一种畜类尿液中20种β-兴奋剂类药物残留的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物残留检测分析技术领域，具体地，涉及一种畜类尿液中20种 目-兴奋剂类药物残留的检测方法。
【背景技术】
[0002] 从近年来的食品安全事件归纳总结，兽药残留已经成为影响食品安全的主要因 素之一，而目-兴奋剂则是影响肉类食品安全的主要因素。目-兴奋剂是一类人工合成药 物，此类物质可W增加蛋白质合成，减缓蛋白质降解，增强体脂分解，减少体脂合成。如果 将其加入动物饲料中作为动物饲料添加剂可W提高饲料转化率。特别是在畜类养殖巧口猪 养殖）中，将其作为饲料添加剂时，能有效地促进畜类巧日猪）肌肉的生长。然而，现在医学 实验已证明其残留会严重影响到人类的健康，如出现也慌、头痛、恶也等症状，人如果长期 食用含有目-兴奋剂残留的肉巧n猪肉）还会增加致癌、致崎的风险。有鉴于此，在食品安 全高度重视的今天，人们开始越来越关注动物源性食品中存在的目-兴奋剂给人们身体 健康所带来的影响，我国于1988年6月发布的《兽药管理条例实施细则》中就规定了 "不 得添加激素类药品"，在1997年又下发了《关于严禁非法使用兽药的通知》，我国农业部在 2002年农牧发[2002] 1号文件中明确规定克伦特罗、沙下胺醇、莱克多己胺为禁用药物。 在食品安全要求甚严的欧盟也对此做出了规定，欧盟1996年通过法律禁止使用该类药物 (ECDirective96/22/EC)〇
[0003] 目前，猪尿中的瘦肉精检测主要依靠酶联免疫快速检测方法，但该方法为非确证 方法，而且检测种类有限。已有的仪器方法一次最多检测11种目-兴奋剂，而且样品前处 理过程复杂，需要使用大量的有机试剂进行提取，前处理过程耗费较长时间。因此，研发出 一种畜类中目-兴奋剂快速、灵敏的检测方法，具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了克服现有技术中的上述缺陷，提供一种畜类尿液中20种 目-兴奋剂类药物残留的检测方法。
[0005] 本发明的发明人在研究中发现，在对畜类尿液中目-兴奋剂类药物残留进行检测 时，尿液前处理步骤中提取和净化的条件，尤其是提取时尿液样品抑值的设定和提取时所 用的提取液对尿液中各种目-兴奋剂的提取效果有重要影响，复溶时所用的溶解液对尿液 中各种目-兴奋剂的净化效果有重要影响，较好的提取效果和净化效果则有利于后续检测 的顺利进行并能有效保障回收率在正常范围内。其中，在提取步骤中，当调节尿液样品的 抑至9-10时，用正了醇-甲基叔了基離(正了醇的体积为正了醇-甲基叔了基離体积的 50-70%)作为提取液，并用0. 1-0. 3体积％的甲酸水溶液作为复溶时的溶解液时，不仅能够 大大提高提取和净化效果，使尿液前处理过程变得简单，而且经高效液相色谱-串联质谱 法测定一次即可检测出20种目-兴奋剂，且尿液样品中20种目-兴奋剂的回收率均满足 GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》样品含量<0.lOOmg/kg时，回收率在 60~120%之间的要求。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供了一种畜类尿液中20种目-兴奋剂类药物残留的 检测方法，该方法包括W下步骤：
[0007] (1)提取；在待测畜类尿液中加入同位素内标工作液后调节抑至9-10,加入正了 醇-甲基叔下基離，混匀，离也，取上清液吹干，用0. 1-0. 3体积％的甲酸水溶液复溶，其中， 在所述正了醇-甲基叔了基離中，正了醇的体积为正了醇-甲基叔了基離体积的50-70% ;
[0008] (2)净化、测定；将步骤（1)中复溶得到的溶液过阳离子交换柱进行净化，净化得 到的溶液吹干后用与步骤（1)中待测畜类尿液相同体积的初始流动相复溶，将复溶得到的 溶液过滤膜后用高效液相色谱-串联质谱法测定，其中，所述初始流动相为进行高效液相 色谱测定时的初始流动相。
[0009] 本发明方法，前处理过程简单，可W方便、快捷、准确的检测畜类尿液巧日猪尿）中 的目-兴奋剂的含量，且一次即可检测20种目-兴奋剂。同时，20种目-兴奋剂均满足 GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》样品含量<0.lOOmg/kg时，回收率在 60~120%之间的要求。利用本发明方法可严格监控我国畜类养殖巧日生猪养殖)中目-兴 奋剂的使用情况，减少畜类肌肉幼日猪肉)中目-兴奋剂对人体的危害，提高我国食品安全水 平，有利于人们身体健康和社会稳定。
[0010] 本领域技术人员应该理解的是，回收率越接近100%，说明检测方法越准确、可靠。 回收率之所W会大于100%，原因有两个，第一是因为采用内标法定量，内标的损失过大时， 回收率会超过100%，第二是因为基质对药物产生增强效果时，回收率也会偏高。
[0011] 本发明方法适用于畜类尿液巧日猪尿）中齐帕特罗、西马特罗、西布特罗、马布特 罗、漠布特罗、莱克多己胺、特布他林、沙下胺醇、克伦特罗、苯氧丙酷胺、马喷特伦、漠代克 伦特罗、氯丙那林、班布特罗、妥布特罗、克伦普罗、轻予轻麻黄碱、克伦塞罗、苯己醇胺A、 沙美特罗20种目-兴奋剂的检测，用于肉品加工企业对畜类巧日生猪）收购过程中对在畜 类幼日生猪）养殖时是否使用目-兴奋剂进行检测，同时适用于对畜类巧日生猪）养殖过程中 目-兴奋剂的普查，能够在不伤害活体动物的前提下有效检测其是否使用过目-兴奋剂。
[0012] 本发明的其他特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予W详细说明。
【具体实施方式】
[0013] W下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0014] 本发明提供了一种畜类尿液中20种目-兴奋剂类药物残留的检测方法，该方法包 括W下步骤：
[0015] (1)提取；在待测畜类尿液中加入同位素内标工作液后调节抑至9-10,加入正了 醇-甲基叔下基離，混匀，离也，取上清液吹干，用0. 1-0. 3体积％的甲酸水溶液复溶，其中， 在所述正了醇-甲基叔了基離中，正了醇的体积为正了醇-甲基叔了基離体积的50-70% ;
[0016] (2)净化、测定；将步骤（1)中复溶得到的溶液过阳离子交换柱进行净化，净化得 到的溶液吹干后用与步骤（1)中待测畜类尿液相同体积的初始流动相复溶，将复溶得到的 溶液过滤膜后用高效液相色谱-串联质谱法测定，其中，所述初始流动相为进行高效液相 色谱测定时的初始流动相。
[0017] 本发明方法中，20种目-兴奋剂类药物分别为齐帕特罗、西马特罗、西布特罗、马 布特罗、漠布特罗、莱克多己胺、特布他林、沙下胺醇、克伦特罗、苯氧丙酷胺、马喷特伦、漠 代克伦特罗、氯丙那林、班布特罗、妥布特罗、克伦普罗、轻予轻麻黄碱、克伦塞罗、苯己醇胺 A和沙美特罗。在待测畜类尿液中加入的同位素内标工作液可W为能够代表该20种目-兴 奋剂构型的若干目-兴奋剂的同位素内标工作液，例如可W为该20种目-兴奋剂的同位素 内标工作液，也可W为其中几种目-兴奋剂的同位素内标工作液，为了节约成本，加入的同 位素内标工作液优选为莱克多己胺D3、克伦特罗D9和沙下胺醇D3的己膳溶液。
[001引本发明方法中，对于加入的同位素内标工作液的量没有特别要求，只要能够将尿 液中20种目-兴奋剂的残留量进行校对和定量即可，其中，当待测畜类尿液中加入的同位 素内标工作液为莱克多己胺D3、克伦特罗D9和沙下胺醇D3的己膳溶液时，每ml待测畜类 尿液中莱克多己胺D3、克伦特罗D9和沙下胺醇D3的终浓度优选为10-50ug/l，更优选地， 每ml待测畜类尿液中莱克多己胺D3、克伦特罗D9和沙下胺醇D3的终浓度相同。其中，在同 位素内标工作液中，莱克多己胺D3、克伦