一种检测含中药黄芩的牙膏中黄酮类有效成分含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物提取检测领域。它设及一种牙膏的微量提取检测方法，具体 地说，它设及由分子筛KIT-6作为吸附剂，结合微量基质固相分散萃取技术，用来提取检测 含中药黄琴的牙膏中黄酬类有效成分含量的新方法。
【背景技术】
[000引黄琴本品为唇形禾斗植物黄萃（Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根。 具有清热燥湿、泻火解毒、止血和安胎功效，常用于湿热瘡满、泻频、黄痘、肺热咳嗽、痴肿疮 毒、胎动不安等病症的治疗。临床上单用或与其他中药配伍用于呼吸道感染、急性菌频、病 毒性肝炎等炎性过敏性疾病和妇科疾病等，是中医临床上应用广泛的大宗药材。黄琴是我 国著名的传统中药，历代本草均有记载。黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素是黄琴中主要的生物 黄酬类成分。黄琴巧是黄琴的主要有效成分之一，是黄琴及其制剂的主要质量控制指标成 分。据药理学研究报道，黄琴巧具有抗微生物、抗变态反应、抗肿瘤、降压和镇静、利胆、保肝 和解疫W及调节免疫等作用。
[0003] 目前对牙膏分析的前处理方法，通常W简单的超声萃取为主。该方法虽然简单 易行，但对目标分子的提取效率较为低下，且受基质干扰影响较大，使得分析结果相应较 低。而且该一类方法存在的缺陷也是显而易见；实验过程中使用有毒害的有机溶剂且用量 较大，提取所用时间漫长，提取效率低下，对实验操作人员身体有害，对环境污染严重，背离 "绿色化学"的倡议。
[0004] 为解决上述难题，随着科技的发展，诸多新型提取方法，也应运而生。其中就有基 质固相分散萃取技术。基质固相分散萃取（MSPD)是建立在固相萃取基础上的一种新型样 品处理技术，为近年来国内外研究的一个热口领域，广泛地应用在食品、环境、医药、化工、 商检等领域。
[0005] 当前文献报道的基质固相分散萃取技术，特别是针对天然产物领域，其吸附剂的 量、药材用量和W及洗脱剂的用量较大，且为有毒害的有机溶剂，对操作员的身体有害，对 环境又会造成污染。而常规的基质固相分散萃取技术中，所用到的吸附剂多数W娃胶、弗罗 里娃±、C18反相娃胶等为主。
[0006] 截止目前，W分子筛KIT-6作为洗脱液，并结合基质固相分散萃取技术，在牙膏基 质中的活性成分提取检测方面尚未见报道，该方法对于黄琴牙膏提取检测该一研究领域更 是一片空白。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于寻求一种比常规方法更加快速有效的牙膏提取检测技术，使其 应用于黄琴牙膏提取检测。发明要点在于创造性地将分子筛作为吸附剂，应用在基质固相 分散萃取领域。分子筛作为基质固相分散萃取的吸附剂与基质固相分散混合物中的目标分 子吸附结合，从而使得目标分子从复杂基质中分离出来，得到含有目标分子的洗脱液。且本 发明在一个微量体系中实施，所用药材w及实验药品试剂均在微克级别。
[000引本发明具体提供了一种W分子筛作为吸附剂，结合基质固相分散萃取技术，提取 微量黄琴牙膏中目标分子的方法。可用于提取检测微量牙膏中的黄酬类有效成分。
[0009] 本发明采用的技术方案是：
[0010] 一种检测含中药黄琴的牙膏中黄酬类有效成分含量的方法，所述黄酬类有效成分 为黄琴巧、汉黄琴巧、汉黄琴素中的一种或两种W上，所述方法包括W下步骤：
[0011] 取含中药黄琴的牙膏、分子筛吸附剂、干燥剂无水硫酸钢，加入黄琴混合标样，所 述牙膏、分子筛吸附剂的质量比1 ;1?5 ;所述牙膏、干燥剂的质量比为1 ;1?4,所述黄琴 混合标样为黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素标准品加入甲醇中配制得到的混合标准品溶液， 所述混黄琴合标样中含有的黄琴巧、汉黄琴巧或汉黄琴素的质量与牙膏的质量比各自独立 为0. 05?0. 2mg/g，上述物质混合后加入研鉢中研磨，得到研磨后的固体混合物；取固相萃 取柱，固相萃取柱的底部加入筛板，将研磨后的固体混合物加入固相萃取柱中，填料填实后 顶部再加入筛板，将填好的固相萃取柱置于固相萃取仪上，取洗脱剂，注入固相萃取柱内， 打开固相萃取仪的抽气累，对固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，洗脱结束后，将洗脱液祸 旋、离屯、，取上层清液即为黄酬类有效成分提取液；取黄酬类有效成分提取液用超高效液相 色谱仪采样分析，得到黄酬类有效成分提取液的液相色谱图；
[0012] 然后W黄琴巧的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照黄酬类有效成分提取液 同样条件用超高效液相色谱仪检测，获得黄琴巧对照品的液相色谱图，W黄琴巧对照品的 进样量为横坐标，W黄琴巧对照品的液相色谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标制作黄琴巧标 准曲线，按同样方法制作汉黄琴巧和汉黄琴素的标准曲线；根据黄酬类有效成分提取液的 液相色谱图中各色谱峰的峰面积及各成分的标准曲线，计算得到黄酬类有效成分提取液中 总的黄琴巧、汉黄琴巧、汉黄琴素的含量，分别扣除黄琴混合标样中各成分的含量后，得到 黄酬类有效成分提取液中提取自牙膏的各成份的含量，相应换算得到含黄琴的牙膏中黄琴 巧、汉黄琴巧、汉黄琴素的含量。
[0013] 所述分子筛吸附剂优选KIT-6。
[0014] 本发明所述分子筛KIT-6可按照下面方法合成：
[0015] 85g浓盐酸（35wt%)溶解在682g水中，加入30g P123(聚环氧己烧-聚环氧丙 烧-聚环氧己烧S嵌段共聚物）溶解，后加入34g正了醇，再加入447g娃酸钢溶液，所述娃 酸钢溶液中的成分为点Owt %的二氧化娃、1. 6wt %的氧化钢和93. 4wt %的水，在298K下 磁力揽拌1天，揽拌结束后在298K下静置1天，过滤、滤饼洗漆、干燥即得分子筛KIT-6。
[0016] 上述步骤在 Jo, Qiangbum ;Kim, Kyoungsoo ;Ryoo,等.Syntheses of hi曲 quality KIT-6and SBA-15mesoporous silicas using low-cost water glass, through rapid quenching of silicate struc-ture in acidic solution[J]. Microporous And Mesoporous Materials, 2009, 124(1-3) :45-51.中已经提及，是本领域技术人员公知的方 法。
[0017] 本发明所述牙膏和分子筛吸附剂的质量比为1:1?5,优选为1:4。
[0018] 所述牙膏和干燥剂的质量比为1:1?4,优选为1:2。
[0019] 本发明所述研磨时间为30?90s，优选为60s。
[0020] 本发明所述固相萃取柱有不同体积规格，根据牙膏和分子筛吸附剂、干燥剂等研 磨后的固体混合物的体积量来选择合适体积的固相萃取柱即可，该是本领域技术人员公知 的。
[0021] 所述洗脱剂为甲醇、己膳、丙酬或己酸己醋，优选为甲醇。
[0022] 所述洗脱剂的体积用量优选W牙膏的质量计为0. 016?0. 028mL/mg，优选 0. 02血/mg。
[002引 所述离屯、优选在13000巧min离屯、5min。
[0024] 本发明方法中，黄琴混合标样为黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素标准品加入甲醇中 配制得到的混合标准品溶液，加入黄琴混合标样是为了更好地排除牙膏基质对活性成分的 干扰，得到更加明显的色谱峰，特别对于牙膏中浓度较低的有效成分，能够更准确有效的检 测到实际浓度。
[0025] 该是本领域技术人员常用的手段。
[0026] 所述黄琴混合标样中含有的黄琴巧、汉黄琴巧或汉黄琴素的质量与牙膏的质量比 各自独立为0. 05?0. 2mg/g，一般黄琴混合标样中黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素的浓度可 W不相同，但一般优选黄琴混合标样中黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素为相同的质量浓度，便 于后续换算。
[0027] 进一步，所述黄琴混合标样中含有的黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素的质量各自与 牙膏的质量比均为0. Img/g。
[002引更进一步，优选所述黄琴混合标样中黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素的浓度各自均 为 50 y g/mL。
[0029] 进一步，本发明方法针对微量牙膏样品，优选按W下步骤操作：
[0030] 称取黄琴牙膏25mg、IQT-eiOOmg、无水硫酸钢50mg，加入50 y L黄琴混合标样，所 述黄琴混合标样中黄琴巧、汉黄琴巧和汉黄琴素的浓度各自均为50 yg/mU将上述物质混 合加入研鉢中研磨60s，得研磨后的固体混合物；取ImL规格的固相萃取柱，固相萃取柱的 底部加入筛板，将研磨后的固体混合物加入固相萃取柱中，填料填实后顶部再加入筛板，将 填好的固相萃取柱置于固相萃取仪上，取〇.5mL的甲醇，注入固相萃取柱内，打开固相萃取 仪的抽气累，对固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，洗脱结束后，将洗脱液祸旋10s后放入 离屯、仪中，13000巧m离屯、5min，取上层清液即为黄酬类有效成分提取液；取黄酬类有效成 分提取液用超高效液相色谱仪采样分析，得到黄酬类有效成分提取液的液相色谱图；
[0031] 然后W黄琴巧的对照品配制不同浓度的对照品溶液，按照黄酬类有效成分提取液 同样条件用超高效液相色谱仪检测，获得黄琴巧对照品的液相色谱图，W黄琴巧对照品的 进样量为横坐标，W黄琴巧对照品的液相色谱图中色谱峰的峰面积为纵坐标制作黄琴巧标 准曲线，按同样方法制作汉黄琴巧和汉黄琴素的标准曲线；根据黄酬类有效成分提取液的 液相色谱图中各色谱峰的峰面积及各成分的标准曲线，计算得到黄酬类有效成分提取液中 总的黄琴巧、汉黄琴巧、汉黄琴素的含量，分别扣除黄琴混合标样中各成分的含量后，得到 黄酬类有效成分提取液中提取自牙膏的各成份的含量，相应换算得到含黄琴的牙膏中中黄 琴巧、汉黄琴巧、汉黄琴素的含量。
[0032] 本发明检测微量的黄琴牙膏中的黄酬类有效成分的检测限可达黄琴巧0. 0385ng， 汉黄琴巧0. 〇359ng，汉黄琴素0. 017化g，对微量样品具有很好的提取检测效果。
[0033] 本发明的优点在于；
[0034] 1.本发明方法属首次W分子筛KIT-6作为吸附剂应用在基质固相分散萃取领域， 具有独创性，在国内外的期刊专利中，均未报道使用该材料作为吸附剂的案例，并且将该方 案应用到牙膏的提取检测中，亦属首例。
[0035] 2.本方法采用了微量体系下进行提取检测，采用的牙膏、吸附剂、洗脱剂的用量 极低，可使得该发明可应用在痕量测定领域。尤其是本发明的方法使用的有机溶剂用量仅 0. 5mU该就使得该技术方案对操作人员的毒害极低，对环境的污染也降低至几乎为零。
[0036] 3.本发明所述的分子筛KIT-6具备一系列优异突出的的物理化学性质；首先是对 人体和环境的无毒害、无污染，完全符合"绿