一种红毛走马胎药材或其提取物的检测方法_2

文档序号:9395539阅读:来源:国知局
] 3. 2提取方法与溶剂优化
[0032] 供试品溶液提取方法比较了回流与超声的提取效果,结果差异不大,故确定为更 简便的超声提取法。提取溶剂考察了水、30 %甲醇、50 %甲醇、70 %甲醇、甲醇、30 %乙醇、 50 %乙醇、70 %乙醇、乙醇等对红毛走马胎中百两金皂巧B的提取效果,结果W50 %和70 % 的乙醇或甲醇较佳
[0033] 3. 3提取时间优化
[0034] 供试品溶液提取时间考察了 30min、45min、60min、75min、90min的提取效果,结果 15个测定结果的RSD为1. 8%,总的趋势是随超声时间的延长,含量逐渐增加,但60min后 差异很小。最终确定的前处理方法是W50%乙醇为溶剂,超声提取60min。
[00对 4测定方法
[0036] 4. 1色谱条件与系统适用性试验
[0037] 固定相为十八烷基硅烷健合硅胶(Symmetry柱:150mmX4. 5mm,5ym);流动相 为甲醇-水(65 :城准溫为30°C;体积流量为0. 8血?min1;蒸发光散射检测器的漂移 管溫度:95°C;气体流速:2.化?min1;理论板数按百两金皂巧B计算不得低于5000。
[0038] 4. 2对照品溶液的制备
[0039] 精密称取百两金皂巧B对照品10. 72mg于100血量瓶中,加50%甲醇适量,超声 (功率300W,频率40kHz)使溶解,相同溶剂稀释至刻度,摇匀,即得。
[0040] 4. 3供试品溶液的制备
[0041] 取红毛走马胎药材粉末(过=号筛)0. 15g,精密称定,置具塞锥型瓶中,精密加入 50 %乙醇50血,密塞,称定重量,超声(功率300W,频率40曲Z)处理60分钟,放冷,再称定 重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,离屯、,取上清液,即得;
[0042] 4. 4测定方法
[0043] 分别精密吸取百两金皂巧B对照品溶液5化、20yL;红毛走马胎供试品溶液5~ 10yL;注入液相色谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。
[0044] 5方法学验证
[0045] 5. 1线性范围
[0046] 分别精密吸取4. 2项下的白两金皂巧B对照品溶液2. 5、5、7. 5、10、12. 5、15、17. 5、 20yL注入液相色谱仪,测定峰面积值,W进样量的对数狂)为横坐标,峰面积对数灯)为纵 坐标,进行线性回归,回归方程:Y= 1. 782X+6. 912,r= 0. 9998。结果显示,百两金皂巧B 的进样量在0. 268yg~2. 144yg范围内呈良好的线性关系。
[0047] 5. 2仪器精密度试验
[0048] 取百两金皂巧B对照品溶液,在上述色谱条件下进样10yL测定峰面积,重复进样 6次,测得平均峰面积分别为1169mAU*s,RSD为0. 9%,表明仪器精密度良好。
[0049] 5. 3稳定性试验
[0050] 取同一红毛走马胎供试品溶液,分别在0、1、2、4、6、化进样10^以测定百两金皂 巧B的峰面积,测得平均峰面积分别为1227mA肿S,RSD为0. 8%,表明供试品溶液在化内 稳定。
[0051] 5. 4重复性试验
[0052] 取同一批红毛走马胎药材粉末,平行操作6份,按照4项下的测定方法制备样品溶 液并测定,用外标两点法对数方程计算含量,结果平均含量为37. 9mg?g1,RSD为1. 1 %,表 明重复性良好。
[0053] 5. 5加样回收率试验
[0054] 减半量称取已知含量的红毛走马胎药材粉末0. 075g,置50血具塞锥型瓶中精 密称定,平行操作6份,分别W样品百两金皂巧B质量的1 : 1比例精密加入对照品溶液 巧70. 6yg?血1) 5. 0血,蒸干溶剂,按照4项下方法制备供试品溶液并测定,计算回收率,结 果见表1。
[0055]表1加样回收试验结果(n= 6)
[0057] 5. 6耐用性考察
[005引耐用性试验考察了立根不同品牌和长度的。迪对样品的测定,均获得满意的效 果;其柱溫在25°C~35°C范围变化,测定结果均良好;流动相中甲醇:水的比例变化在 60 : 40~70 : 30范围内调整,除保留时间变化外,其余不影响测定结果,说明本方法耐用 性良好。
[00则 6样品测定
[0060] 6. 1药材测定
[0061] 取各批红毛走马胎药材粉末0. 15g,平行操作=份,按照4项下的方法测定并计算 百两金皂巧B的质量分数,结果见表2。由表可知:受±壤、气候、生态环境等地域因素的 影响,不同产地红毛走马胎药材中百两金皂巧B的含量存在较大差异,其全草质量分数在 2. 6%~4. 5%之间;根和茎的质量分数在3. 7%~6. 2%之间。
[0062] 6. 2粗提物测定
[0063] 取四川键为产红毛走马胎药材提取物干燥浸膏粉0.05g,精密称定,平行操作= 份,按照4项下的方法测定并计算百两金皂巧B的质量分数,结果见表2。由表可知:不同 浓度乙醇溶剂提取的红毛走马胎药材提取物其百两金皂巧B含量不同。
[0064] 6. 3精提物测定
[0065] 取四川键为产红毛走马胎药材精提物15mg,精密称定,平行操作S份,按照4项下 的方法测定并计算百两金皂巧B的质量分数,结果见表2。
[0066] 表2不同产地红毛走马胎药材或其提取物*中百两金皂巧B的测定结果(n= 3, #打=2)

【主权项】
1. 一种使用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定红毛走马胎药材或 其提取物中百两金皂苷B含量的检测方法,其步骤包括:色谱条件与系统适用性试验、对照 品溶液的制备、供试品溶液的制备、百两金皂苷B含量测定;其中百两金皂苷B含量测定的 方法为:分别精密吸取百两金皂苷B对照品溶液5 y L、20 y L ;红毛走马胎供试品溶液5~ 10 y L ;注入液相色谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。2. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述色谱条件与系统适用性试验是 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为60 : 40~70 : 30的甲醇-水为流动相;蒸 发光散射检测器检测;理论板数按百两金皂苷B计算不得低于5000。3. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述对照品溶液的制备采用如下方 法:取百两金皂苷B对照品适量,精密称定,加40~80%甲醇或乙醇制成每1ml含0. 05~ 0. 15mg的百两金皂苷B对照品溶液,即得。4. 根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,所述百两金皂苷B对照品采用如下 方法自制:将红毛走马胎粉碎,用50 %~80 %乙醇提取,将提取液减压浓缩,上大孔吸附树 月旨,用水和30 %乙醇冲洗除杂,再用80 %乙醇洗脱,洗脱液减压浓缩干燥,上硅胶柱层析, 以体积比为70 : 30的乙酸乙酯-甲醇洗脱,合并富含百两金皂苷B的流份,除去溶剂,甲 醇重结晶,用制备型高效液相色谱分离纯化,色谱条件:C 18柱;流动相:体积比为60 : 40~ 70 : 30的甲醇-水;检测波长:205nm,收集目标峰流出液,浓缩、干燥,即得。5. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述供试品溶液的制备采用以下方 法:取红毛走马胎药材粉末(过三号筛)0. 1~0. 2g,精密称定,置具塞锥型瓶中,精密加入 50~70%的乙醇或甲醇25~100mL,密塞,称定重量,超声处理50min以上,取出,放冷,再 称定重量,用相同溶剂补足减失的重量,摇匀,过滤或离心,取续滤液或上清液,即得。6. 根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,所述超声处理指超声功率200~ 400W,频率 30 ~50kHz。7. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述采用HPLC-ELSD法测定百两金皂 苷B含量包括如下步骤及优化条件: 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定; 色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为65 : 35 的甲醇-水为流动相;蒸发光散射检测器检测,理论板数按百两金皂苷B计算不得低于 5000 ; 对照品溶液制备取百两金皂苷B对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含 〇. Img的百两金皂苷B对照品溶液,即得; 供试品溶液制备取红毛走马胎药材粉末(过三号筛)〇. 15g,精密称定,置具塞锥型瓶 中,精密加入50 %乙醇50mL,密塞,称定重量,超声(功率300W,频率40kHz)处理60分钟, 放冷,再称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,离心,取上清液,即得; 测定方法分别精密吸取对照品溶液5 y L、20 y L ;供试品溶液5~10 y L ;注入液相色 谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。
【专利摘要】本发明建立了一种红毛走马胎药材或其提取物的定量分析方法,该方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定其中活性成分百两金皂苷B的含量,从而使其内在质量能够得到客观科学的评价。该方法精密度、稳定性、重复性、加样回收率、耐受性等均符合定量分析要求。利用该法首次测定了不同产地红毛走马胎药材的含量,为含百两金皂苷B成分的药物开发提供了新的质量控制检测手段。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105116059
【申请号】CN201510280393
【发明人】张琦, 伍红, 陈炼红, 饶开晴
【申请人】西南民族大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年5月27日
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