乳癌的鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及新型的乳癌标志物，及检测该标志物并根据其结果来鉴定（诊断、筛 查）乳癌的方法，及用于该鉴定的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 目前，作为乳癌的诊断方法，有借助检测体液、血液等试样中的乳癌标志物的诊 断，或借助乳房造影术的诊断。
[0003] 就通过检测乳癌标志物诊断乳癌的方法而言，是将癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA)作为标志物，用诊断试剂盒等测定试样中的量后，根据其结果来诊断乳癌。然 而，该方法在显示乳癌特异性的精确度方面有欠缺，还没有成为实用性的乳癌确定诊断。
[0004] 并且，在日本特开2002-131322号公报（专利文献1)中公开了将受试者的乳腺导 管液用作为试样，通过检测乳腺导管液中的成分来鉴定具有乳癌或乳腺癌前病变的患者的 方法。然而，该文献中虽然记载了包括细胞外基质蛋白或载脂蛋白在内的多个候选标志物， 但只是罗列了候选标志物，并未进行乳癌患者乳腺导管液中的成分分析。因此，根据专利文 献1的公开内容，并不能确定所列举的多个标志物作为乳癌标志物是否真正有用的问题。
[0005] 并且，在日本特表2008-502891号公报（专利文献2)中记载了以下技术方案，即， 用LC-ESI-MS/MS(液相色谱-电喷射离子化-串联质谱分析）分析乳癌患者的组织片，选 择FTOQ (Peroxiredoxin-1，过氧化物还原酶1)作为乳癌的候选标志物，及对乳癌患者的血 清中的PXD1进行了检测。并且，对于通过并用roxi和其他标志物来诊断乳癌的问题也做了 提示。然而，对于显示这些标志物是乳癌特异性的证据，例如，对于来自非乳癌受试者的试 样中的这些标志物的测定结果等没有做公开。因此，对于roxi作为乳癌标志物是否有用， 及其与其他标志物的组合对于乳癌的诊断是否有用的问题并没有得到确认。
[0006] 并且，就使用乳房造影术的乳癌的诊断方法而言，会给检查的被检查者（受试者） 带来不少精神及肉体上的痛苦。并且，由于乳腺密度高的青年人群的造影困难，因此还没有 成为精确度高的乳癌诊断技术。
[0007] 此外，近年来，有关生物标志物（蛋白质/多肽、脂质、糖链等）的探索的研宄变得 活跃，尤其是与疾病相关的利用各种体液的蛋白质组学等系统性分析研宄得以普遍展开。 通过这些分析，能够对取自生物体的微量试样进行高灵敏度且精确的分析。在F. Mannello et al. Expert Rev.Proteomics 6,43-60(2009)(非专利文献1)中，对于利用蛋白质组分析 方法进行乳癌标志物的研宄的情况进行了介绍。然而，就作为乳癌标志物而言，目前还没有 确定乳癌诊断精确度高的乳癌标志物。
[0008] 现有技术文献
[0009] 专利文献
[0010] 专利文献1 :日本特开2002-131322号公报
[0011] 专利文献2 :日本特表2008-502891号公报
[0012] 非专利文献
[0013]非专利文献1 :F. Mannello et al. Expert Rev. Proteomics 6, 43-60 (2009)
【发明内容】
[0014] 发明要解决的问题
[0015] 由于现有的乳癌诊断方法存在如上所述的问题，乳癌检查、受诊率得不到提高，延 迟了早期乳癌及乳癌的诊断，其结果，乳癌罹患率及乳癌死亡率的降低变得困难，并成为了 大的社会问题。为了解决这些问题，目前对于用更为低侵袭且精确度高的乳癌标志性蛋白 质作为乳癌诊断的指标的、新型的乳癌诊断技术的开发提出了要求。
[0016] 本发明的目的在于提供对于乳癌的检测有用的新型的乳癌标志物，及通过检测该 乳癌标志物得以实现的精确度高的、新型的乳癌鉴定方法。
[0017] 解决问题的方法
[0018] 出于解决上述问题的目的，本发明采用了以下的技术方案。
[0019] 1) -种乳癌标志物，该乳癌标志物选自由羧肽酶N2 (Carboxypeptidase N subunit 2)、细胞外基质蛋白1、血清淀粉样蛋白P成分、伴肌动蛋白、补体成分C8a链、载 脂蛋白L1、黄素还原酶、过氧化氢酶、碳酸酐酶2(Carbonic anhydrase 2)、载脂蛋白C-I、 核孔糖蛋白210、超氧化物歧化酶[Cu-Zn] (Superoxide dismutase[Cu_Zn])、二磷酸甘油酸 变位酶（Bisphosphoglycerate mutase)、碳酸酐酶 1 (Carbonic anhydrase 1)、及过氧化物 还原酶2(Peroxiredoxin_2)构成的群组。
[0020] 2) -种乳癌的鉴定方法，该方法检测在由试样中的羧肽酶N2、细胞外基质蛋白1、 血清淀粉样蛋白P成分、伴肌动蛋白、补体成分C8 a链、载脂蛋白L1、黄素还原酶、过氧化 氢酶、碳酸酐酶2(Carbonic anhydrase 2)、载脂蛋白C-I、核孔糖蛋白210、超氧化物歧化 酶[Cu_Zn] (Superoxide dismutase[Cu_Zn])、二磷酸甘油酸变位酶、碳酸酐酶 1 (Carbonic anhydrase 1)、及过氧化物还原酶2构成的群组中任意选择的一种以上的乳癌标志物，根 据其结果进行鉴定。
[0021] 3) -种试剂盒，该试剂盒是为了鉴定乳癌而对乳癌标志物进行检测的试剂盒，包 含对选自由羧肽酶N2、细胞外基质蛋白1、血清淀粉样蛋白P成分、伴肌动蛋白、补体成分 C8a链、载脂蛋白L1、黄素还原酶、过氧化氢酶、碳酸酐酶2(Carbonic anhydrase 2)、载脂 蛋白 C-I、核孔糖蛋白 210、超氧化物歧化酶[Cu-Zn] (Superoxide dismutase[Cu_Zn])、二 磷酸甘油酸变位酶、碳酸酐酶1 (Carbonic anhydrase 1)、及过氧化物还原酶2构成的群组 中的乳癌标志物进行检测的试剂。
[0022] S卩，为了确立解决上述问题的、乳癌诊断的精确度高的乳癌标志物及使用该标志 物的乳癌的鉴定方法，本发明人进行了潜心研宄，从而将可以直接获得乳癌发病部位、即乳 管内的信息的乳头分泌液（Nipple discharge, ND)作为试样，通过应用借助了最新的二维 液相色谱（LC)/质量分析（MS)系统、即纳米LC-ESI-MS/MS的蛋白质组学，对含有多种成分 的乳头分泌液中的成分进行了分析。随后，将来自乳癌患者的乳头分泌液和来自非乳癌受 试者的乳头分泌液用作为试样，通过比较纳米LC-ESI-MS/MS的结果，筛选出了有望作为乳 癌标志物的新的标志物。进而发现，将这些标志物用作为指标时，能够高精确度地鉴定乳 癌，从而完成了本发明。
[0023] 发明的效果
[0024] 利用了本发明的乳癌标志物的鉴定方法使精确度更高的乳癌鉴定（诊断、筛查） 成为了可能。并且，作为本发明的乳癌标志物，例如，在乳头分泌液中即可发现，因此，能够 非侵袭性地且简便地鉴定（诊断、筛查）乳癌。
【附图说明】
[0025] 图1示出了对实施例1中得到的、来自乳癌患者及非乳癌受试者的试样中的各种 蛋白质成分进行检测的结果、及据此得出的统计结果，其中，1)表示羧肽酶N2的测定结果， 2)表示细胞外基质蛋白1的测定结果，3)表示对血清淀粉样蛋白P成分的测定结果。
[0026] 图2示出了对实施例1中得到的、来自乳癌患者及非乳癌受试者的试样中的各种 蛋白质成分进行检测的结果、及据此得出的统计结果，其中，1)表示伴肌动蛋白的测定结 果，2)表示补体成分C8 a链的测定结果，3)表示载脂蛋白L1的测定结果。
[0027] 图3示出了对实施例1中得到的、来自乳癌患者及非乳癌受试者的试样中的各种 蛋白质成分进行检测的结果、及据此得出的统计结果，其中，1)表示黄素还原酶的测定结 果，2)表示过氧化氢酶的测定结果，3)表示碳酸酐酶2 (Carbonic anhydrase 2)的测定结 果。
[0028] 图4示出了对实施例1中得到的、来自乳