保存70天，试纸上氧化酶用量为6U/2mL，水样为 通入不同浓度氧气平衡后的自来水，溶解氧浓度从左到右依次为0. 57mg/L、4. 28mg/L、 7. 15mg/L。由测试结果可知，水样颜色的深浅程度已经不足以反映出溶解氧浓度的大小。
[0140] 附图9-3中所用的试纸在冷藏条件下保存75天，试纸上氧化酶用量为6U/2mL，水 样为新鲜自来水。由测试结果可知，水样经试纸测试后在3min有颜色变化，在5min时4个 水样的颜色已经转为背景色，无法进行溶解氧浓度的判读。可见，当氧化酶用量为6U/2mL， 承载有氧化酶及相关试剂的试纸在冷藏条件下储存70天失效。
[0141] 附图9-4和附图9-5中试纸在冷藏条件下分别保存保存86、100天，试纸上氧化 酶用量为9U/2mL，水样为通入不同浓度氧气平衡后的自来水，附图9-4,溶解氧浓度从左 到右依次为L5mg/L、3. 3mg/L、8. 8mg/L;附图9-5,溶解氧浓度依次为4. 2mg/L、7.Omg/L、 10.lmg/L。测试结果表明，增加试纸承载的氧化酶的用量至9U/2mL，试纸的有效期至少可延 长至100天。
[0142] 附图9-6中所用的试纸在冷冻条件下保存30天，试纸上氧化酶用量为6U/2mL，水 样为通入不同浓度氧气平衡后的自来水，溶解氧浓度从左到右依次为2. 6mg/L、4. 3mg/L、 6. 9mg/L、8. 3mg/L。测试结果表明，将试纸储存在冷冻条件下，其稳定性可延长。
[0143] 实施例15 :实际水样中溶解氧测定
[0144] 采用本发明实施例1的试剂盒对自然环境水样中的溶解氧进行测定。用滴管快速 将水样加到溶解氧测试瓶中，加满，测试瓶中无气泡，迅速盖紧瓶盖，将瓶子上下翻转，摇晃 5次，静置5min，将测试瓶放置于白色背景下，根据显示的颜色，参照溶解氧比色卡，与测试 瓶中溶液颜色相近的的色标即为水样的溶解氧值。
[0145] 附图10-1中水样为通入不同浓度氧气平衡后的自来水，溶解氧浓度依次为 3.lmg/L、4. 3mg/L、8.Omg/L和20mg/L的自来水样。从图中可以看出，溶液的颜色随着水样 中溶解氧浓度的增加逐渐加深，依次为粉、浅紫红、紫红和深紫红色，溶液颜色的深浅与溶 解氧氧浓度的高低呈现对应关系。附图10-2、10-3、10-4、10-5、10-6中的水样分别为取自 大鱼鱼塘、河水、湖水、海水以及鱼苗鱼塘的水样，溶解氧浓度范围为0. 78mg/L~8. 03mg/ L，显色效果及浓度参见下表3。
[0146] 表3 :实际水样中溶解氧浓度测定显色效果
[0147]
[0148] 其中，上述表3中" + "，"++"，"+++"，"++++"分别表示从粉红、紫红、深紫红依次加 深的颜色，" + "的数量代表颜色的深浅。
[0149] 实施例16
[0150] 按实施例1步骤制备试剂盒，采用吸光光度法测定不同溶解氧浓度水样的吸收光 谱。附图11为4-氨基安替吡啉-3-二甲基氨基苯甲酸钠显色体系在不同溶解氧值水样 中的吸收光谱，水样为通入不同浓度氧气平衡后的自来水，溶解氧浓度依次为〇.lmg/L、 1. 5mg/L、2. 8mg/L、5. 0mg/L、6. 4mg/L、8. 3mg/L、13.lmg/L和 20mg/L的自来水样。从图 11 中 可以看出，在550nm处溶液的吸光度随着水样中溶解氧浓度的增加而增加。吸光度数值与 溶解氧氧浓度的高低呈现对应关系。
[0151] 实施例17
[0152] 按实施例3步骤制备试剂盒，采用吸光光度法测定不同溶解氧浓度水样的吸收光 谱。附图12为硫酸亚铁与苯胺（Fenton)显色体系在不同溶解氧值水样中的吸收光谱。水 样为通入不同浓度氧气平衡后的自来水，溶解氧浓度依次为0.lmg/L、l. 5mg/L、2. 8mg/L、 5. 0mg/L、6. 4mg/L、8. 3mg/L、13.lmg/L和 20mg/L的自来水样。从图 12 中可以看出，在 720nm 处溶液的吸光度随着水样中溶解氧浓度的增加而增加。吸光度数值与溶解氧氧浓度的高低 呈现对应关系。由此可知，通过分光光度计例如使用便携式光度计，本发明的试剂盒可以用 于水中溶解氧浓度的定量分析，本领域技术人员根据实际需求也可采用本发明试剂盒进行 定量分析。
[0153] 上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，并不用以限制本发明，凡在本发 明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种用于溶解氧测定的试纸，其特征在于：包括与氧气反应生成过氧化氢的氧化酶 及相应酶底物，以及与过氧化氢反应生成有颜色或带荧光的化合物的显色剂；其中，所述氧 化酶及相应酶底物，显色剂负载在载体上，制备成试纸。2. 如权利要求1所述的用于溶解氧测定的试纸，其特征在于：所述氧化酶及相应酶底 物选自以下组中的一种或多种：葡萄糖氧化酶及葡萄糖、乳酸氧化酶及乳酸、L-氨基酸氧 化酶及L-氨基酸、D-氨基酸氧化酶及D-氨基酸、L-a-羟基酸氧化酶及L-a-羟基酸、尿 酸氧化酶及尿酸、醇类氧化酶及醇、醛类氧化酶及醛。3. 如权利要求2所述的用于溶解氧测定的试纸，其特征在于：所述醇类氧化酶及醇选 自以下组中的一种或多种：胆固醇氧化酶及胆固醇、乙醇氧化酶及乙醇；所述醛类氧化酶 及醛选自以下组中的一种或多种：乙二醛氧化酶及乙二醛、视黄醛氧化酶及视黄醛、牛醛氧 化酶及牛醛。4. 如权利要求1所述的用于溶解氧测定的试纸，其特征在于：所述显色剂为 其中，&、R2、R3、R4、R5、R6、R7、Rs独立的选自H、C「(：3的烷基、 v? 乂 '， nh2； 或者，所述的显色剂为4-氨基安替比林且成的试剂对，其中R9选自 0H或NH2,R1Q、Rn、R12、R13、R14独立的选自H、卤素、羧基、磺酸基、羟基或甲氧基。5. 权利要求1-4任一项所述的用于溶解氧测定的试纸，其特征在于，所述载体上还负 载催化剂和/或缓冲液。6. 如权利要求5所述的用于溶解氧测定的试纸，其特征在于，所述催化剂包括辣根过 氧化物酶或铁基化合物；所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、醋酸-醋酸盐缓冲液、PBS缓冲液 或Tris-HCl缓冲液。7. -种用于溶解氧测定的比色卡，其特征在于，所述比色卡通过如下步骤制备： (1) 向盛有水的容器中分别通入不同氧气浓度的气体，持续通入气体直至水中溶解氧 浓度测量值稳定； (2) 取步骤（1)水样分别加入相同体积溶解氧测试瓶中，水样加满测试瓶，测试瓶中无 气泡，盖紧瓶盖，摇晃后静置2-5min，观察颜色变化；所述测试瓶内置有权利要求1-6任一 项所述的试纸； (3) 记录不同溶解氧浓度的水样颜色制作成溶解氧比色卡。8. -种用于溶解氧测定的试剂盒，其特征在于：包括氧化酶及相应酶底物和显色剂； 其中，所述氧化酶催化酶底物与氧气反应生成过氧化氢；所述显色剂与过氧化氢反应生成 有颜色或带荧光的化合物。9. 如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述氧化酶及相应酶底物，显色剂负载在 载体上，制备成试纸。10. 如权利要求8-9任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括带瓶盖的测 试瓶。11. 如权利要求8-9任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括权利要求7 所述的用于溶解氧测定的比色卡。12. -种溶解氧的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将与氧气反应生成过氧化氢 的氧化酶及相应酶底物与待测样品相接触；将与过氧化氢反应生成有颜色或带荧光的化合 物的显色剂与待测样品相接触；根据接触后待测样品的颜色深浅或荧光的强弱判断溶解氧 的浓度；其中，所述的氧化酶及相应酶底物和所述的显色剂同时或者顺序与检测样品接触。13. 如权利要求12所述的检测方法，其特征在于：所述的判断溶解氧的浓度采用目视 法。14. 如权利要求12或13所述的检测方法，其特征在于： 所述的检测方法的检测温度不高于35°C; 和/或，测试瓶内所述氧化酶的浓度不小于lU/mL; 和/或，水样中硫氢根浓度小于lmg/L。
【专利摘要】本发明涉及一种基于氧化酶催化的氧化还原反应来检测溶解氧的试纸及试剂盒，包括与氧气反应生成过氧化氢的氧化酶及相应酶底物，以及与过氧化氢反应生成有颜色或带荧光的化合物的显色剂，其中，氧化酶及相应酶底物、显色剂可负载在载体上，制备成试纸。通过选择和设计稳定性好的氧化酶来催化相应酶底物与溶解氧反应，消耗氧分子，形成活性分子过氧化氢；所生成的过氧化氢将显色剂氧化成带颜色或荧光的产物，根据产物的颜色深浅或荧光的强弱来检测待测液中溶解氧的浓度。该试纸、试剂盒及方法可用于测定水介质中的溶解氧含量，可应用于水产养殖、生物医学、环境监测等领域，操作简单，制作成本低，易于推广。
【IPC分类】G01N21/78
【公开号】CN105021605
【申请号】CN201510466559
【发明人】何华瑞
【申请人】天津希恩思奥普德科技有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月31日