[0048] C.测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各2 μ 1，注入气相色谱仪，测定；
[0049] 色谱条件与系统适用性试验：ΗΡ-50+毛细管柱；程序升温：初始温度为70°C，保持 5分钟；以每分钟5 °C的速率升至140 °C，保持5分钟，再以每分钟20°C的速率升至250 °C ; 进样口温度：230°C ;检测器：FID ;检测器温度：280°C ;载气：N2;载气流速：1.0ml/min ;分流 比：5:1 ;理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于8000 ;
[0050] 供试品特征图谱中应呈现6个特征峰，其中4个峰应分别与α -松油醇对照品、 4-萜品醇对照品、甲基正壬酮对照品、乙酸龙脑酯对照品峰保留时间相一致；与甲基正壬 酮对照品相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的±5%之内； 规定值为：〇. 782 (峰 1)、0. 820 (峰 2)、0. 878 (峰 3)、0. 909 (峰 4)、1.0 OO (峰 S)、1. 052 (峰 5) 〇
[0051] 实施例3 :甲基正壬酮的薄层鉴别
[0052] 原标准的供试品溶液制备方法为酸化后用三氯甲烷提取，其中样品的取样量较大 (每次取100ml)，所用提取溶剂（即三氯甲烷）毒性大，现修改为取[含量测定]项下溶液 作为供试品溶液，斑点明显，容易检视，且节约了样品和溶剂，方法更简便省时、环保。另外 将展开剂中的正己烷用毒性更低的环己烷代替。
[0053] [含量测定]项下溶液的制备方法为：精密量取本品25ml，通过已预处理好的(：8固 相萃取小柱（IOOmg :1ml)，用乙酸乙酯-乙醇（7:3)的混合溶液洗脱，收集洗脱液约I. 8ml， 置2ml量瓶中，加上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0054] 1.方法研究和确定
[0055] 供试品溶液制备：取[含量测定]项下的供试品溶液，即得。
[0056] 对照品溶液制备：取甲基正壬酮对照品（中国药品生物制品检定所 110834-200502,以下简称中检所），加无水乙醇制成每1ml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶 液。
[0057] 阴性对照溶液制备：取缺鱼腥草的阴性样品，按供试品溶液的制备方法，同法制成 阴性对照溶液。
[0058] 吸取上述对照品溶液10 μ 1及供试品溶液20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上， 点成条斑，以①环己烷-乙酸乙酯（9 :1)、②甲苯-乙酸乙酯（9:1)、③环己烷-乙酸乙酯 (17:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液（临用新配）。结果：供试品色谱 中，均可检出甲基正壬酮的斑点。以环己烷-乙酸乙酯（9 :1)为展开剂时，斑点Rf值适中； 以二硝基苯肼试液为显色剂时，样品中甲基正壬酮斑点明显，其它斑点较弱，难以检视，因 此只把甲基正壬酮的鉴别收入标准正文。
[0059] 参照鱼腥草注射液公示标准的薄层鉴别，以5%香草醛的硫酸乙醇（1 - 10)溶液 为显色剂，热风吹至斑点显色清晰。结果：对照品中松油醇、乙酸龙脑酯、萜品醇的斑点明 显，甲基正壬酮的斑点在该显色剂下较其它斑点弱；样品中有一斑点难以检视，其它斑点干 扰大，故未选择该显色剂。见图1，图中吸附剂：硅胶G薄层板（天津铝箱板），展开剂：环己 烷-乙酸乙酯（9 :1)，显色剂：5%香草醛的硫酸乙醇（1 - 10)溶液，温度：26°C，相对湿度： 60% ;1为样品1202118,2为样品1205102,3为甲基正壬酮对照品，4为混合对照品（松油 醇、乙酸龙脑酯、萜品醇和甲基正壬酮），5为样品1112101。
[0060] 最终确定方法为：取甲基正壬酮对照品，加无水乙醇制成每1ml含0. 5mg的溶液， 作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照 品溶液10 μ 1及[含量测定]项下的供试品溶液20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，点 成条斑，以环己烷-乙酸乙酯（9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液（临 用新配）。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0061] 2.耐用性试验：
[0062] 采用不同类型的硅胶G板和不同温湿度，对本发明最终确定的方法进行考察。见 图2~图7,图2、图3、图4和图5的温度为25°C，相对湿度：60%，1为阴性样品，2为样品 1202118，3为样品1205102，4为样品1112101，5为甲基正壬酮对照品；图9为青岛海洋预制 板，图中1为样品1202118, 2为样品1205102, 3为样品11121014,4为甲基正壬酮对照品，5 为阴性样品。
[0063] 实施例4 :特征图谱
[0064] 1.方法确定
[0065] 先考察使用含测项下的供试品溶液及其色谱柱，并参照鱼腥草注射液[指纹图 谱]项下的色谱条件来测定。
[0066] 色谱条件与系统适用性试验：HP-50+毛细管柱（30mX0. 32mm，0. 5μπι);程序升 温：初始温度为70°C，保持5分钟；以每分钟5°C的速率升至140°C，保持5分钟，再以每分 钟20°C的速率升至250°C。进样口温度：230°C;检测器：FID ;检测器温度：280°C;载气：N2 ; 载气流速：1. 〇ml/min ;分流比：5:1。
[0067] 参照物溶液的制备：取α -松油醇对照品（中检所111859-201102)、4_萜品醇对 照品（ACROS，含量97% )、甲基正壬酮对照品（中检所110834-200502)、乙酸龙脑酯对照品 (中检所110759-200303)适量，精密称定，分别加无水乙醇制成每1ml含25 μ g的溶液，即 得。
[0068] 供试品溶液的制备：方法1 :取[含量测定]项下的供试品溶液，即得；方法2 :参 照鱼腥草注射液公示标准"指纹图谱"项下供试品溶液制备方法。精密量取本品120ml，置 圆底烧瓶中，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录X D)，加正己烷I. 5ml，缓缓加 热至沸，并保持微沸40分钟，放冷，分取正己烷液，加入Ig无水硫酸钠振摇，正己烷液转移 至5ml量瓶中，用少量正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇 勾，即得。
[0069] 测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各2μ1，照[含量测定]项下的方 法试验，注入气相色谱仪，测定，即得。
[0070] 结果：两种供试品溶液制备方法所得样品的色谱图中，色谱峰的个数相同，均能检 出共有的6个特征峰，其相对保留时间均在规定范围内。见表1。
[0071] 表1两种供试品制备方法比较特征峰相对保留时间
[0072]
[0073] 考虑到操作的简便及提高检验的效率，最终选择：取[含量测定]项下的供试品溶 液进行特征图谱的测定。
[0074] 按照选定方法，对本品14批样品进行特征图谱考察，结果均呈现6个共有的特征 峰，阴性无干扰，其中4个峰分别与α -松油醇对照品、4-萜品醇对照品、甲基正壬酮对照 品、乙酸龙脑酯对照品峰保留时间相一致；计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定 值的± 5 %之内。得14批平均值分别为：0. 782 (峰1)、0. 820 (峰2)、0. 878 (峰3)、0. 909 (峰 4)、1. 000 (峰S)、1. 052 (峰5);使用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对14批样品特征图 谱进行合成，获得对照特征图谱。见图8及表2。
[0075] 表214批样品特征峰相对保留时间
[0077] 最终标准规定：供试品特征图谱中应呈现6个特征峰，其中4个峰应分别与α -松 油醇对照品、4-萜品醇对照品、甲基正壬酮对照品、乙酸龙脑酯对照品峰保留时间相一致； 与甲基正壬酮对照品相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的 ±5%之内。规定值为：0· 782(峰 1)、0· 820(峰 2)、0· 878(峰 3)、0· 909(峰 4)、1· 000(峰 S)、L 052(峰 5)。
[0078] 2.重复性考察
[0079] 精密量取本品（批号1202118) 25ml，共6份，按拟定方法制备并测定，结果见表3。
[0080] 表3样品特征峰相对保留时间重复性
[0082] 3、供试品溶液稳定性考察
[0083] 取本品供试品溶液，分别放置不同时间，按拟定方法测定，记录保留时间，计算相 对保留时间RSD，结果见表4。
[0084] 表4样品特征峰相对保留时间稳定性
[0087] 4、耐用性考察
[0088] 4. 1固相萃取小柱品牌的考察
[0089] 共考察了上海月旭、菲罗门和安捷伦三个品牌的C8固相萃取小柱，结果样品中均 检出了6个特征峰。见表5
[0090] 表5不同品牌小柱相对保留时间考察结果
[0092] 4. 2毛细管气相色谱柱考察
[0093] 使用同一色谱条件，考察了① HP-50+(30m*0. 32mm，0. 5 μπι)(标准拟用柱子）、 @08-17(30111*0.25_，0.25以111)及@08-1 (30111*0.32_，1.(^111)三根色谱柱，结果：柱? 和柱②均能检出6个特征峰，两者保留时间有差异，但相对保留时间在规定范围内；柱③ 在同一柱温下，6个特征峰不能完整呈现，表明色谱柱的极性及其内径膜厚对保留时间影 响大，考虑到本品特征峰要通过相对保留时间来定性，为了使方法具有更好的重现性和稳 定性，因此正文中固定了色谱柱的类型及规格，即应使用ΗΡ-50+毛细管柱（30mX0. 32mm， 0· 5 μ m)。
[0094] 实施例5 :含量测定
[0095] 方法学验证及耐用性考察。
[0096] 1.仪器与试剂
[0097] 仪器：Agilent7890A 气相色谱仪