)和N-Asp(OBu-t)-N'-乙酰基-罗丹明110(30mg，0.052mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液获得40mg(97％)标题化合物，熔点为101-103℃。Rf=0.35(EtOAc/己烷6∶1)。1HNMR(CDCl3):δ7.99(d,J=8.4Hz),7.80-6.62(m,14H),5.42(m,1H),5.11(bs,2H),4.90(m,1H),4.40(bs,1H),4.08(m,1H),3.68(bs,2H),3.50(m,1H),2.90(m,2H),2.16(bs,3H),1.41(s,9H),1.26(d,J=6.3Hz,3H),1.25(m,1H),0.93(m,6H).实施例20N-(Z-Val-Ala-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明1100℃下由N-[Z-Val-Ala-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110(36mg，0.043mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(4mL)获得35mg(100％)标题化合物。Rf=0.4(10mLEtOAc加4滴CF3CO2H)。1HNMR(CD3OD):δ8.02(d,J=5.7Hz,1H),7.95-7.12(m,12H),6.71(s,1H),6.68(s,1H),5.09(bs,2H),4.82(m,1H),4.25(m,1H),3.88(m,1H),3.64(bs,1H),2.94(m,2H),2.14(s,3H),1.30(d,J=6.0Hz,3H),0.95(d,J=6.9Hz,6H).实施例21N-[Z-Tyr-Val-Ala-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:20℃下苄氧羰基-L-酪氨酸-L-缬氨酸-L-丙氨酸(119mg，0.25mmol)、EDC(47mg，0.25mmol)和N-Asp(OBu-t)-N'-乙酰基-罗丹明110(30mg，0.055mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液获得50mg(95％)标题化合物。Rf=0.5(EtOAc).1HNMR(CD3OD):δ8.02(d,J=7.8Hz,1H),7.82-6.58(m,18H),4.90(m,2H),4.35(m,1H),4.24(m,1H),4.08(m,1H),2.93(m,1H),2.73(m,1H),2.13(s,3H),1.43(s,9H),1.37(d,J=7.2Hz,3H),1.29(bs,1H),0.91(m,6H).实施例22N-(Z-Tyr-Val-Ala-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:20℃下N-[Z-Tyr-Val-Ala-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:2(49mg，0.049mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(4mL)获得42mg(89％)标题化合物。Rf=0.62(10mLEtOAc加5滴CF3CO2H)。1HNMR(CD3OD):δ8.00(d,J=7.2Hz,1H),7.84-6.56(m,18H),4.99(bs,2H),4.80(m,1H),4.32(m,1H),4.23(m,1H),4.10(m,1H),2.97(m,2H),2.13(s,3H),1.37(d,J=6.9Hz,3H),1.23(m,1H),0.90(m,6F).实施例23N-[Z-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:50℃下苄氧羰基-L-Asp(OBu-t)-L-Glu(OBu-t)-L-Val-L-Asp(OBu-t)(262mg,0.34mmol)、EDC(65mg，0.34mmol)和N-乙酰基-罗丹明110(30mg，0.08mmol)的1∶1无水DMF/吡啶溶液(4mL)获得73mg(81％)标题化合物，熔点为127-129℃。Rf=0.69(EtOAc/CH2Cl2=1∶1).1HNMR(CDCl3):δ9.05(s,1H),8.79(d,J=10.8Hz,1H),8.38(bs,1H),8.01-6.65(m,15H),6.10(m,1H),5.14(m,2H),4.92(bs,1H),4.52(m,1H),4.42(m,1H),4.18(m,1H),3.92(m,1H),3.10-2.64(m,4H),2.48(m,2H),2.17(bs,3H),1.40(m,27H),0.99(bs,6H).实施例24N-(Z-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:50℃下N-[Z-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:5(49mg，0.043mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(5mL)获得38mg(92％)标题化合物。Rf=0.52(10mLEtOAc加5滴CF3CO2H)。1HNMR(CD3OD):δ8.04-6.63(m,15H),5.05(m,2H),4.50(m,1H),4.40(m,1H),4.05(m,1H),3.93(d,J=7.9Hz,1H),3.10-2.61(m,4H),2.37(m,2H),2.13(s,3H),0.97(m,6H).实施例25N-乙氧羰基-罗丹明110-50℃下向溶解于二甲基甲酰胺的罗丹明110(3.00g,8.18mmol)溶液(140mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(1.27g，1.2mmol)，然后向上述溶液中逐滴加入氯甲酸乙酯(1.07mg，9.81mmol)。使反应溶液缓慢升温至室温，持续搅拌5小时。然后用200mL冰水稀释，并用乙酸乙酯(3×50mL)抽提。用盐水(3×100mL)洗涤有机相，在Na2SO4上干燥并浓缩产生粗制品，通过柱层析(己烷/EtOAc3∶1)纯化得到1.31g(40％)为无色固体的标题化合物。Rf=0.4(EtOAc/己烷=2∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.00(d,J=6.9Hz,1H),7.65-7.50(m,4H),7.15(d,J=7.2Hz,1H),6.88-6.32(m,8H),4.24(q,J=7.2Hz,2H),3.92(bs,2H),1.33(t,J=7.2Hz,3H).实施例26N-[Cbz-Va1-Asp(OBu-t)]-N'-乙氧羰基-罗丹明110由Cbz-Val-Asp(OBu-t)(197mg,0.47mmol)、EDC(89.53mg，0.47mmol)和N-乙氧羰基-罗丹明110(47mg，0.12mmol)(如实施例1所述)获得47mg(50％)固体标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ9.04(bs,1H),8.00(d,J=6.9Hz,1H),7.82-6.62(m,15H),5.30(bs,1H),5.20-5.11(m,2H),4.98(m,1H),4.23(q,J=6.9Hz,2H),3.74(t,1H),3.15(d,J=16.5Hz,1H),2.59(m,1H),2.10(m,1H),1.45(s,9H),1.32(t,J=6.9Hz,3H),1.01(m,6H).实施例27N-(Cbz-Val-Asp)-N'-乙氧羰基-罗丹明110由N-[Z-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙氧羰基-罗丹明110(20mg，0.025mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(2mL)获得15mg(80％)标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.02(d,J=6.6Hz,1H),7.86-6.59(m,14H),5.10(m,2H),4.97(m,1H),4.20(q,J=6.9Hz,2H),3.77(d,J=8.1Hz,1H),3.04(m,1H)，2.76(m,1H),2.00(m,1H),1.32(t.J=7.2Hz,3H),1.02(m,6H).实施例28N-[Cbz-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5由Cbz-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)SEQIDNO:5(374mg，0.48mmol)、EDC(92mg，0.48mmol)和N-乙氧羰基-罗丹明110(48.28mg，0.12mmol)(如实施例1所述)获得81mg(58％)固体标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ9.02(bs,1H),8.80(d,1H),8.00-6.78(m,15H),6.18-6.02(m,1H),5.13(bs,2H),4.94(bs,1H),4.60(bs,1H),4.44(bs,1H),4.22(m,2H),3.89(m,1H),3.15-2.00(m,8H),1.46-1.31(m,27H),1.26(m,1H),1.05-0.98(m,9H).实施例29N-(Cbz-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5由N-[Z-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5(100mg，0.086mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(3mL)(如实施例4所述)获得85mg(99％)标题化合物。Rf=0.5(10mLEtOAc加5滴CF3CO2H)。1HNMR(CD3OD):δ8.02-6.63(m,15H),5.08-5.04(d,2H),4.48-3.92(m,6H),3.10-1.95(m,8H),1.31(t,J=7.2Hz,3H),1.05-0.96(m,9H).实施例30N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(0Bu-t)]-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5由Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)SEQIDNO:5(307.6mg，0.45mmol)、EDC(86mg，0.45mmol)和N-乙氧羰基-罗丹明110(60mg，0.15mmol)(如实施例1所述)获得128mg(80％)固体标题化合物。Rf=0.35(EtOAc/CH2Cl2=1∶1).1HNMR(CDCl3):δ9.00(d,J=7.5Hz),8.80-8.54(m,2H),8.05-6.90(m,9H),6.72(s,1H),6.69(s,1H),4.93-4.02(m,6H),3.09-2.30(m,6H),2.10(s,3H),2.05(m,2H),1.48-1.30(m,29H),1.06-0.96(m,6H).实施例31N-(Ac-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5由N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5(90mg，0.084mmol)和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(2mL)获得65mg(86％)标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.12-7.26(m,9H),7.2l(d,J=7.2Hz,1H),7.08-7.05(m,1H),6.79-6.64(m,2H),4.67(m,1H),4.40(m,1H),4.20(q,J=6.9Hz,2H),4.07-3.52(m,2H),3.07-2.68(m,4H),2.38(m,2H),2.13(m,2H),1.98-1.94(t,3H),1.32(t,J=6.9Hz,3H),1.04-0.95(m,6H).实施例32N-辛氧羰基-罗丹明110由罗丹明110(500mg，1．36mmol)、N,N-二异丙基乙胺(351.6mg，2.76mmol)和氯甲酸辛酯(316mg，1.64mmol)(如实施例25所述)获得182mg(28％)为无色固体的标题化合物。Rf=0.7(EtOAc/己烷=1∶1)。1HNMR(CDCl3):δ7.99(d,J=7.2Hz,1H),7.65-7.56(m,2H),7.52(bs,1H),7.15(d,J=7.5Hz,1H),6.88-6.32(m,6H),4.17(t,J=6.6Hz,2H),3.9(2H),1.68(m,2H),1.42-1.26(m,8H),0.89(t,J=6.3Hz,3H).实施例33N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-辛氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5由Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)SEQIDNO:5(123.7mg，0.18mmol)、EDC(34.5mg，0.18mmol)和N-辛氧羰基-罗丹明110(29mg,0.06mmol)(如实施例1所述)获得43mg(62％)固体标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ9.0l-8.53(m,3H),8.07-7.99(m,1H),7.77-6.78(m,9H),6.72(s,1H),6.69(s,1H),4.93(m,1H),4.76-4.64(m,1H),4.39(m,1H),4.16(m,2H),4.06(m,1H),3.08-2.02(m,9H),2.10(s,3H),1.47-1.29(m,39H),1.05-0.96(m,6H),0.88(t,J=5.7Hz,3H).实施例34N-(Ac-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-辛氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5由N-[Z-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-辛氧羰基R-110SEQIDNO:5和50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(2mL)获得16.5mg(100％)标题化合物。Rf=0.46(10mLEtOAc与5滴CF3CO2H)。1HNMR(CD3OD):δ8.02-7.04(m,8H),6.79-6.64(m,2H),4.67(m,1H),4.40(m,1H),4.15(t,J=6.6Hz.2H),4.15-3.94(m,2H),3.10-2.10(m,6H),2.01-1.94(m,3H),1.69(m,2H),1.29(bs,10H),1.05-0.86(m,9H).实施例35N-甲氧羰基-罗丹明110由罗丹明110(600mg，1.64mmol)、N,N-二异丙基乙胺(254mg，1.96mmol)和氯甲酸甲酯(201mg，2.13mmol)(如实施例25所述)获得28mg(4.4％)为无色固体的标题化合物。Rf=0.77(EtOAc/己烷=3∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.10-6.53(m,9H),6.35(d,J=7.2Hz,1H),3.90(bs,2H),3.80(s,3H).实施例36N-甲磺酰基-罗丹明110由罗丹明110(500mg，1.36mmol)、N,N-二异丙基乙胺(211mg，1.64mmol)和甲磺酰氯(187mg,1.64mmol)(如实施例25所述)获得42.1mg(9.4％)标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ8.02(d,J=7.5Hz,1H),7.71-7.62(m,3H),7.24-6.36(m,7H),3.95(bs,2H),3.18(s,3H).实施例37N-乙酰基-罗丹明116由罗丹明116(458.8mg，1.0mmol)、N,N-二异丙基乙胺(129.3mg，1.0mmol)和乙酸酐(122mg，1.2mmol)(如实施例25所述)获得141mg(9.4％)为无色固体的标题化合物。Rf=0.64(EtOAc/CH2Cl2=2∶1).1HNMR(CDCl3):δ8.01(d,J=7.5Hz,1H),7.69-7.62(m,3H),7.24-6.36(m,7H),3.95(bs,2H),3.28(s,3H),2.87(s,3H),1.95(bs,3H).实施例38N-二甲基氨基甲酰基-罗丹明110由罗丹明110(1.0g，2.73mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.42g，3.27mmol)和二甲基氨基甲酰氯(0.35g，3.27mmol)(如实施例25所述)获得10mg(1％)固体标题化合物。Rf=0.3(EtOAc).1HNMR(CD3OD):δ8.00(d,J=7.2Hz,1H),7.80-7.64(m,3H),7.55(d,J=2.1Hz,1H),7.21-6.40(m,6H),3.03(s,6H).实施例39N-己氧羰基-罗丹明-110由罗丹明-110、二异丙基乙胺(0.24g，2.52mmol)和氯甲酸己酯(0.27mL，1.64mmol)(如实施例25所述)获得为橙色固体的标题化合物(80mg，13％)。1HNMR(CDCl3):δ7.99(d,J=6.6,1H),7.67-7.56(m,2H),7.51(s,1H),7.14(d,J=7.5,1H),6.87(dd,J=1.8,8.7,1H),6.79(s,1H),6.66(d,J=8.7,1H),6.54-6.50(m,2H),6.33(dd,J=2.1,8.7,1H),4.17(t,J=6.6,2H),3.92(s,2H),1.68(m,2H),1.34(brs,6H),0.91(t,J=6.0,3H).实施例40N-癸氧羰基-罗丹明-110如实施例25所述制备标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ7.98(d,J=7.2,1H),7.67-7.56(m,2H),7.51(s,1H),7.14(d,J=7.5,1H),6.89-6.87(m,2H),6.66(d,J=8.4,1H),6.5.3-6.49(m,2H),6.32(d,J=8.4,1H),4.17(t,J=6.6,2H),3.93(s,2H),1.67(m,2H),1.27(brs,14H),0.89(t,J=6.9,3H).实施例41N-十二烷氧羰基-罗丹明-110如实施例25所述制备标题化合物,1HNMR(CDCl3):δ8.00(d,J=6.9,1H),7.68-7.57(m,2H),7.51(s,1H),7.16(d,J=6.9,1H),6.86(d,J=8.4,1H),6.89-6.53(m,4H),6.35(d,J=7.1,1H),4.17(t,J=6.3,2H),3.89(s,2H),1.67(m,2H),1.27(brs,18H),0.89(t,J=5.7,3H).实施例42N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-己氧羰基-罗丹明-110SEQIDNO:5由Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)-OHSEQIDNO:5(263mg，0.383mmol)、EDC(74mg，0.39mmol)和N-己氧羰基-罗丹明-110(44mg，0.096mmol)(根据实施例1)获得为白色固体的标题化合物(30mg，28％)。1HNMR(CDCl3):δ8.99(d,J=6.9,1H),8.78(d,J=11.7,1H),8.52(s,1H),8.06-6.69(m,13H),4.97-4.01(m,6H),3.08-2.04(m,12H),1.70-1.34(m,39H),1.04-0.89(m,9H).实施例43N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-癸氧羰基-罗丹明-110SEQIDNO:5如实施例l所述制备标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ9.01-8.76(m,3H),8.51(s,1H),8.02-6.69(m,13H),4.97-4.01(m,6H),3.08-2.04(m,12H),1.70-1.34(m,47H),1.04-0.88(m,9H).实施例44N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-十二烷氧羰基-罗丹明-110SEQIDNO:5如实施例1所述制备标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ9.01-8.76(m,3H),8.51(s,1H),8.02-6.69(m,13H),4.97-4.01(m,6H),3.08-2.04(m,12H),1.70-1.34(m,51H),1.04-0.88(m,9H).实施例45N-(Ac-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-己氧羰基-罗丹明-110SEQIDNO:5由N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t]-N'-己氧羰基-罗丹明-110SEQIDNO:5(30mg，0.027mmol)和三氟乙酸(2mL)获得为黄色固体的标题化合物(22mg，85％)。1HNMR(CD3OD):δ8.13-7.32(m,8H),7.26(d,J=6.6,1H),7.12(d,J=8.7,1H),6.83-6.69(m,2H),4.72(m,1H),4.44-3.99(m,5H),3.11-2.77(m,3H),2.43(m,2H),2.17(m,2H),2.03-1.98(m,5H),1.73(m,2H),1.49-1.34(m,8H),1.04-0.97(m,9H).实施例46N-(Ac-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-癸氧羰基-罗丹明-110SEQIDNO:5如实施例45所述制备标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.13-7.32(m,8H),7.26(d,J=7.8,1H),7.12(d.J=8.1,1H),6.83-6.69(m,2H),4.72(m,1H),4.44-3.99(m,5H),3.11-2.77(m,3H),2.45(m,2H),2.22-2.10(m,2H),2.05-1.98(m,5H),1.73(m,2H),1.49-1.26(m,14H),1.06-0.92(m,9H).实施例47N-(Ac-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-十二烷氧羰基-罗丹明-110SEQIDNO:5如实施例45所述制备标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.07-7.08(m,10H),6.81-6.68(m,2H),4.73(m,1H),4.44-3.35(m,5H),3.26-2.02(m,12H),1.73(m,2H),1.49-1.29(m,18H),1.06-0.92(m,9H).实施例48N-(乙硫基)羰基-罗丹明110向-61℃溶解于二甲基甲酰胺的罗丹明110(500mg，1.36mmol)溶液(12mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(264mg，2.04mmol)，然后向上述溶液中逐滴加入氯甲酸乙酯(204mg，1.64mmol)。使反应溶液缓慢升温至室温，持续搅拌1小时。然后用100mL冰水稀释，并用乙酸乙酯(3×30mL)抽提。用盐水(2×50mL)洗涤有机相，将其在Na2SO4上干燥并浓缩得到粗制品，经层析(己烷/EtOAc2∶1)纯化得到238mg(42％)固体标题化合物。Rf=0.6(EtOAc/己烷=1∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.01(d,J=6.9Hz,1H),7.68-7.57(m,3H),7.21(bs,1H),7.14(d,J=7.2Hz,1H),6.88(dd,J1=8.4Hz,J2=2.1Hz,1H),6.68(d,1H),6.56-6.50(m,2H),6.34(dd,J1=8.4Hz,J2=2.1Hz,1H),3.91(s,2H),3.00(q,J=7.5Hz,2H),1.36(t,J=7.5Hz,3H).实施例49N-[Ac-Asp(OBu-t)-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110SEQIDNO:5如实施例1所述制备标题化合物。Rf=0.56(EtOAc/CH2Cl2=2∶1)；1HNMR(CDCl3):δ9.04-8.46(m,3H),8.01-6.68(m,11H),4.93-3.86(m,4H),3.15-1.85(m,8H),2.14(d,3H),1.48-1.33(m,29H),1.06-0.98(m,6H).实施例50N-(Ac-Asp-Glu-Val-Asp)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110SEQIDNO:5如实施例45所述制备标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.12-7.09(m,11H),6.79-6.66(m,2H),4.67-3.93(m,4H),3.08-2.68(m,6H),2.38(m,2H),2.12(m,2H),1.99-1.94(t,3H),1.32(t,J=7.5Hz,3H),1.04-0.94(m,6H).实施例51氯甲酸2,5,8-三氧杂癸酯将三乙二醇一甲醚(2g，12.2mmol)的乙醚溶液(15mL)逐滴加入搅拌的冰冷的20％光气甲苯溶液(11.36mL，21.92mmol)中20分钟。使反应混合物升温至室温，继续搅拌15小时。溶剂的蒸发产生2.63g(95％)标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ4.44(m,2H),3.37(m,2H),3.68-3.63(m,6H),3.55(n,2H),3.38(s,3H).实施例52N-(2,5,8-三氧杂癸氧羰基)-罗丹明110由罗丹明110(500mg，1.36mmol)、N,N-二异丙基乙胺(317mg，2.45mmol)和氯甲酸2,5,8-三氧杂癸酯(371mg，1.64mmol)获得261mg(37％)固体标题化合物。Rf=0.52(EtOAc/己烷=4∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.00(d,J=6.6Hz,1H),7.66-7.58(m,3H),7.49(s,1H),7.26(bs,1H),6.88(d,J=9.0Hz,1H),6.65(d,J=8.4Hz,1H),6.54-6.31(m,3H),4.33(t,J=4.2Hz,2H),3.93(bs,2H),3.74(t,J=3.3Hz,2H),3.70-3.64(m,6H),3.55(m,2H),3.37(bs,3H).实施例53N-[Ac-Leu-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t]-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:9由Ac-Leu-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)(189mg，0.3mmol)SEQIDNO:9、EDC(57.5mg，0.3mmol)和N-乙氧羰基-罗丹明110(40mg，0.1mmol)(根据实施例1)获得48mg(47％)固体标题化合物。Rf=0.35(EtOAc/CH2Cl2=1∶1);1HNMR(CD3OD):δ8.02-7.04(m,8H),6.79-6.93(m,2H),4.35(m,2H),4.20(q,J=6.9Hz,2H),4.11(m,1H),3.94(d,J=6.3Hz),3.00-2.65(m,2H),2.30(bs,2H),2.00(m,2H),1.98-1.95(d,3H),1.62-1.28(m,25H),1.04-0.82(m,12H).实施例54N-(ac-Leu-Glu-Val-Asp)-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:9如实施例45所述制备标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.40-7.05(m,9H),6.79-6.63(m,2H),4.37(m,1H),4.31(m,1H),4.20(q,J=6.9Hz,2H),4.11(m,1H),3.94(m,1H),3.07-2.68(m,2H),2.38(m,2H),2.08(m,2H),1.99-1.95(t,3H),1.68-1.48(m,3H),1.31(t,J=6.9Hz,3H),1.04-0.80(m,12H).实施例55N-[Cbz-Gly-Pro]-N'-乙氧羰基-罗丹明110由Cbz-Gly-Pro(91.8mg，0.3mmol)、EDC(57.5mg，0.3mmol)和N-乙氧羰基-罗丹明110(40.2mg，0.1mmol)(根据实施例1)获得68mg(98％)固体标题化合物。Rf=0.6(EtOAC/CH2Cl2=4∶1).1HNMR(CDCl3):δ9.45(s,1H),8.00(d,J=7.2Hz,1H),7.61-6.91(m,8H),6.68-6.63(m,2H),5.69(bs,1H),5.11(s,2H),4.72(d,1H),4.22(q,J=6.9Hz,2H),4.03(bs,2H),3.58(1H),3.43(m,1H),2.49-1.90(m,4H),2.42(bs,1H),2.18-1.95(m,3H),1.31(t,J=6.9Hz,3H).实施例56N-(Gly-Pro)-N'-乙氧羰基-罗丹明110HBr1HNMR(CD3OD):δ8.11(d,J=7.8Hz,1H),8.00(bs,1H),7.84-7.72(m,3H),7.32-7.15(m,3H),6.95-6.87(m,2H),4.64(m,1H),4.23(q,J=6.9Hz,2H).3.96(s,2H),3.68(m,2H),2.35-2.05(m,4H),1.33(t,J=6.9Hz,3H).实施例571-氯硫代甲酸己酯将1-己硫醇(3.72g，31.5mmol)的乙醚溶液(15mL)逐滴加入搅拌的冰预冷的20％光气甲苯溶液(25mL，47mmol)中20分钟。使反应混合物升温至室温，持续搅拌15小时。溶剂的蒸发产生6.1g(98％)标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ2.96(t,J=7.2Hz,2H),1.64-1.24(m,8H),0.91(t,J=63Hz,3H).实施例58N-(己硫基)羰基-罗丹明110根据实施例25所述制备标题化合物。Rf=0.8(EtOAc/己烷=1∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.00(d,J=7.2Hz,1H),7.65-7.58(m,3H),7.24(bs,1H),7.14(d,1H),6.87(dd,1H),6.68-6.32(m,4H),3.92(bs,2H),2.99(t,J=6.9Hz,2H),1.68(m,2H),1.42(m,2H),1.34-1.26(m,4H),0.90(t,J=7.2Hz,3H).实施例592-氯甲酸丁氧基乙酯由2-丁氧基乙醇(3.72g，31.5mmol)和20％光气的甲苯溶液(25mL，47mmol)获得4.51g(79％)标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ4.46(t,2H),3.70(m,2H),3.51(t,J=6.6Hz,2H),1.56(m,2H),1.40(m,2H),0.94(t,J=6.9Hz,3H).实施例60N-(2-丁氧基乙氧羰基)-罗丹明110根据实施例25制备标题化合物。Rf=0.58(EtOAc/己烷=1∶1)。1HNMR(CDCl3):δ8.00(d,J=7.5Hz,1H),7.67-7.49(m,3H),7.15(d,J=7.8Hz,1H),6.89-6.32(m,6H),4.34(m,2H),3.91(bs,2H),3.68(m,2H),3.50(t,J=6.6Hz),1.59(m,2H),1.39(m,2H),0.93(t,J=7.2Hz,3H).实施例61N-[Cbz-Asp(OEt)-Glu(OEt)-Val-Asp(OEt)]-N'-乙氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:5由Cbz-Asp(OEt)-Glu(OEt)-Val-Asp(OEt)SEQIDNO:5(181mg，0.3mmol)、EDC(57.5mg，0.3mmol)和N-乙氧羰基-罗丹明110(40mg，0.1mmol)(根据实施例1)获得71mg(72％)固体标题化合物。Rf=0.3(EtOAc/CH2Cl2=4∶1),1HNMR(CDCl3):δ9.00(bs,1H),8.76(d,1H),8.43(bs,1H),8.14-6.90(m,10H),6.80-6.62(m,2H),5.1-3.8(m,6H),3.2-2.0(m,11H),1.35-1.22(m,12H),1.12-0.84(m,7H).实施例62N-[Ac-Leu-Glu(OBu-t)-Val-Asp(OBu-t)]-N'-辛氧羰基-罗丹明110SEQIDNO:9根据实施例1制备标题化合物。Rf=0.65(EtOAc/CH2Cl2=1∶1),1HNMR(CD3OD):δ8.02-7.04(m,8H),6.79-6.93(m,2H),6.20(bs,1H),4.95(bs,1H),4.52-4.20(m,5H),3.15-2.00(m,9H),1.68(m,2H),1.48(s,9H),1.45(s,9H),1.41-1.29(m,12H),1.18-0.88(m,15H).实施例63N-(Z-Gly)-N'-乙氧羰基-罗丹明110由Z-甘氨酸(284mg，1.356mmol)、EDC(260mg，1.356mmol)和N-乙氧羰基-罗丹明110(58mg，0.135mmol)(根据实施例1)获得固体标题化合物(70mg，83％)。1HNMR(CDCl3):δ8.95(bs,1H),7.98(s,2H),7.53(m,8H),7.30(s,5H),7.05(m,2H),6.63(dd,2H,J=8.4,11.4Hz),5.09(s,2H),4.19(q,2H,J=7.5Hz),1.27(t,3H,J=7.5Hz).实施例64N-Gly-N'-乙氧羰基-罗丹明110HBr根据实施例6制备标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ9.41(bs,1H),9.20(s,1H),8.04(m,1H),7.62(m,3H),7.33(m,2H),7.12(m,2H),6.97(m,2H),6.74(m,2H),4.25(q,2H,J=6.9),1.33(t,3H,J=6.9Hz).实施例65N-(Z-Gly-Pro-Gly)-N'-乙氧羰基-罗丹明110由Z-甘氨酸-脯氨酸(315mg，1.03mmol)、EDC(197mg，1.03mmol)和N-Gly-N'-乙氧羰基-罗丹明110(50mg，0.103mmol)(根据实施例1)获得为浅黄色固体的标题化合物(70mg，96％)。1HNMR(CDCl3):δ8.97(bs,1H),7.94(d,1H,J=7.8Hz),7.77(d,1H,J=15Hz),7.52(m,4H),7.32(s，5H),7.22(m,2H),7.15(m,2H),6.64(m,1H),5.92(bs,2H),5.78(bs,1H),5.57(bs,1H),5.09(s,2H),4.95(m,2H),4.74(m,2H),4.16(m,2H),3.62(m,1H),3.46(m,1H),1.98(m,4H),1.26(m,3H).实施例66N-(Gly-Pro-Gly)-N'-乙氧羰基-罗丹明110HBr1HNMR(CD3OD):δ8.02(d,1H,J=7.8Hz),7.71(m,3H),7.28(m,2H),7.19(m,1H),7.01(m,1H),6.71(m,2H),4.48(m,1H),4.19(q,2H,J=7.2Hz),4.05(m,2H),3.94(m,2H),3.61(m,2H),2.12(m,4H),1.30(t,3H,J=7.2Hz).实施例67N-己基-N-甲基氨基甲酰氯向0℃的0.35ml(i-Pr)2NEt在10ml二乙醚中的溶液中加入光气(1.06ml，1.93M甲苯溶液)和N-己基甲胺(0.31ml，2.05mm)。使反应混合物升温至25℃，进一步在25℃下搅拌14小时。过滤混合物，在真空下除去溶剂。产物用于下一步反应，不需进一步纯化。1HNMR(CDCl3):δ3.42(m,2H),3.07(s,3H),1.59(m,2H),1.31(m,6H),0.90(m,3H).实施例68N-(N-己基-N-甲基氨基甲酰基)-罗丹明110向-61℃的罗丹明110(0.5g，1.36mmol)DMF溶液(15ml)中加入N,N-二异丙基乙胺(0.25ml)和N-己基-N-甲基氨甲酰氯的DMF溶液(2.05mmol)。在-61℃下搅拌反应混合物1小时,然后使之升温至室温。在室温下进一步搅拌该反应混合物14小时,然后在水饱和NH4Cl溶液与乙酸乙酯(2×50ml)之间分配。用盐水(100ml)洗涤有机相，并在Na2SO4上干燥。除去溶剂,通过快速层析(己烷:EtOAc，1∶1)纯化粗制品。获得固体标题化合物(115mg，18％)。1HNMR(CDCl3):δ7.97(d,1H,J=7.2Hz),7.59(m,3H),7.12(d,1H,J=7.5Hz),6.85(dd,1H,J=8.4,2.1Hz),6.60(dd,2H,J=5.1,3.3Hz),6.48(dd,2H,J=8.4,2.1Hz),6.31(dd,1H,J=8.4,2.4Hz),3.93(bs,2H),3.33(t,2H,J=6.9Hz),2.79(s,3H),1.56(m,2H),1.30(m,6H),0.88(t,3H,J=6.6Hz).实施例69N-(辛硫基)羰基-罗丹明110根据实施例25制备标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ7.99(d,1H,J=7.5Hz),7.59(m,3H),7.11(dd,1H,J=6.9,0.9Hz),6.89(dd,1H,J=8.4,2.1Hz),6.64(d,1H,J=8.4Hz),6.48(dd,2H,J=8.4,2.1Hz),6.31(dd,1H,J=8.4,2.4Hz),3.97(bs,2H),2.95(m,2H),1.67(m,2H),1.29(m,10H),0.88(t,3H,J=6.6Hz).实施例70N-(Z-Gly)-N'-辛氧羰基-罗丹明-110根据实施例1制备标题化合物。1HNMR(CDCl3):δ8.22(s,1H),7.11(d,J=7.5,1H),7.046.97(m,2H),6.85(s,1H),6.70(dd,J=7.5,7.5,2H),5.57(s,1H),5.16(s,1HF),5.16(s,2H),4.18(t,J=6.6,2H),4.01(d,J=5.7,1H),1.68(q,J=6.6,2H),1.29(brs,10H),0.89(t,J=6.9,3H).实施例71N-Gly-N'-辛氧羰基-罗丹明-110HBr根据实施例6制备标题化合物。1HNMR(CD3OD):δ8.10(d,J=6.9,1H),7.93(d,J=2.4,1H),7.86-7.75(m,3H),7.28-7.24(m,2H),7.11(dd,J=2.4,9.0,1H),6.85(d,J=9.0,1H),6.78(d,J=9.0,1H),4.20(t,J=6.6,2H),3.94(s,2H),1.74(m,2H),1.50-1.30(brm10H),0.94(t,J=6.6,3H).实施例72与罗丹明110相比N-乙酰基-罗丹明110的荧光及稳定性用荧光测定法测定作为合成底物之荧光部分的罗丹明110和N-乙酰基-罗丹明110的活性。用荧光分光光度计或荧光微量滴定板读出器在485的激发波长和530的发射波长下读取荧光信号。应用该测定法，对两种荧光部分测定其相对荧光值。用下列缓冲条件测定荧光:100mMHEPESpH7.5，含10％蔗糖、1％CHAPS、5mM谷胱甘肽和1-200nM试验化合物。稳定性的测定一般在37℃下进行2天。荧光信号的比例在时间零点时为10.2(罗丹明110/N-乙酰基罗丹明110)，37℃温育两天后为10.1。结果显示，类似于罗丹明110，N-乙酰基-罗丹明110是稳定且有效的荧光指示剂。实施例73修饰的罗丹明染料的荧光用常规光谱测定法和荧光光谱测定法估测修饰的罗丹明染料。为进行此两种类型的分析，将染料溶解于甲醇或50mMTris中，染料终浓度为10nM-100μM。使用BeckmanDU-7000分光光度计测定每种染料200nm-700nm波长的吸收光谱。这些染料都具有470-480nm左右的吸收峰。选择该波长为荧光激发波长，并用HitachiF-2000荧光分光光度计测定完全荧光发射光谱。对于每种染料，发射峰在520nm左右，在试验条件下(见表1)测定荧光输出。表3.修饰的罗丹明染料的荧光实施例74HL-60细胞对修饰的罗丹明染料的吸收和储留将HL-60细胞置于5mlIscove培养基(不含血清或酚红)中，其中含有10μM或50μMN-辛氧羰基-罗丹明110、N-癸氧羰基-罗丹明110、N-十二烷氧羰基-罗丹明110、N-己氧羰基-罗丹明110、N-(乙硫基)羰基-罗丹明110或罗丹明110。使细胞在CO2培养箱中37℃下温育不同时间，离心回收，用50mL冰冷的培养基洗涤。再离心细胞，将最终沉淀重悬浮于50μL新鲜培养基中。将每种细胞悬液的等份置于显微镜载玻片上，用配有表面荧光照明的Nikon倒置显微镜观察。如图1A-1F所示，N-辛氧羰基-罗丹明110(图1A)、N-癸氧羰基-罗丹明110(图1B)和N-十二烷氧羰基-罗丹明110(图1C)强烈染色HL-60细胞，几乎没有染料向培养基渗漏。N-己氧羰基-罗丹明110(图1D)不甚强烈地染色HL-60细胞，但仍较好地保留。N-(乙硫基)羰基-罗丹明110(图1E)引起适中的、但仍易于检测的染色，尽管有轻微的渗漏。罗丹明110(图1F)快速染色细胞，但染料快速渗漏至细胞之外，导致低强度的细胞染色和含有细胞的培养基中的高度荧光。因此，修饰的罗丹明染料优于罗丹明110，因为它们易于被HL-60细胞吸收，并且可在细胞内保留至少30分钟。实施例75底物的酶活性用荧光酶测定法测定作为重组CPP32蛋白质和ICE蛋白质的合成底物的N-(Z-VD)-N'-乙酰基-罗丹明110、N-(Z-VAD)-N'-乙酰基-罗丹明110、N-(Z-DEVD)-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:5、N-(Z-YVAD)-N-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:2、(Z-VAD)2-罗丹明110和(Z-YVAD)2-罗丹明110SEQIDNO:2的活性。重组CPP32蛋白质和ICE蛋白质的制备是利用杆状病毒作为载体，在昆虫宿主细胞(sf9细胞)中表达编码这些酶的DNA克隆。参见，Webb，N.R．等人，“利用重组杆状病毒的蛋白质表达”，技术(Technique)2:173-188(1990)。酶对合成底物的酶切产生一种可在荧光分光光度计或荧光微量滴定板读出器中读取的荧光信号。应用该测定法，用CPP32或ICE测定每种底物的Km和Vmax值。应用下列缓冲条件测定依赖CPP32和ICE的底物裂解100mMHEPESpH7.5，含10％蔗糖、1％CHAPS、5mM谷胱甘肽和1-100μM试验底物。利用特异性CPP32和ICE抑制剂测定非特异性酶裂解，这两种抑制剂分别包含具有序列Asp-Glu-Val-Asp或Tyr-Val-Ala-Asp的寡聚体，以及与C末端结合的醛基。酶活性的测定一般在37℃下进行60分钟。表4列出了作为CPP32和ICE底物的N-(Z-VD)-N'-乙酰基-罗丹明110、N-(Z-VAD)-N'-乙酰基-罗丹明110、N-(Z-DEVD)-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:5、N-(Z-YVAD)-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:2、(Z-VAD)2-罗丹明110和(Z-YVAD)2-罗丹明110SEQIDNO:2的Km和Vmax值。表4.CPP32和ICE对底物的裂解<tablesid="table3"num="003"><table>酶CPP32ICEN-(Z-VD)-N'-Ac-罗丹明110N-(Z-VAD)-N'-Ac-罗丹明110N-(Z-DEVD)-N'-Ac-罗丹明110SEQIDNO:5N-(Z-YVAD)-N'-Ac-罗丹明110SEQIDNO:2(Z-VAD)2-罗丹明110(Z-YVAD)2-罗丹明110SEQIDNO:2Km(μM)60NA154NANANAVmax(nmol/分钟)11160Km(μM)NA701232216Vmax(nmol/分钟)4996914</table></tables>NA=37℃、3小时温育、1-100μM底物时，未观察到活性。表4的结果显示，N-(Z-DEVD)-N'-Ac-罗丹明110SEQIDNO:5是ICE和CPP32两者的有效底物。也显示，N-(Z-VD)-N'-乙酰基-罗丹明110是CPP32而不是ICE的有效底物，N(Z-VAD)-N'-乙酰基-罗丹明110、N-(Z-YVAD)-N'-乙酰基-罗丹明110SEQIDNO:2、(Z-VAD)2-罗丹明110和(Z-YVAD)2-罗丹明110SEQIDNO:2是ICE而不是CPP32的有效底物。实施例76重组人胱天肽酶-3和凋亡HL-60细胞裂解物对胱天肽酶-3底物的裂解用重组胱天肽酶-3并用由凋亡的HL-60细胞制备的裂解物测定胱天肽酶的底物。该试验于37℃下在96孔板中进行，100μL温育液中含有30μL胱天肽酶-3制剂或细胞裂解物、10μM或50μM底物和胱天肽酶测定缓冲液(40mM1,4-哌嗪双(乙磺酸)(PIPES，Aldrich化学公司)pH7.2；100mMNaCl；10％蔗糖；0.1％CHAPS；1mMEDTA；10mMDTT)。在温育期结束时，在Bio-TekFL500荧光微量培养板读出器上分别用485和530nm的激发和发射波长测定荧光。做两种不同的对照1)酶空白，由含底物的样品组成，但不含酶或细胞裂解物；2)抑制剂对照，由含有胱天肽酶抑制剂Ac-DEVD-CHO(f.c.，10μM)的样品组成。表5是用这些底物获得的结果的概括。表5.胱天肽酶-3和裂解物对底物的裂解如图2A所述，二肽底物N-Z-VD-N'-乙氧羰基-R110的裂解需要极高浓度的重组胱天肽酶-3(酶量比三肽和四肽底物所需高50倍)。尽管应用大量的酶，但信号仍较低。相反，三肽底物N-Z-EVD-N'-乙氧羰基-R110(图2A)和所有四肽底物(图2B-2L)可被胱天肽酶-3和凋亡裂解物有效地裂解。实施例77胱天肽酶-3底物N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基R110对凋亡HL-60细胞的染色应用凋亡的HL-60和Jurkat细胞检验了N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5检测完整细胞中胱天肽酶激活的能力。这些全细胞测定法分两个阶段进行1)细胞凋亡的诱导；2)与底物一起温育。对于HL-60细胞，通过用10μg/ml长春花碱处理4小时来诱导细胞凋亡。对照样品用DMSO处理。对于Jurkat细胞，通过用500ng/ml拮抗性抗Fas抗体处理2小时来诱导细胞凋亡。对照样品用PBS处理。细胞凋亡诱导后，使细胞与50μMN-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5在胱天肽酶测定缓冲液(40mMPIPES，pH7.4；100mMNaCl；10％蔗糖；1mMEDTA；10mMDTT)中温育。然后将细胞转移至显微镜载玻片上，用Nikon倒置显微镜上的表面荧光照明观察。如图3A所示，长春花碱处理的HL-60细胞被N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5强烈染色。DMSO处理的细胞也显示一定的染色(图3B)，但其信号强度明显低于长春花碱处理的细胞。在测定阶段用50μMN-Ac-DEVD-CHOSEQIDNO:5处理的HL-60细胞(图3C)几乎不显示荧光信号，表明在长春花碱处理的细胞中观察到的染色几乎完全是由于胱天肽酶介导的裂解。经抗Fas诱导经历细胞凋亡的Jurkat细胞(图3D)也显示出被N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5强烈染色，而对照细胞仅显示轻微染色(图3F)。这些实验表明，N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5能用来测定完整细胞中的细胞凋亡，由N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5获得的信号是胱天肽酶依赖的。实施例78凋亡Jurkat全细胞对胱天肽酶-3底物N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基R110SEQIDNO:5的裂解为了定量全细胞对N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基-R110SEQIDNO:5的裂解，进行一种测定，其中用分光荧光平板读出器测定凋亡的Jurkat细胞使该底物产生的荧光信号。Jurkat细胞在含500ng/ml抗Fas抗体的96孔板中温育不同时间，诱导细胞凋亡。对照细胞与PBS温育。在处理期结束时，收获细胞，在1.5ml管中离心，重悬浮于25μl含1％FBS的培养基中。加入25μl含有50μMN-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基R110SEQIDNO:5的胱天肽酶缓冲液，温育细胞1小时。在温育期结束时，将每一时点的三个5μl等份加于96孔板中，以485/530nm的激发/发射波长测定荧光。图4显示用PBS处理的细胞产生较低的荧光信号，其不随所用的处理时间而增强。然而，用抗Fas处理的细胞在细胞凋亡诱导约1小时后产生可检测的荧光信号，且该信号持续增强可达2小时的时点，信号与背景的比例约为7。该实验表明，N-Ac-DEVD-N'-辛氧羰基R110SEQIDNO:5在凋亡全细胞中产生较强的信号，因此能用来在基于细胞的测定法中定量测定胱天肽酶介导的细胞凋亡。实施例79重组人胱天肽酶-3、6、7和8对胱天肽酶-8底物N-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基R110SEQIDNO:9的裂解用重组人胱天肽酶-3、6、7和8测定N-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基R110SEQIDNO:9。该试验于37℃下在96孔板中进行，100μL温育液中含有重组人胱天肽酶、10μMN-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基R110SEQIDNO:9和胱天肽酶测定缓冲液(40mMPIPES，pH7.2；100mMNaCl；10％蔗糖；0.1％CHAPS；1mMEDTA；10mMDTT)。在温育期结束时，在Bio-TekFL500荧光微量培养板读出器上分别用485和530nm的激发和发射波长测定荧光。为了校正未裂解底物的内源荧光，也做对照，该对照由含有10μMN-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基R110SEQIDNO:9、不含酶的样品组成(“酶空白”)。其它对照包括含有胱天肽酶抑制剂Ac-DEVD-CHOSEQIDNO:5的样品。如图5所示，胱天肽酶-6和胱天肽酶-8裂解N-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基R110SEQIDNO:9，产生易于测定的荧光信号(对于胱天肽酶-6，信号与背景的比例约为13，对于胱天肽酶-8约为26)。胱天肽酶-3不甚高效地地裂解N-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基R110SEQIDNO:9，产生比酶空白值约高5倍的信号。胱天肽酶-7实际上不产生信号。这些实验表明，N-Ac-LEVD-N'-乙氧羰基R110SEQIDNO:9能被胱天肽酶-8亚家族的成员裂解，并且能用来报道这类胱天肽酶的活性。实施例80HL-60细胞裂解物对氨肽酶底物N-G-N'-辛氧羰基R110的裂解氨肽酶存在于许多细胞中，能由N末端开始，从肽上顺序去除未保护的氨基酸残基。具有保护的氨基末端的肽不被切割。通过在胱天肽酶缓冲液中匀浆化HL-60细胞制备HL-60裂解液，并用微量滴定板测定检验这些裂解物裂解N-Z-G-N'-辛氧羰基R110和N-G-N'-辛氧羰基R110的能力。图6显示HL-60细胞裂解物轻易地裂解N-G-N'-辛氧羰基R110，而信号大小取决于底物的浓度。相反，HL-60细胞裂解液不从N-Z-G-N'-辛氧羰基R110中产生信号。实施例81荧光测定法在筛选刺激胱天肽酶级联的药物中的应用在无Fas配体时刺激胱天肽酶级联的药物可用作例如抗癌的化疗剂。实施例78所述的测定法可用来筛选刺激胱天肽酶级联的药物，方法是在与实施例78相似的条件下进行测定，所不同的是用具有已知或未知抗癌或抗肿瘤活性的已知或未知化合物代替Fas配体试剂。实施例82荧光测定法在筛选抑制或加强Fas配体或其它凋亡诱导剂刺激的胱天肽酶级联的药物方面的应用抑制胱天肽酶级联的药物可用于治疗由于胱天肽酶级联的激活不充分引起的或与之相关的退行性疾病及其它疾病。加强另一种胱天肽酶刺激剂作用的药物，如Fas配体或抗癌药或抗癌剂，可适于治疗由于胱天肽酶级联的不适当功能引起的或与之相关的癌症或肿瘤。本发明所述的试验和试剂可用来筛选抑制或加强细胞中胱天肽酶级联的药物，方法是在可抑制或加强第一种细胞凋亡或胱天肽酶级联诱导剂的作用或与之协同作用的试验物质存在下，使用Fas配体或能刺激胱天肽酶级联或其它凋亡途径的其它任何因子，如实施例78所述进行测定。实施例83荧光测定在测定患者癌细胞标本对抗癌药的化学敏感性中的应用众所周知，不同患者的相同癌症对于抗癌药治疗显示很大的变化性。因此，在开始治疗之前预测患者的癌症是否能用一种特定抗癌药治疗是非常困难的。本发明所述的荧光测定允许对取自个体癌症或肿瘤患者的癌细胞或肿瘤细胞或组织标本进行化学敏感性或抗药性试验。为了进行化学敏感性试验，可如实施例78所述对取自患者的癌细胞或组织标本进行荧光测定。应用该方法，能检测具有已知或未知化学治疗能力的不同药物刺激胱天肽酶级联的能力。该试验的结果提供了能用来为患者设计最佳化疗药治疗方案的信息。实施例84HL-60细胞对氨肽酶底物N-G-N'-辛氧羰基-R110的吸收和裂解将HL-60细胞置于5mlIscove培养基(不含血清或酚红)中，其中含有10μMN-G-N'-辛氧羰基-R110或10μMN-Z-G-N-辛氧羰基-R110。将三百万个HL-60细胞在CO2培养箱中37℃下温育3小时，离心回收，用50μL冰冷的培养基洗涤。再离心细胞，将最终沉淀重悬浮于50μL新鲜培养基中。将每种细胞悬液的等份置于96孔微量滴定板中，用485nm的激发波长、525nm的发射波长在Wallac1420微量培养板读出器上读取。也将每种细胞悬液的等份置于显微镜载玻片上，用配备有表面荧光照明的Nikon倒置显微镜观察。如表6所示，只有与10μMN-G-N'-辛氧羰基-R110温育的细胞显示有信号。与10μMN-Z-G-N'-辛氧羰基-R110温育的细胞无信号。同样，只有与N-G-N'-辛氧羰基-R110温育的细胞在显微镜下显示荧光，而未观察到与N-Z-G-N'-辛氧羰基-R110温育的细胞有荧光信号(图7A-B)。表6.HL-60细胞对N-G-N'-辛氧羰基-R110的裂解<tablesid="table5"num="005"><table>底物计数/μg蛋白质N-Z-G-N'-辛氧羰基-R1100N-G-N'-辛氧羰基-R11012.98</table></tables>现已完全叙述了本发明，本领域的普通技术人员应当理解，在不影响本发明范围或其任何实施方案的情况下，在宽范围或相同范围的条件、公式及其它参数内能实行本发明。此处引用的所有专利、专利申请和出版物在此都完全引用作为参考。序列表&amp;#60110&amp;#62Cytoyia,Inc.&amp;#60120&amp;#62新型荧光报道分子及其应用，包括对胱天肽酶的测定&amp;#60130&amp;#621735.029PC02&amp;#60140&amp;#62&amp;#60141&amp;#62&amp;#60150&amp;#62US60/061.582&amp;#60151&amp;#621997-10-10&amp;#60150&amp;#62US09/033,661&amp;#60151&amp;#621998-03-03&amp;#60160&amp;#62142&amp;#60170&amp;#62PatenInVer.2.0&amp;#60210&amp;#621&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#621TrpGluHisAsp1&amp;#60210&amp;#622&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#622TvrValAlaAsp1&amp;#60210&amp;#623&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#623LeuGluHisAsp1&amp;#60210&amp;#624&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#624AspGluThrAsp1&amp;#60210&amp;#625&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#625AspGluValAsp1&amp;#60210&amp;#626&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#626AspGluHisAsp1&amp;#60210&amp;#627&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#627ValGluHisAsp1&amp;#60210&amp;#628&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#628LeuG1uThrAsp1&amp;#60210&amp;#629&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#629LeuGluValAsp1&amp;#60210&amp;#6210&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6210SerHisValAsp1&amp;#60210&amp;#6211&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6211AspGluLeuAsp1&amp;#60210&amp;#6212&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60220&amp;#62&amp;#60400&amp;#6212AspGlyProAsp1&amp;#60210&amp;#6213&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6213AspGluProAsp1&amp;#60210&amp;#6214&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6214AspGlyThrAsp1&amp;#60210&amp;#6215&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6215AspLeuAsnAsp1&amp;#60210&amp;#6216&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6216AspGluGluAsp1&amp;#60210&amp;#6217&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6217AspSerLeuAsp1&amp;#60210&amp;#6218&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6218AspValProAsp1&amp;#60210&amp;#6219&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6219AspGluAlaAsp1&amp;#60210&amp;#6220&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6220AspSerTyrAsp1&amp;#60210&amp;#6221&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6221GluLeuProAsp1&amp;#60210&amp;#6222&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6222ValGluAspAsp1&amp;#60210&amp;#6223&amp;#60211&amp;#624&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#6022&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#6223IIeGluProAsp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60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#62136IleArgGlyGlyAla15&amp;#60210&amp;#62137&amp;#60211&amp;#625&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#62137LeuValGlyGlyAla15&amp;#60210&amp;#62138&amp;#60211&amp;#625&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#62138MetValGlyGlyAla15&amp;#60210&amp;#62139&amp;#60211&amp;#625&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#62139IleValGlyGlyAla15&amp;#6021O&amp;#62140&amp;#60211&amp;#625&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#62140SerGlnAsnLeuPhe15&amp;#60210&amp;#62141&amp;#60211&amp;#626&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#62141ThrIleAsnPheGlnArg15&amp;#60210&amp;#62142&amp;#60211&amp;#626&amp;#60212&amp;#62PRT&amp;#60213&amp;#62人工序列&amp;#60220&amp;#62&amp;#60223&amp;#62人工序列的描述合成肽&amp;#60400&amp;#62142TyrValAlaAspGlyGly1权利要求1．一种具有通式Ⅱ的报道化合物R1-(AA)n-Asp-y-Asp-(AA)n-R1(Ⅱ)或其生物学可接受的盐或其前报道分子，其中R1是N端保护基团；每个AA独立地为α-氨基酸或β-氨基酸残基，或α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物；每个n独立地为0-5；并且y是发荧光或荧光部分。2．权利要求1的化合物，其中R1-(AA)n-Asp是N端保护的四肽，它是胱天肽酶的底物。3．权利要求2的化合物，其中所述四肽为WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26或IETDSEQIDNO:24。4．权利要求1的化合物，其中R1-(AA)n-Asp是N端保护的四肽，它是粒酶B的底物。5．权利要求4的化合物，其中R1-(AA)n-Asp为IEPD或VEPD。6．权利要求1的化合物，其中R1-(AA)n-Asp是由C端Asp和一种肽链的1、2或3个氨基酸组成的N端保护的肽，该肽链选自WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEOIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26、IETDSEQIDNO:24、IEPDSEQIDNO:23和VEPDSEQIDNO:27。7．权利要求1的化合物，其中y是罗丹明110；前报道分子是含Asp或Glu的化合物的低级烷基酯或乙酸基甲基(AM)酯。8．权利要求1的化合物，其具有通式Ⅲ9．权利要求8的化合物，其中R1为叔丁氧羰基、乙酰基、己酰基、辛酰基或苄氧羰基。10．权利要求8的化合物，其中-(AA)n为WEH.YVA.LEH、DET、DEV、DEH、VEH、LET、SHV、DEL、DGP、DEP、DGT、DLN、DEE、DSL、DVP、DEA、DSY、ELP、VED、IEP或IET。11．权利要求1的化合物，其选自(Z-YVAD)2-罗丹明110，SEQIDNO:2；(Z-DEVD)2-罗丹明110，SEQIDNO:5；(Z-VAD)2-罗丹明110；(Z-YVAD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:2；(Z-LE(OAM)HD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:3；(Z-D(OAM)E(OAM)TD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:4；(Z-D(OAM)E(OAM)VD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:5；(Z-D(OMe)E(OMe)VD(OAM))2-罗丹明110，SEQIDNO:5；和(Z-D(OMe)E(OMe)VD)2-罗丹明110，SEQIDNO5。12．权利要求8的化合物的制备方法，包括(a)使罗丹明110与N-fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯一起缩合，产生(Fmoc-Asp(OBu-t))2-罗丹明110；(b)除去Fmoc基，得到(Asp(OBu-t))2-罗丹明110；(c)使(Asp(OBu-t))2-罗丹明与Z-(AA)n缩合，产生(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))2-罗丹明110；及(d)除去OBu-t保护基。13．权利要求12的方法，其中-(AA)n为WEH、YVA、LEH、DET、DEV、DEH、VEH、LET、SHV、DEL、DGP、DEP、DGT、DLN、DEE、DSL、DVP、DEA、DSY、ELP、VED、IEP或IET。14．具有通式Ⅴ的报道化合物R1-(AA)n-Asp-y-R6(Ⅴ)或其生物学可接受的盐或其前报道分子，其中R1是N端保护基团；R6是一种保护基团，不是氨基酸或氨基酸的衍生物；每个AA独立地为α-氨基酸或β-氨基酸残基，或α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物；n为0-5；并且y是发荧光或荧光部分。15．权利要求14的化合物，其中R1-(AA)n-Asp是N端保护的四肽，它是胱天肽酶的底物。16．权利要求15的化合物，其中所述四肽为WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26或IETDSEQIDNO:24。17．权利要求14的化合物，其中R1-(AA)n-Asp是N端保护的四肽，它是粒酶B的底物。18．权利要求17的化合物，其中R1-(AA)n-Asp为N端保护的IEPD或VEPD。19．权利要求14的化合物，其中R1-(AA)n-Asp是由C端Asp和一种肽链的1、2或3个氨基酸组成的N端保护的肽，该肽链选自WEHDSEQIDNO:1、YVADSEQIDNO:2、LEHDSEQIDNO:3、DETDSEQIDNO:4、DEVDSEQIDNO:5、DEHDSEQIDNO:6、VEHDSEQIDNO:7、LETDSEQIDNO:8、LEHDSEQIDNO:3、SHVDSEQIDNO:10、DELDSEQIDNO:11、DGPDSEQIDNO:12、DEPDSEQIDNO:13、DGTDSEQIDNO:14、DLNDSEQIDNO:15、DEEDSEQIDNO:16、DSLDSEQIDNO:17、DVPDSEQIDNO:18、DEADSEQIDNO:19、DSYDSEQIDNO:20、ELPDSEQIDNO:21、VEIDSEQIDNO:26、IETDSEQIDNO:24、IEPDSEQIDNO:23和VEPDSEQIDNO:27。20．权利要求14的化合物，其中y是罗丹明110。21．权利要求14的化合物，其中R6为CH3OCO-、Cbz、Cl3CCH2OCO-、PhCH2CH2OCO-或CH3(CH2)POCO-，其中p为1-11。22．权利要求14的化合物，其中R6为Me2NCO-、Et2NCO-或N-Me-N-CH3(CH2)vNCO-，其中v为0-9。23．权利要求14的化合物，其中R6为Ts-、PhSO2-、MeSO2-、PhCH2SO2-、CF3SO2-或CH3(CH2)uSO2-，其中u为0-11。24．权利要求14的化合物，其中R6为CH3SCO-或CH3(CH2)tSCO-，其中t为0-11。25．权利要求14的化合物，其中R6为HCO-、CH3CO-、PhCH2CO-、PhCO-或CH3(CH2)wCO-，其中W为0-11。26．权利要求14的化合物，其中R6为CH3(OCH2CH2)qOCO-或CH3(CH2)r(OCH2CH2)sOCO-，其中q为1-4，r为0-5，s为1-4。27．权利要求14的化合物，其具有通式Ⅶ或其生物学可接受的盐或其前报道分子，其中R2和R3独立地为氢、甲基或乙基；并且R4和R5独立地为氢或甲基。28．权利要求27的化合物，其中R1为叔丁氧羰基、乙酰基、己酰基、辛酰基或苄氧羰基；R2、R3、R4和R5为氢。29．权利要求27的化合物，其中-(AA)n为WEH、YVA、LEH、DET、DEV、DEH、VEH、LET、LEV、SHV、DEL、DGP、DEP、DGT、DLN、DEE、DSL、DVP、DEA、DSY、ELP、VED、IEP或IET。30．权利要求14的化合物，其选自N-(Z-YVAD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:2；N-(Z-DEVD)-N'-乙酰基-罗丹明110，SEQIDNO:5；N-(Z-VD)-N'-乙酰基-罗丹明110；N-(Z-AD)-N'-乙酰基-罗丹明110；N-(Z-VAD)-N'-乙酰基-罗丹明110；N-(Z-DEVD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5；N-(Ac-DEVD)-N'-乙氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5；N-(Ac-DEVD)-N'-己氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5；N-(Ac-DEVD)-N'-辛氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:5；N-(Ac-DEVD)-N'-癸氧羰基-罗丹明11O，SEQIDNO:5；N-(Ac-DEVD)-N'-十二烷基氧羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5；和N-(Ac-DEVD)-N'-(乙硫基)羰基-罗丹明110，SEQIDNO:5。31．一种权利要求27的化合物的制备方法，包括(a)使罗丹明与乙酸酐反应，产生N-乙酰基-罗丹明；(b)使N-乙酰基-罗丹明与N-fmoc-L-天冬氨酸β-叔丁酯一起缩合，产生N-(Fmoc-Asp(OBu-t)-N'-乙酰基-罗丹明；(c)除去Fmoc基，得到N-(Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；(d)使N-(Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明与Z-(AA)n缩合，产生N-(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；及(e)除去OBu-t保护基，得到N-(Z-(AA)n-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明。32．一种权利要求27的化合物的制备方法，包括(a)使罗丹明与乙酸酐反应，产生N-乙酰基-罗丹明；(b)使N-乙酰基-罗丹明与Z-(AA)n-Asp(OBu-t))缩合，产生N-(Z-(AA)n-Asp(OBu-t))-N'-乙酰基-罗丹明；及(c)除去OBu-t保护基，得到N-(Z-(AA)n-Asp)-N'-乙酰基-罗丹明。33．权利要求31或32的方法，其中-(AA)n为WEH、YVA、LEH、DET、DEV、DEH、VEH、LET、LEV、SHV、DEL、DGP、DEP、DGT、DLN、DEE、DSL、DVP、DEA、DSY、ELP、VED、IEP或IET。34．权利要求1的化合物，其具有通式Ⅸ或其生物学可接受的盐或其前报道分子，其中R1是氢或N端保护基团；R6是一种保护基团，不是氨基酸或氨基酸的衍生物；每个AA独立地为α-氨基酸或β-氨基酸残基，或α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物；n为0-5的整数；m为0-3的整数；R2和R3独立地为氢、甲基或乙基；并且R4和R5独立地为氢或甲基。35．权利要求34的化合物，其中R2、R3、R4和R5为氢。36．权利要求34的化合物，其中R1为H；n=1；(AA)n为M；m为1-2的整数；(AA)m选自GG、GA、AG、G和A。37．权利要求34的化合物，其中该化合物选自N-(GP)-N'-乙氧羰基-罗丹明11O；N-(GPG)-N'-乙氧羰基-罗丹明110；和N-G-N'-辛氧羰基-罗丹明110。38．权利要求34的化合物，其中R7为N端保护基团，选自叔丁氧羰基、乙酰基、己酰基、辛酰基、十二烷酰基和苄氧羰基。39．权利要求34的化合物，其中(AA)n-(AA)m选自SQNY-PIVSEQIDNO:28、ARVL-AEASEQIDNO:29、ATIM-MQRSEQIDNO:30、RQAN-FLGSEQIDNO:31、PGNF-LQSSEQIDNO:32、SFSF-PQISEQIDNO:33、TLNF-PISSEQIDNO:34、AETF-YVDSEQIDNO:35或RKVL-FLDSEQIDNO:36；SQNY-PISEQIDNO:117、ARVL-AESEQIDNO:118、ATIM-MQSEQIDNO:119、RQAN-FLSEQIDNO:120、PGNF-LQSEQIDNO:121、SFSF-PQSEQIDNO:122、TLNF-PISEQIDNO:123、AETF-YVSEQIDNO:124或RKVL-FLSEQIDNO:125；SQNY-PSEQIDNO:126、ARVL-ASEQIDNO:127、ATIM-MSEQIDNO:128、RQAN-FSEQIDNO:129、PGNF-LSEQIDNO:130、SFSF-PSEQIDNO:131、TLNF-PSEQIDNO:132、AETF-YSEQIDNO:133和RKVL-FSEQIDNO:134。40．权利要求34的化合物，其中(AA)n-(AA)m选自LRGGGSEQIDNO:101、LRGGASEQIDNO:102、MRGGGSEQIDNO:96、MRGGASEQIDNO:135、IRGGGSEQIDNO:97、IRGGASEQIDNO:136、LVGGGSEQIDNO:98、LVGGASEQIDNO:137、MVGGGSEQIDNO:99、MVGGASEQIDNO:138、IVGGGSEQIDNO:100、IVGGASEQIDNO:139、LRGGSEQIDNO:55、MRGGSEQIDNO:56、IRGGSEQIDNO:57、LVGGSEQIDNO:58、MVGGSEQIDNO:59和IVGGSEQIDNO:60。41．一种具有通过Ⅵ的化合物或其生物学可接受的盐，其中R2和R3独立地为氢、甲基或乙基；R4或R5独立地为氢或甲基；R6为一种保护基团，不是氨基酸或氨基酸衍生物。42．权利要求41的化合物，其中R2、R3、R4和R5为氢。43．权利要求41的化合物，其中R2和R3是甲基；R4和R5为氢。44．权利要求41的化合物，其中R2和R3是乙基；R4和R5为甲基。45．权利要求41的化合物，其选自N-甲氧羰基-罗丹明110、N-乙氧羰基-罗丹明110、N-己氧羰基-罗丹明110、N-辛氧羰基-罗丹明110、N-癸氧羰基-罗丹明110和N-十二烷氧羰基-罗丹明110。46．权利要求41的化合物，其选自N-二甲基氨基甲酰基-罗丹明110、N-(N-甲基-N-己基氨基甲酰基)-罗丹明110、N-甲磺酰基-罗丹明110、N-(乙硫基)羰基-罗丹明110、N-(己硫基)羰基-罗丹明110、N-(辛硫基)羰基-罗丹明110、N-乙酰基-罗丹明110、N-乙酰基-罗丹明116、N-(2，5，8-三氧杂癸氧羰基)-罗丹明110和N-(2-丁氧基乙氧羰基)-罗丹明110。47．一种方法，用于检测一种或多种细胞中参与细胞凋亡级联的酶，包括(a)在一定条件下使所述一种或多种细胞与根据权利要求1或14的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被该一种或多种细胞吸收，和(b)记录该一种或多种细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，该一种或多种细胞内荧光的变化表明该酶的存在。48．权利要求47的方法，其中该酶是一种胞内胱天肽酶。49．一种方法，用于测定一种或多种细胞中参与细胞凋亡级联的酶的活性，包括(a)在一定条件下使所述一种或多种细胞与根据权利要求1或14的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被该一种或多种细胞吸收，和(b)记录该一种或多种细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，该一种或多种细胞内荧光的相对变化是酶活性的量度。50．权利要求49的方法，其中该酶是一种胞内胱天肽酶。51．一种方法，用于确定试验物质对一种或多种试验细胞中参与细胞凋亡级联的酶是否有影响，包括(a)在一定条件下使所述一种或多种试验细胞与试验物质和根据权利要求1或14的报道化合物相接触，从而使该试验物质或者与外部受体相互作用，或者被该一种或多种细胞吸收，而该报道化合物被该一种或多种细胞吸收，和(b)记录该一种或多种试验细胞的荧光，与只接触该报道化合物的对照细胞相比较，其中与该对照细胞相比，一种或多种细胞内荧光的变化表明该试验物质对该酶有影响。52．权利要求51的方法，其中该酶是一种胞内胱天肽酶。53．根据权利要求51的方法，其中在使所述试验细胞与报道化合物接触之前，使一种或多种试验细胞与试验物质接触。54．根据权利要求51的方法，其中在接触报道化合物之后，使一种或多种试验细胞与所述试验物质接触。55．根据权利要求51的方法，其中使一种或多种试验细胞与所述试验物质和所述报道化合物基本上同时接触。56．根据权利要求51的方法，其中该方法用来确定该试验物质是否能刺激该酶的活性。57．根据权利要求51的方法，其中该方法用来确定该试验物质是否抑制该酶的活性。58．根据权利要求51的方法，其中该接触步骤进一步包括在第一种试验物质存在下使一种或多种试验细胞与至少一种第二种试验物质相接触。59．根据权利要求51的方法，其中该一种或多种试验细胞来源于一种单细胞生物。60．根据权利要求51的方法，其中该一种或多种试验细胞来源于一种多细胞生物。61．根据权利要求60的方法，其中该多细胞生物选自哺乳动物、无脊椎动物、昆虫和植物。62．根据权利要求51的方法，其中一种或多种试验细胞及对照细胞来源于所述多细胞生物的毛发、脑、周围神经系统、眼、耳、鼻、口、扁桃体、牙齿、食道、肺、乳房、心脏、血液、血管、骨髓、淋巴结、胸腺、脾、免疫系统、肝、胃、肠道、胰、内分泌腺及组织、肾、膀胱、生殖器或生殖腺、关节、骨和皮肤。63．根据权利要求51的方法，其中一种或多种试验细胞是癌细胞。64．根据权利要求63的方法，其中所述一种或多种癌细胞来源于所述多细胞生物的脑、周围神经系统、眼、耳、鼻、口、扁桃体、牙齿、食道、肺、乳房、心脏、血液、血管、骨髓、淋巴结、胸腺、脾、免疫系统、肝、胃、肠道、胰、内分泌腺或组织、肾、膀胱、生殖器或生殖腺、关节、骨和皮肤。65．根据权利要求63的方法，其中所述一种或多种试验癌细胞来源于需要用化疗药治疗的人类，而所述试验物质为一种化疗剂。66．根据权利要求51的方法，其中试验物质是一种化疗剂。67．根据权利要求51的方法，其中试验物质是化疗剂的混合物。68．一种方法，用于确定患有癌症的动物对一种或多种化疗剂治疗的敏感性，包括(a)在一定条件下使取自该动物的癌细胞与所述一种或多种化疗剂及根据权利要求1或14的报道化合物相接触，从而使一种或多种药剂或者与外部受体相互作用，或者被该癌细胞吸收，和(b)记录所述癌细胞的荧光，与只接触该报道化合物的对照细胞相比较，其中与该对照细胞相比癌细胞的荧光的变化表明该癌细胞对一种或多种化疗剂是化学敏感的，并且该动物对该治疗敏感。69．权利要求68的方法，其中所述动物为人类。70．一种监测应用一种或多种化疗剂对动物治疗的方法，包括(a)对该动物施用一种或多种化疗剂，(b)在一定条件下将施用后取自该动物的细胞与根据权利要求1或14的报道化合物相接触，从而使所述报道化合物被该细胞吸收，和(c)记录与所述报道化合物接触的该细胞的荧光，与施用前取自该动物的对照细胞相比较，其中与该对照细胞相比，取自该动物的细胞的荧光变化表明该动物对该化疗剂敏感。71．根据权利要求70的方法，其中所述动物患有与凋亡性细胞死亡有关的疾病。72．一种方法，用于确定试验物质是否抑制或阻止一种或多种试验细胞中的细胞死亡，包括(a)在一定条件下使该一种或多种试验细胞与该试验物质及根据权利要求1或14的报道化合物相接触，从而使报道化合物被一种或多种细胞吸收，和(b)记录一种或多种试验细胞的荧光，与只接触报道化合物的对照细胞相比较，其中与该对照细胞相比，一种或多种试验细胞内荧光的减弱表明该试验物质抑制或阻止细胞死亡。73．权利要求72的方法，其中所述一种或多种试验细胞是神经细胞。74．权利要求72的方法，其中所述一种或多种试验细胞选自心肌细胞、免疫细胞、待移植器官的细胞、精子、卵细胞、产生重组蛋白质的细胞系、毛发细胞、皮肤细胞和神经细胞。75．一种方法，用于确定一种试验物质是否能引起或增强一种或多种试验细胞中的细胞死亡，包括(a)在一定条件下使一种或多种试验细胞与试验物质及根据权利要求1或14的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被一种或多种细胞吸收，和(b)记录一种或多种试验细胞的荧光，与只接触报道化合物的对照细胞比较，其中与该对照细胞相比，一种或多种试验细胞内荧光的增强表明该试验物质引起或增强细胞死亡。76．权利要求75的方法，其中所述一种或多种试验细胞是癌细胞、酵母、真菌或细菌。77．一种检测一种或多种细胞中病毒蛋白酶的方法，包括(a)在一定条件下使该细胞与权利要求34的报道化合物接触，从而使报道化合物被该细胞吸收，和(b)记录该细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，该细胞内荧光的变化表明病毒蛋白酶的存在。78．一种测定一种或多种病毒感染的细胞中病毒蛋白酶活性的方法，包括(a)在一定条件下使一种或多种病毒感染细胞与权利要求34的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被一种或多种病毒感染的细胞吸收，和(b)记录该一种或多种细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，一种或多种病毒感染的细胞内荧光的变化是病毒蛋白酶活性的量度。79．一种方法，用于确定试验物质对一种或多种病毒感染的细胞中的病毒蛋白酶活性是否有影响，包括(a)在一定条件下使病毒感染细胞与试验物质及权利要求34的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被该感染的试验细胞吸收，和(b)记录该感染的试验细胞的荧光，与只接触该报道化合物的感染的对照细胞相比较，其中与该感染的对照细胞相比，感染的试验细胞内荧光的变化表明该试验物质对病毒蛋白酶有影响。80．权利要求77-79中任一项的方法，其中该细胞是HIV感染的细胞，病毒蛋白酶是HIV蛋白酶。81．权利要求77-79中任一项的方法，其中该细胞是腺病毒感染的细胞，病毒蛋白酶是腺病毒蛋白酶。82．权利要求77-79中任一项的方法，其中该细胞是HSV感染的细胞，病毒蛋白酶是HSV蛋白酶。83．权利要求77-79中任一项的方法，其中该细胞是HCMV感染的细胞，病毒蛋白酶是HCMV蛋白酶。84．权利要求77-79中任一项的方法，其中该细胞是HCV感染的细胞，病毒蛋白酶是HCV蛋白酶。85．一种测定细胞中蛋白酶或肽酶活性的方法，包括(a)在一定条件下使试验细胞与权利要求34的报道化合物接触，从而使该报道化合物被该试验细胞吸收，或者该报道化合物与该细胞的外膜蛋白酶或肽酶相互作用，和(b)记录该细胞的荧光，其中与未如此接触的对照细胞相比，该试验细胞内荧光的变化是该蛋白酶或肽酶活性的量度。86．一种方法，用于确定试验物质对试验细胞中的蛋白酶或肤酶活性是否有影响，包括(a)在一定条件下使该试验细胞与试验物质及权利要求34的报道化合物相接触，从而使该报道化合物被该试验细胞吸收，或者该报道化合物与该细胞的外膜蛋白酶或肽酶相互作用，和(b)记录该试验细胞的荧光，与只接触该报道化合物的对照细胞相比较，其中与该对照细胞相比，试验细胞内荧光的变化表明该试验物质对该蛋白酶或肽酶有影响。87．权利要求85-86中任一项的方法，其中该细胞是内皮细胞，肽酶是2型甲硫氨酸氨肽酶。88．权利要求85-86中任一项的方法，其中该细胞是T细胞，肽酶是二肽基肽酶Ⅳ。89．权利要求85-86中任一项的方法，其中该细胞是神经元细胞，而蛋白酶是钙激活蛋白酶。90．权利要求85-86中任一项的方法，其中该肽酶是氨肽酶。全文摘要本发明涉及新型荧光染料、新型发荧光及荧光报道分子和新的测定法,这些测定法能用来检测来源于任何活生物或器官的全细胞、细胞系和组织标本中胱天肽酶的活性及参与细胞凋亡的其它酶的活性。这些报道分子及测定法能用于药物筛选方法,用来鉴定在全细胞或组织中作为胱天肽酶级联抑制剂或诱导剂的化合物。此处所述的试剂和测定也能用于确定人癌细胞对化疗药治疗的化学敏感性。本发明也涉及新型发荧光或荧光报道分子及新的酶测定法,它们能用来检测2型甲硫氨酸氨肽酶、二肽基肽酶IV、钙激活蛋白酶、氨肽酶、HIV蛋白酶、腺病毒蛋白酶、HSV－1蛋白酶、HCMV蛋白酶和HCV蛋白酶的活性。文档编号G01N15/14GK1281346SQ98810021公开日2001年1月24日申请日期1998年10月9日优先权日1997年10月10日发明者E·威伯,蔡遂雄,J·F·W·克阿纳,J·A·德里威,张汉忠申请人:西托维亚公司