一种乌鸡白凤片中有效成分的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医疗领域，尤其是涉及中药有效成分的检测方法。
【背景技术】
[0002] 乌鸡白凤片由乌鸡、人参、白巧、丹参、当归等二十味中药组成，具有补气养血、调 经止带的功效，主治气血两亏引起的身体瘦弱，腰酸腿软，阴虚盗汗，经血不调，子宫虚寒， 行经腹痛，崩漏带下，产后失血等症。研究表明，乌鸡白凤片可降低大鼠甘油H醋及氧化低 密度脂蛋白、阻止动脉硬化有防治骨质酥松，保护肝脏等作用，对阿尔茨海默病具有潜在的 药用价值。因此，乌鸡白凤片的临床应用越来越广，目前国内生产的厂家也越来越多。为了 控制乌鸡白凤片质量，2005年药典也有含量测定方法和标准，也有文献报告乌鸡白凤中丹 参丽、丹参素或巧药巧含量测定的方法。由于乌鸡白凤片是由20味药材制备而成，有效成 分复杂多样性，现有技术含量都是测定其中一种成分，至今为止，还没有同时测定多种成分 的检测方法出现，尤其是一种同时对巧药巧和甘草巧定量定性的检测方法。因此，为全面提 高其产品质量，一种方法可W检测多种成分并操作简单，易于产业化日常检验的质量测定 方法是迫在眉睫的。
【发明内容】
[0003] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种乌鸡白凤片有效成分的检测方法，该 方法专属性强，灵敏度高，准确可靠，操作简单并适应产业化的日常检验。
[0004] 本发明是通过W下技术方案实现的：
[0005] -种乌鸡白凤片有效成分检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0006] (1)巧药巧、甘草巧定量测定方法；
[0007] (2)巧药巧、甘草巧、香附定性检测方法：
[0008] 上述步骤（1)中所述的巧药巧、甘草巧用高效液相色谱法同时测定含量，包括步 骤为；a、对照品制备；b、供试品制备；C、高效液相色谱法；
[0009]上述步骤（2)中所述巧药巧、甘草巧采用薄层色谱法同时检测，香附采用薄层色 谱法单独检测。
[0010] 上述步骤（1)中所述的巧药巧、甘草巧含量测定方法，包括如下步骤：
[0011] (a)对照品制备；分别取巧药巧、甘草巧对照品用50-95%己醇或甲醇或流动相溶 解，即得；
[0012] 化）供试品制备；取乌鸡白凤片样品，用50-95%己醇或甲醇或流动相提取，即得。
[0013] (C)高效液相色谱法；色谱条件如下
[0014] 色谱柱C185u250*4. 6mm、流动相：己膳-甲醇-酸溶液、波长；235皿、流速： 1. 0-1. 5ml / min。
[0015] 上述步骤a中优选巧药巧对照品浓度是甘草巧对照品溶度3-5倍，优选巧药巧对 照品浓度为19-20ug / ml,甘草巧对照品溶度为4-6ug / ml。
[0016] 上述步骤b中，优选样品中70%己醇超声提取30-60min，放冷，称重，再用70%己 醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0017] 上述步骤a、c所述流动相为己膳-甲醇-酸10-15 ;3-8 ;75-87。优选为己膳-甲 醇-酸13 : 5 : 82。所述流动相中酸为醋酸、磯酸或甲酸，浓度为0.05-0. 12%，优选为醋 酸，浓度为0. 1 %。此处酸浓度是经过大量试验筛选出的结果，酸浓度过高PH值低，对色谱 柱损伤较大，酸浓度过低则分离不完全。
[0018] 本发明上述步骤（2)中香附的薄层检测方法如下，
[0019] a、供试品溶液制备；取乌鸡白凤片样品，照挥发油测定法，在挥发油测定器中用己 酸己醋：水=1 : 150提取蒸觸2-5小时，取己酸己醋层作为供试品溶液；
[0020] b、对照品溶液的制备；取a -香附丽对照品，加己酸己醋溶解，即得对照品 [002。 溶液；
[0022] C、照薄层色谱法：取对照品和供试品溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，W甲 苯-己酸己醋=8-10 : 1-2为展开剂，展开，取出，瞭干后，置于紫外灯下检视，后喷W二硝 基苯脱试液显色，斑点澄红色。
[0023] 上述步骤a中供试品制备：所述挥发油测定器中加入300ml水，然后再加入己酸己 醋2ml，富集挥发油，取己酸己醋层即可。
[0024] 上述步骤C中展开剂甲苯-己酸己醋9.5 : 1.5。
[0025] 本发明步骤（2)中巧药巧和甘草巧的定性检测方法，步骤如下
[0026] a、供试品溶液制备；取本品加甲醇提取，滤过，残渣加水溶解，正下醇萃取，取正下 醇液蒸干，残渣甲醇溶解即得；
[0027] b、取甘草巧对照品，加甲醇溶解，作为甘草巧对照品溶液；甘草对照药材溶液的制 备：取甘草对照药材，按照步骤a供试品溶液制备方法制备，作为甘草对照药材溶液；
[0028] C照薄层色谱法；吸取上述溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，氯甲焼-己 酸己醋-甲醇-水低温W下放置的下层为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W 10%硫酸己醇溶 液，加热至斑点显色清晰，在日光及紫外光灯（365nm)下观察，巧药巧显示紫色斑点，紫外 光灯（365nm)下检视，在与甘草巧和甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英光 斑点。
[0029] 上述步骤a中供试品制备：优选样品先用己離、石油離、氯仿等除醋再甲醇提取。 最佳为取本品，研细，加己離超声处理10-30分钟，静置，倾去上清液，药渣挥干己離，加甲 醇超声处理10-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加正下醇振摇提取2-5次，每次 10-30ml，合并正了醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。
[0030] 上述步骤C中优选展开剂为；氯甲焼-己酸己醋-甲醇-水 15 : 40 : 22 : lOlCrCU下放置的下层。
[0031] 本发明所述的乌鸡白凤片是由下述重量份的原药材制备得到的：
[0032] 乌鸡5-15份、鹿角胶100-110份、醋整甲50-60份、锻牡顿30-50份、桑螺峭50-60 份、人参100-110份、黄茂20-30份、当归120-130份、白巧100-110份、醋香附100-110份、 天冬50-60份、甘草20-30份、地黄200-220份、熟地黄200-220份、川写50-60份、银柴胡 20-30份、丹参100-110份、山药100-110份、巧实炒50-60份、鹿角霜30-50份.
[0033] 本发明所述的乌鸡白凤片，优选是由下述重量份的原药材制备得到的：
[0034] 乌鸡5-10份、鹿角胶108份、醋整甲54份、锻牡顿40份、桑螺峭40份、人参108 份、黄茂27份、当归122份、白巧108份、醋香附108份、天冬54份、甘草27份、地黄215份、 熟地黄216份、川写54份、银柴胡22份、丹参108份、山药108份、巧实炒54份、鹿角霜40 份。
[0035] 本发明的乌鸡白凤片按照现有技术制备，优选是按照下述制备方法获得的：
[0036] W上二十味，山药、鹿角胶分别粉碎成细粉，香附提取挥发油，乌鸡切成小块，加水 煎煮1小时，趁热加入适量的固体石蜡，揽拌使其融化，静置，弃去上层蜡及油脂固体，煎液 揽拌成匀浆，加入适量的木瓜蛋白酶，揽拌，水解5小时，煮沸5分钟，离也，取上清液，减压 浓缩成稠膏，减压干燥成干膏，整甲加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并 滤液，减压浓缩成稠膏，再减压干燥成干膏，人参，白巧，甘草，天冬加水煎煮二次，每次1小 时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1. 07 (5(TC )，通过D101大孔树脂，用5倍量水 洗脱，弃去水液，再用90%己醇洗脱至洗脱液无皂巧反应为止，洗脱液减压回收己醇并浓缩 致稠膏状，再减压干燥成干膏。丹参、黄茂、银柴胡、川写、当归、桑螺峭用75%己醇回流提取 二次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收己醇并浓缩，减压干燥成干膏，其余牡顿等五 味子加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为 1. 28-1. 33(6(TC )的清膏，加己醇至含醇量达到60%，静置，滤过，滤液减压回收己醇并浓 缩成稠膏，再减压干燥成干膏