，将上述干膏与山药和鹿角胶的细粉及适量微晶纤维素混合， 粉碎成细粉，过筛，制成颗粒，混匀，干燥，喷加香附挥发油，混匀，闷润，加入适量硬脂酸镇， 制成1000片.
[0037] 试验例1、巧药巧、甘草巧的含量测定方法学验证
[00測 1仪器设备
[0039] 1200Series高效液相色谱仪，美国Agilent公司生产
[0040] UbAlliancel500型高效液相色谱仪，美国Alltech公司生产
[0041]MS105型十万分之一电子天平，德国METTLER公司生产
[0042] AL204IC型万分之一电子天平，德国METTLER公司生产
[0043] 皿10260B型超声仪，天津恒奧科技有限公司生产
[0044] DH-201型电热恒温干燥箱，天津中环实验电炉有限公司生产
[0045] WFH-201B型紫外透射反射仪，上海精科实业有限公司生产 [004引 2试剂试药
[0047] 乌鸡白凤片（批号D110084)，天津乐仁堂制药厂提供
[0048] a -香附丽对照品（批号110748-201111)购自中国食品药品检定研究院
[0049] 巧药巧对照品（批号110736-200934)购自中国食品药品检定研究院
[0050] 甘草巧对照品（批号111610-200604)购自中国食品药品检定研究院
[0051] 甘草对照药材（批号120904-200914)购自中国食品药品检定研究院
[0052] 硅胶GF254薄层板（批号20111208)青岛海洋化工厂分厂生产
[0053] 硅胶G薄层板（批号20120208)青岛海洋化工厂分厂生产
[0054] 甲醇、己膳为色谱纯，水为纯水，其他试剂为分析纯。
[00对 1含量测定
[0056] 1. 1巧药巧及甘草巧
[0057] 1. 1. 1试验溶液的制备
[005引巧药巧对照品的制备：取巧药巧对照品约lOmg，精密称定，置50ml容量瓶中，加70%己醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（C=194.llug/ml)。精密量取上述溶液1ml，置10ml 容量瓶中，加70%己醇稀释至刻度，摇匀，即得（C=19.41ug/ml)。
[0059] 甘草巧对照品的制备：取甘草巧对照品约12mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加 70 %己醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（C=120. 7ug/ml)精密量取上述溶液1ml，置25ml 容量瓶中，加70%己醇稀释至刻度，摇匀，即得。（C=4.828ug/ml)
[0060] 供试品溶液的制备；取本品（批号D110084)约Ig，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加入70 %己醇50ml，称定重量，超声处理45mim，放冷，再称定重量，用70 %己醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0061] 阴性样品溶液的制备：按照处方及工艺，分别制备白巧和甘草的阴性样品，按供试 品溶液制备方法制备阴性样品溶液。
[0062] 1. 1. 2色谱条件
[0063]色谱柱；AgilentEclipseXDB-C185u250*4. 6mmSN;USN册21255
[0064] 流动相：己膳-甲醇-0. 1%醋酸（13 ;5;蝴柱温；3(TC
[0065]波长；235nm
[0066]流速；1.0ml / min
[0067] 1. 1. 3专属性试验
[0068] 分别精密取上述对照品溶液、阴性样品溶液及供试品溶液各lOul，注入高效液相 色谱仪，按照"1. 1.2"中色谱条件测定。见图1-5。
[006引如图所示，巧药巧对照品和甘草巧对照品保留时间分别为11. 6min和19. 9min，乌 鸡白凤片供试品在相应位置均有相对应的色谱峰，阴性样品无干扰。巧药巧及甘草巧峰理 论培板数分别为5262、3596,分离度分别为3. 96、5. 53。测得巧药巧及甘草巧含量分别为 1. 98mg / g>0. 22mg / g0
[0070] 1.1. 4加样回收试验
[0071] 精密量取"1. 1. 1"中的巧药巧对照品（C=194. 1 lug / ml)溶液10ml和甘草巧对 照品（C=120. 7ug / ml)溶液2ml置于同一 100ml量瓶中，用70%己醇稀释并定容至刻度， 摇匀，即得。
[0072] 供试品溶液的制备；取取本品（批号D110084)约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入上述混合对照品溶液50ml，称定重量，超声处理45mim，放冷，再称定重量，用 70%己醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
[0073] 分别精密取上述供试品溶液及"1. 1. 1"中对照品溶液各lOul，注入高效液相色谱 仪，按照"1.1. 2"中色谱条件测定。结果见表2
[0074] 表1乌鸡白凤片含量测定加样回收预实验（巧药巧）
[00巧]
【主权项】
1. 一种乌鸡白凤片有效成分芍药苷、甘草苷含量测定方法，包括如下步骤： a、 对照品制备：分别取芍药苷、甘草苷对照品用50-95%乙醇或甲醇或流动相溶解，即 得； b、 供试品制备：取乌鸡白凤片样品，用50-95%乙醇或甲醇或流动相提取，即得。 c、 高效液相色谱法：色谱条件如下 色谱柱C185u250*4. 6mm、流动相：乙腈-甲醇-酸溶液、波长：235nm、流速： 1. 0-1. 5ml / min。
2. 如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于：所述的步骤a中选用70 %乙醇提 取。
3. 如权利要求2所述的含量测定方法，其特征在于：所述的步骤c流动相为乙腈-甲 醇-酸 10-15 :3-8 :75-87。
4. 如权利要求3所述的含量测定方法，其特征在于：所述的步骤c流动相为乙 腈-甲醇-酸13 : 5 : 82。
5. 如权利要求3或4所述的含量测定方法，其特征在于：所述的步骤c流动相中酸为 醋酸、磷酸或甲酸。
6. 如权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于，所述酸浓度为0. 05-0. 12%。
7. 如权利要求6所述的含量测定方法，其特征在于，所述酸浓度为0. 1 %。
8. 如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于：所述的乌鸡白凤片是由下述重量 份的原药材制成，乌鸡5-15份、鹿角胶100-110份、醋鳖甲50-60份、煅牡蛎30-50份、桑 螵蛸50-60份、人参100-110份、黄芪20-30份、当归120-130份、白芍100-110份、醋香附 100-110份、天冬50-60份、甘草20-30份、地黄200-220份、熟地黄200-220份、川芎50-60 份、银柴胡20-30份、丹参100-110份、山药100-110份、芡实炒50-60份、鹿角霜30-50份.
9. 如权利要求8所述的含量测定方法，其特征在于，是由下述重量份的原药材制备得 到的： 乌鸡5-10份、鹿角胶108份、醋鳖甲54份、煅牡蛎40份、桑螵蛸40份、人参108份、黄 芪27份、当归122份、白芍108份、醋香附108份、天冬54份、甘草27份、地黄215份、熟地 黄216份、川芎54份、银柴胡22份、丹参108份、山药108份、芡实炒54份、鹿角霜40份。
【专利摘要】本发明涉及乌鸡白凤片有效成分的检测方法，其包括如下步骤(1)芍药苷和甘草苷定量检测；(2)香附、芍药苷和甘草苷的定性检测，该方法专属性良好，灵敏度高，并能够可靠检验成品质量，适合产业化日常检验。
【IPC分类】G01N30-90, G01N30-02
【公开号】CN104749265
【申请号】CN201310744005
【发明人】王磊, 金兆祥, 王琳, 张宇
【申请人】天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2013年12月27日