确定母体健康风险的方法
【专利说明】
[OOOU 本申请为国际申请日2010年4月23日、国际申请号PCT/FI2010/050336于2011 年10月18日进入中国国家阶段、申请号201080017050.0、发明名称"确定母体健康风险的 方法"的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明设及可W在体外执行的、根据生物样品的分析来确定母体健康风险的方 法。更具体而言，本发明设及用于确定孕妇发生高血压疾病、更具体为妊娠高血压或晚发型 先兆子痛的风险的方法。
【背景技术】
[0003] 在全世界，高血压疾病例如妊娠高血压佑H)和先兆子痛（P巧影响所有妊娠中的 10% W上。先兆子痛影响约2-8%的妊娠，是孕产期死亡和发病的重要原因。最近，对与该 些疾病相关的生物物理变化进行了研究并发表了理论。根据该理论，认为PE是导致胎盘缺 氧的母体子宫螺旋动脉的滋养层细胞侵袭受损，W及引起血小板和内皮细胞活化和损伤的 炎性因子的释放的结果。此外，据信细胞因子参与胎儿胎盘的发育，并已提出它们是能够损 伤内皮细胞并造成许多与PE相关的病理生理变化的胎盘因子。
[0004] 尽管研究表明不同的生物物理和生物化学指标与高血压疾病相关，但目前还没有 采取常规筛查方法使用母体血样对先兆子痛进行早期检测。如果GH和PE的发生可W更早 检测到，在许多情况下，能获得更好的结果，包括严重性降低W及甚至复原。在妊娠期间，在 早期和晚期阶段，需要可靠的发生PE的风险评估方法W降低孕妇、婴儿或两者的不利健康 结果的可能性。
[0005] 目前通用的风险评估是基于产科病史（例如W前的阳）和母体特征（例如种族和 母体体重），它只能W 5-10%的假阳性率鉴定约30的早发型阳病例灯u，C.等，Am J化stet Gynecol. 2005 ; 193:429-36)。化等提出了使用超声波和母体因素的组合来增加随后发生 先兆子痛的女性的鉴定。然而，执行超声波检查依赖于参与的卫生护理人员的技术，并需要 孕妇在医疗检查期间到场。
[0006] 目前认识到，母体样品中存在的许多生物标志物与先兆子痛相关。已经建议 使用胎盘生长因子（P1GF)来评估孕妇发生阳的风险扣Itrasound化stet Gynecol 32:732-739)。尽管PIGF作为先兆子痛的可靠标志物已经得到一定程度的接受，但希望能 够建立特异性和预测能力更高的可选和其他标志物。
[0007] 尽管已经研究了某些单一标志物预测妊娠相关并发症的能力，但对于为妊娠个体 在妊娠晚期阶段发生高血压疾病提供早期风险评估的方法，仍存在着需求。
[000引此外，对于可W在体外执行的、根据生物样品的分析来确定风险的方法，存在着需 求。
[0009] 此外，对于可W在妊娠前=个月中执行的、根据生物样品的分析来确定风险的方 法，存在着需求。
[0010] 此外，对于在妊娠个体中确定高血压疾病、更具体为妊娠高血压或晚发型先兆子 痛的风险的方法，也存在着需求，所述方法在单一筛查中具有改进的检出率。
[0011] 此外，对于从群体中鉴定W筛选在妊娠晚期发生高血压疾病的风险增加的妊娠个 体，W进一步监测并进行可能的治疗的筛查方法，存在着需求。
[0012] 此外，对于根据单一筛查确定风险评估的方法存在着需求，所述单一筛查能够提 供高血压疾病例如妊娠高血压、晚发型先兆子痛和早发型先兆子痛之间的差异。
【发明内容】
[0013] 本发明提供了可用于确定妊娠个体发生妊娠性高血压疾病或病症例如妊娠高血 压、早期先兆子痛、晚期先兆子痛和相关疾病的风险的方法。在本文中描述了生物化学标志 物与相关临床群体研究的几种有用组合。此外，在本文中提出了某些生物化学标志物组可 用于在单一筛查中确定多种高血压疾病的风险。如实施例1中所述，P1GF、活化素A和P-选 择素的组合可用于确定晚期先兆子痛的风险，而该些标志物的子集P1GF和活化素A可用于 确定妊娠高血压的风险，并且单一标志物P1GF与生物物理标志物的组合可用于确定早期 先兆子痛的风险。
[0014] 本文提供了用于在妊娠个体中确定晚发型先兆子痛风险的方法，所述方法包含测 定来自个体的一个或多个血样中生物化学标志物包括P1GF、活化素A和P-选择素的水平； W及使用测定的生物化学标志物水平确定晚发型先兆子痛的风险。
[0015] 还提供了用于在妊娠个体中确定妊娠高血压风险的方法，所述方法包含测定来自 个体的一个或多个血样中生物化学标志物包括P1GF和活化素A的水平；W及使用测定的生 物化学标志物水平确定妊娠高血压的风险。
[0016] 如果需要，该些方法还可W包括测定选自个体的子宫动脉博动指数（PI)和个体 的平均动脉压（MAP)的至少一种生物物理标志物；W及使用生物化学标志物和至少一种生 物物理标志物的水平确定风险。
[0017] 本文提供了用于在妊娠个体中确定高血压疾病风险的方法，所述方法包含测定来 自个体的一个或多个血样中生物化学标志物包括P1GF、活化素A和P-选择素的水平；使用 P1GF、活化素A和P-选择素的水平确定晚发型先兆子痛的风险；W及使用活化素A和P1GF 的水平确定妊娠高血压的风险。
[0018] 本文还提供了用于在妊娠个体中确定高血压疾病风险的方法，所述方法包含测定 来自个体的一个或多个血样中生物化学标志物包括P1GF、活化素A和P-选择素的水平；^1 定个体的至少一种生物物理标志物包括子宫动脉博动指数（PI)和平均动脉压（MAP);使用 P1GF、活化素A和P-选择素的水平确定晚发型先兆子痛的风险；使用活化素A和P1GF的水 平确定妊娠高血压的风险；W及使用P1GF、PI和MAP的水平确定早发型先兆子痛的风险。
[0019] 本文提供的另一种方法用于确定妊娠个体中高血压疾病的风险，所述方法包含测 定来自个体的一个或多个血样中生物化学标志物包括P1GF、活化素A和P-选择素的水平； 测定个体的至少一种生物物理标志物包括子宫动脉博动指数（PI)和平均动脉压（MAP);使 用P1GF、活化素A和P-选择素的水平确定晚发型先兆子痛的风险；使用活化素A和P1GF的 水平确定妊娠高血压的风险；W及使用P1GF和PAPP-A中的一种或两种W及PI和MAP的水 平确定早发型先兆子痛的风险。
[0020] 在下文中，将在详细描述的帮助下并参考实施例对本文提供的方法进行进一步描 述。
【附图说明】
[0021] 图1提供了表1，其概述了来自实施例1的母体结果。每个高血压疾病组与对 照组之间的比较通过用于分类变量的卡方或Fisher精确检验W及用于连续变量的Mann Whitney-U检验呈递在所述表中，两种检验都使用了事后Bonferroni校正（临界统计学显 著性p<0. 0167)郝<0. 0167,十p<0.001，:;:p<〇.〇〇〇l。
[0022] 图2作为表2列出了四个结果组中每种标志物的测量结果。所述表中每个高血压 疾病组与对照组之间的比较通过MannWhitney-U检验进行，使用了事后Bonferroni校正 (临界统计学显著性P<〇.0167) ;*p<0. 0167,-;-p<〇.001，:i:p<〇.000。
【具体实施方式】[002引样品
[0024] 用于在妊娠个体中确定高血压病症风险的方法包括使用来自于妊娠个体的生物 样品。生物样品可W是含有所选生物化学标志物的任何体液或组织样品。生物样品的选择 通常取决于具体临床实验室中可用的用于检测标志物水平的测定格式。例如，一些测定格 式缺少测定全血所需的灵敏性，因此临床实验室选择测试血液级份例如血清或使用干血。 此外，已经通过例如冷冻或干燥进行保存的样品（例如采用血卡格式），适合使用在本文描 述的方法中。实施例1描述了使用血清形式的母体血液。可用于本文描述的方法的示例性 生物样品包括血液、纯化的血液制品（例如血清、血浆等）、尿液、羊水、绒毛膜绒毛活检样 品、胎盘活检样品和宫颈阴道液。优选的样品包括血样。该意味着方法在孕妇（在本文中 也称为母亲、个体、患者或对象）的身体之外体外进行。
[0025] 用于测定样品中多肤和其他生物标志物的水平的典型测定格式，设及使用对照多 肤，特别是在对该些多肤进行定量时。可商购的蛋白和其他生物标志物可W在测量生物化 学标志物水平的测定法中用作标准品。可选地，用于在例如原核和真核系统中表达蛋白和 用于合成多肤的方法是公知的。全长蛋白及其片段可作为标准品用于定量测定从孕妇获得 的样品中生物标志物的水平。
[0026] 在本文中，"对照样品"是指从处于相同的妊娠时期或胎龄的对象获得的样品，并 且其中已证实妊娠具有特定的先兆子痛结果。典型情况下，"对照样品"已被证实没有发生 先兆子痛（参见本文实施例），尽管也可W使用被证实已发生先兆子痛的对照样品。该术语 在本文中被定义为涵盖一个或多个样品，因此对照样品可W是从群体获得的一组样品。所 选的妊娠对照可W通过生物物理参数例如母体年龄、体重指数、种族和胎龄与先兆子痛病 例相匹配。
[0027] 生物化学标志物水平
[002引"测定来自个体的至少一个血样中生物化学标志物包括P1GF和活化素A的水平"， 是指通过特异性评估从孕妇获得的样品和对照样品中提到的标志物水平的方法来测定所 选生物化学标志物。样品中存在的生物化学标志物的水平，可W使用适合于测量生物样品 中的蛋白的任何测定格式来测定。常用于此目的的测定格式是免疫测定法，包括例如酶免 疫测定法巧lA)，例如酶多重免疫测定技术（EMIT)、酶联免疫吸附测定法巧LISA)、IgM抗体 捕获化ISA(MACELISA)和微粒酶免疫测定法（MEIA);毛细管电泳免疫测定法（CEIA);放射 免疫测定法巧IA);免疫放射测定法（IRMA);巧光偏振免疫测定法（FPIA);解离-增强铜系 巧光免疫测定法值ELFIA)和化学发光测定法（CL)。
[0029] 样品与对照样品相比生物化学标志物水平的差异指示了孕妇中高血压疾病的风 险。取决于所测试的具体生物标志物，差异可W是生物化学标志物水平的升高或降低。
[0030] 在某些情况下，生物样品可W在一种W上的场合从孕妇收集，例如，当由于前设风 险、症状表现和/或其他因素使她的高血压和/或胎盘病症需要监测妊娠高血压或先兆子 痛的发展时。本文所述用于确定妊娠高血压或先兆子痛风险的方法也可用于监测正经历高 血压和/或胎盘病症的疗法或治疗的妊娠个体。如果需要，可W在家庭环境中进行生物化 学和/或生物物理标志物的测试，例如通过使用试纸生物化学测试格式和供家庭使用的自 动血压计。
[0031] "发生高血压疾病的风险增加"、"发生妊娠高血压的风险增加"和"发生晚发型先 兆子痛的风险增加"分别是指对象（孕妇）发生高血压疾病、妊娠高血压和先兆子痛的概率 与不发生所述疾病的孕妇对照组相比处于更高水平上。
[0032] 生物化学标志物
[0033] 在确定妊娠个体中高血压疾病风险的情形中，最重要的生物化学标志物是P1GF、 活化素A和P-选择素。
[0034] W前报道的研究已经显示，P1GF水平的降低指示了先兆子痛的发生。
[0035] 缩写"P1GF"是指胎盘生长因子。P1GF最初于1991