蜂蜜中甜菜糖浆掺假的鉴别方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种蜂蜜是否渗有甜菜糖浆的鉴别检测方法。
【背景技术】
[0002] 根据国家标准GB14963-2011《食品安全国家标准蜂蜜》，蜂蜜是蜜蜂采集植物的 花蜜/分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。因此蜂蜜中不 应当渗加任何外来的物质。然而渗假蜂蜜屡禁不绝，一些企业和个人将庶糖、糖浆等甜味物 质渗加到纯正蜂蜜中，甚至使用庶糖、糖浆、香精等勾兑制造"蜂蜜"，对侵害了消费者的权 益，影响了蜂蜜行业的正常发展。
[0003] 现行的蜂蜜相关标准GB/T18932. 1-2002,可W对蜂蜜中的玉米糖浆等C4植物糖 浆进行渗假鉴别。但是由于甜菜属于C3植物，它的碳同位素值与蜂蜜的碳同位素值相近， 所W很难使用现有的标准和方法对W甜菜糖为原料制成的甜菜糖浆进行识别和鉴定。因 此，十分有必要建立准确、快速的蜂蜜甜菜糖浆渗假鉴别技术，W适应蜂蜜渗假的新手段， 维护消费者的权益。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于针对目前用于蜂蜜渗假的甜菜糖浆，找到一种准确、快速的蜂 蜜中甜菜糖浆渗假的鉴别方法。
[0005] 本发明提供了一种蜂蜜中甜菜糖浆渗假的鉴别方法，其W3-甲氧基酪胺为甜菜 糖浆特征标志物，对蜂蜜进行检测，检测出3-甲氧基酪胺的蜂蜜即为甜菜糖浆渗假蜂蜜。
[0006] 进一步地，该方法W液相色谱-质谱法进行检测。
[0007] 进一步地，其中液相色谱-质谱为线性离子阱-静电场轨道阱组合质谱 (LTQ-Orbitrap)。
[000引进一步地，其中液相色谱的分离条件为；色谱柱选用T3色谱柱；柱温为40°C;流 动相为A. 0. 1%甲酸一B.甲醇，流速为0. 2mL/min;采用梯度洗脱的方式，W体积百分比计， 0. 0 ~1.Omin,A;99%、B ~4.Omin,A;99%~50%;B; 1 %~50%;4. 0 ~9.Omin， A;50%~0%巧；50%~100% ;9. 1~18. 0min，A;99%、B;1%，液相分离采用在线阀切换 技术。
[0009] 进一步地，其中质谱检测条件为；采用电喷雾离子源；正离子模式扫描；在銷气 (馬）流量35arb;辅助气（馬）流量5arb;喷雾电压4.OOkV;毛细管温度320°C;毛细管电压 25V;Tubelens电压95V的条件下；质谱分辨率设定为30000。
[0010] 进一步地，在进行液相色谱-质谱法之前，还包括前处理步骤。
[0011] 进一步地，前处理步骤为溶解法；准确称取蜂蜜样品于具塞刻度离屯、管中，加入超 纯水，震荡至溶解，用0. 2ym滤膜过滤。
[0012] 进一步地，前处理步骤为己膳提取法：准确称取蜂蜜样品，加入超纯水，祸旋溶解， 再加入己膳，震荡提取10.Omin，1000化pm高速离屯、3.Omin，取上层清液，氮气吹干后用超 纯水定容，用0. 2ym滤膜过滤。
[0013] 进一步地，检测出质荷比为168. 1016的3-甲氧基酪胺的蜂蜜为甜菜糖浆渗假蜂 蜜，未检测出质荷比为168. 1016的蜂蜜为不包含3-甲氧基酪胺的蜂蜜。
[0014] 本发明公开了一种蜂蜜中甜菜糖浆渗假的检测方法，包括样品前处理、液相色谱 分离、质谱检测=个步骤。该方法是W质荷比为168. 1016的3-甲氧基酪胺为甜菜糖浆的 特征标志物的液相色谱-质谱检测法。通过液相色谱-质谱法的谱图比对，发现纯蜂蜜和 甜菜糖浆的差异性物质，即甜菜糖浆的特征标志物。经过结构鉴定，甜菜糖浆的特征标志物 是3-甲氧基酪胺。最终确定质荷比为168. 1016的3-甲氧基酪胺为甜菜糖浆的特征标志 物。
[0015] 所述的样品前处理方法为；（1)溶解法。准确称取2.0 (±0.05)g蜂蜜样品于lOmL 具塞刻度离屯、管中，加入20.0血超纯水，震荡至溶解，用0.2ym滤膜过滤；（2)己膳提取 法。准确称取2. 0 (±0. 05)g蜂蜜样品，加入1. 0血超纯水，祸旋溶解，再加入5. 0血己膳， 震荡提取10.Omin，1000化pm高速离屯、3.Omin，取上层清液2. 0血，氮气吹干后用超纯水定 容至1. 0血，用0. 2ym滤膜过滤。
[0016] 所述的液相分离条件为；色谱柱选用T3色谱柱；柱温为40°C;流动相为A. 0. 1 %甲 酸一B.甲醇，流速为0. 2血/min;采用梯度洗脱的方式，W体积百分比计，0. 0~1.Omin，A; 99%、B;1% ;1. 0 ~4.Omin，A;99%~50%;B;1%~50% ;4. 0 ~9.Omin，A;50%~0% ; B;50%~100% ;9. 1~18.Omin，A;99%、B;1%，液相分离采用在线阀切换技术，保留时间 4.Omin之前的色谱流出物切换至废液瓶，W免干扰物质进入质谱其影响质谱检测的准确 性。
[0017] 所述的质谱检测条件为：使用线性离子阱-静电轨道阱质谱仪（LTQ-化bitrap); 采用电喷雾离子源；正离子模式扫描；在銷气（馬）流量35arb;辅助气（馬）流量5arb;喷雾 电压4.OOkV;毛细管温度320°C;毛细管电压25V;Tubelens电压95V的条件下；质谱分辨 率设定为30000。由于LTQ-化bitrap具有高质量精度和高分辨率的特性，确保了目标物的 定性可靠和检测的准确性。
[001引本发明的方法操作简单、准确率高、用样量低、检测限低，极大地提高了甜菜糖浆 渗假蜂蜜检测的效率和准确性。
【附图说明】
[0019] 图1为实施例1中质荷比为168. 1016离子的二级质谱图；
[0020] 图2为实施例1中3-甲氧基酪胺的二级质谱图（质荷比为168. 1016离子）；
[0021] 图3a为实施例3中真实蜂蜜样品的液相色谱-质谱谱图；
[0022] 图3b为实施例3中甜菜糖浆样品的液相色谱-质谱谱图；
[0023] 图3c为实施例3中含5%甜菜糖浆的蜂蜜样品的液相色谱-质谱谱图。
【具体实施方式】
[0024] W下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0025] 实施例1甜菜糖浆特征标志物的确定和鉴定
[0026] 第一步，典型甜菜糖浆和典型纯蜂蜜的收集
[0027] 收集不同厂家和来源的甜菜糖浆，共收集到目前常用的10种甜菜糖浆。收集国内 不同产地和蜜源的蜂蜜，产地包括迂宁、黑龙江、河北、河南、内蒙古、山东、湖北、安徽等26 个省市，蜜源包括油菜、荆条、苹果、洋槐、慕枝、极树、龙眼、要花、葵花、紫云英、芝麻、野桂 花等12种。
[002引第二步，甜菜糖浆特征峰的确定
[0029] 对收集和制作的甜菜糖浆，W及收集的纯蜂蜜，使用LTQ-化bitrap进行检测。通 过谱图比对，发现所有被检测甜菜糖浆中均大量含有质荷比为168. 1016的离子，而所有纯 蜂蜜中均不含有该种离子。因此确认该种离子是甜菜糖浆显著区别于纯蜂蜜的特征性差异 物质，可W使用该种离子作为甜菜糖浆的特征标志物。
[0030] 第=步，甜菜糖浆特征标志物的结构鉴定
[0031] 使用LTQ-化bitrap的多级质谱功能，对甜菜糖浆中质荷比为168. 1016的该种 离子进行二级质谱检测，见图1。由离子的精确质量数和二级质谱中离子的各个碎片的精 确质量数推断，该种物质是3-甲氧基酪胺（C9H13N02)。购买3-甲氧基酪胺标准品，经过 LTQ-化bitrap的检测，甜菜糖浆中质荷比为168. 1016的离子，其保留时间和二级质谱均与 3-甲氧基酪胺产生的质荷比为168. 1016的离子相同（见附图1和附图2)，因此可W确定 甜菜糖浆的特征标志物为3-甲氧基酪胺。
[0032] 实施例2甜菜糖浆检测方法的确定