达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体涉及一种达肝素钠生产过程中硼含量的检测方 法。
【背景技术】
[0002] 肝素类药物是抗凝血药的首选药物，使用历史已有70多年，除具有抗凝血、抗血 栓作用外，还有降血脂等作用，但具有生物利用度低、副作用大等缺陷，限制了肝素在临床 上的应用。近年来具有高抗栓活性和低出血副作用的新一代抗凝药物--低分子量肝素 (LMWH)被开发上市。新一代抗凝药的抗血栓作用优于肝素，而抗凝血作用却低于肝素，并具 有生物利用度高、体内半衰期长、出血倾向小、口服易吸收等特点。除用于治疗血栓病外，还 可抑制动脉粥样硬化，抗肿瘤、抗炎等，且临床应用无需监护，用药便捷。
[0003] 低分子量肝素（LMWH)(RobertJ.Linhardt,PH.D.AndNurSibelGuany，M. S,SeminarinThrombosisandHemostasis, 1999, 25 (3): 5-16)是在分离普通肝素时得到 的一些低分子量组分，或肝素裂解后产生的小分子片段，长度约普通肝素的1/3。LMWH分子 量在3000- 8000Da之间，平均分子量为5000Da左右。与普通肝素相比，通过体内、外实验 发现，在同等剂量下，LMWH的抗凝作用小于肝素，但其体内和体外抗血栓作用明显强于普通 肝素。
[0004] 达肝素钠（Dalt印arinSodium)作为其中的一种低分子肝素，是主要的低分子肝 素之一。它通过对猪肠粘膜肝素亚硝酸钠降解，然后用硼氢化钠还原生成达肝素钠特征结 构6-0-硫酸-2, 5-脱水-D-甘露醇而获得。其中硼氢化钠还原是生产工艺的关键。
[0005] 硼氢化钠的加入会使产品中引入硼元素，硼元素在人体内属于蓄积性毒素，会对 生殖系统和内分泌系统产生毒性，后续工艺中需要除去硼元素，目前在达肝素钠生产过程 中还没有有效的检测硼元素的方法。
【发明内容】
[0006] 本发明针对现有技术的不足，提供了一种达肝素钠生产过程中硼含量的检测方 法，该方法可以简单、快速、准确地监测达肝素钠中硼元素的含量，对下一步的硼元素去除 提供数据支持，从而实现控制达肝素钠成品的硼含量指标的目的。
[0007] 本发明达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法，包括以下步骤：
[0008] (1)测试液的配置：
[0009] 对照液a:配置1% (v/v)的硝酸溶液（blank);
[0010] 对照液b:用1 %的硝酸溶液配置5. 7yg/mL的硼酸溶液（STDMl);
[0011] 对照液c:称取0. 25g肝素钠溶解在2ml水中，再加入100iiL纯硝酸，用水定容至 10mL(STD〇)；
[0012] 线性溶液：称取0. 25g肝素钠溶解在2mL1 %的硝酸溶液中，分别加入2. 0i!L、 4. 0yL、8. 0yL、10. 0yL和12. 0yL的5. 7mg/mL硼酸，再分别用1 %的硝酸溶液定容至 10mL，得到浓度为0. 2ppm的线性溶液1、0. 4ppm的线性溶液2、0. 8ppm的线性溶液3、lppm的线性溶液4和1. 2ppm的的线性溶液5;
[0013] 检测液：取0. 25g样品溶解在2mL水中，加入100i!L硝酸，用水定容至10mL;
[0014] (2)检测并记录检测数据
[0015] 利用电感耦合离子光谱仪，在249. 733nm处对步骤⑴所述检测液、对照液以及线 性溶液做进样检测，记录检测数据；
[0016] (3)处理数据，得出硼元素的含量
[0017] 通过如下公式计算校正因子f:
【主权项】
1. 一种达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 测试液的配置： 对照液a:配置1 % (v/v)的硝酸溶液（blank); 对照液b :用1 %的硝酸溶液配置5. 7 μ g/mL的硼酸溶液（STDm1); 对照液c :称取0.25g肝素钠溶解在2ml水中，再加入100 μ L纯硝酸，用水定容至 IOmL(STD0)； 线性溶液：称取0. 25g肝素钠溶解在2mL 1 %的硝酸溶液中，分别加入2. 0 μ L、4. 0 μ L、 8. 0 μ L、10. 0 μ L和12. 0 μ L的5. 7mg/mL硼酸，再分别用I %的硝酸溶液定容至10mL，得到 浓度为〇. 2ppm的线性溶液1、0. 4ppm的线性溶液2、0. 8ppm的线性溶液3、Ippm的线性溶液 4和I. 2ppm的的线性溶液5 ; 检测液：取〇. 25g样品溶解在2mL水中，加入100 μ L纯硝酸，用水定容至IOmL ; (2) 检测并记录检测数据 利用电感耦合离子光谱仪，在249. 733nm处对步骤（1)所述检测液、对照液以及线性溶 液做进样检测，记录检测数据； (3) 处理数据，得出硼元素的含量 通过如下公式计算校正因子f :
其中，STD1为线性溶液4中硼元素的响应强度，STD ^为对照液c中硼元素的响应强度， STOm1S对照液b中硼元素的响应强度，blank为对照液a中硼元素的响应强度； 通过线性溶液1、线性溶液2、线性溶液3、线性溶液4、线性溶液5,建立硼含量与响应强 度的线性关系，求得线性方程，根据线性方程和检测液响应强度以及校正因子f得出样品 硼含量。
2. 根据权利要求1所述的达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法，其特征在于，所述 肝素钠为依诺肝素钠。
3. 根据权利要求1所述的达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法，其特征在于，步骤 (2)中电感耦合离子光谱仪的泵速为lOOr/min ;辅助气体流速为I. OL/min ;功率为1250W。
【专利摘要】本发明公开了一种达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法，属于生物医药领域，先配置溶液，再利用电感耦合离子光谱仪检测溶液中硼元素的相应强度，最后经过数据处理，得出达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法。本发明达肝素钠生产过程中硼含量的检测方法，该方法可以简单、快速、准确的检测硼的含量，克服了达肝素钠生产过程中无法检测硼元素含量而造成的成品不合格的难题，能够有效的提高产品合格率，大大降低达肝素钠成品的不合格风险和企业的生产成本，同时大大降低了人民群众用药风险；且该方法操作简单，便于工业化推广应用。
【IPC分类】G01N21-73
【公开号】CN104535558
【申请号】CN201410787906
【发明人】周霞, 林勇, 雷晓刚, 郭维, 乔德强, 郭恩中
【申请人】山东辰中生物制药有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月17日