一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法。
【背景技术】
[0002] 目前可查阅的茶叶中的农药快速检测方法有以下两种，但都存在着检测步骤烦 琐，耗时长，及所用试剂有毒有害的问题，因此无法在基层实验室和种植、生产、销售现场推 广应用。下面简单介绍两种方法的操作步骤加以说明： 1. 2002年发布了一个推荐性国家标准《茶中有机磷及氨基甲酸酯农药残留量的简易 检验方法酶抑制法》GB/T18625-2002,但因为茶叶样品会对测试产生特殊的干扰，分析方 法中仍无法避免冗长繁杂、并且耗费大量有机试剂的提取、净化等前处理步骤，其分析操作 时间甚至不会少于在实验室仪器分析方法。因此这个分析方法并不能很好解决实际应用中 的问题。
[0003] 其分析步骤是： (1)样品提取：〇. 5g茶加5ml丙酮浸泡5分钟再加0. 2g碳酸钙。
[0004] (2)氧化：取0. 5mL丙酮提取液于5mL烧杯中，吹干后加入0. 3mL缓冲液溶解。加 入氧化剂(预先配制）〇. lmL，摇勾后放置lOmin，再加入还原剂(预先配制）0. 3mL摇勾。
[0005] (3)酶解：加入酶液(预先制备）0. 2mL摇勾，放置lOmin，再加入底物0. 2mL，显色 剂(预先配制）〇. lmL，放置5min后测定。
[0006] (4)测定：在分光光度计波长调至600nm测定，当测定值在I. 0以下时，为未检出。 当测定值在I. 〇~1. 3之间时，为可能检出，但残留量较低。当测定值为1. 3以上时，为检 出。测定值越高，说明农药残留量越高。
[0007] 2、另有资料显示使用农药速测卡测定茶叶中的农药残留 操作作步骤如下： (1)样品处理 绿茶样品：取2g绿茶适当剪碎，放入带盖瓶中，加入IOmL纯净水，充分摇匀后，静止 15min〇
[0008] 铁观音、茉莉花、乌龙、普洱、红茶样品：取2g茶叶适当剪碎，放入带盖瓶中，加入 IOmL纯净水，加入5滴试剂A充分摇匀，静止15min。
[0009] (2)预反应 绿茶样品：取3mL浸泡液加入反应管中，摇匀；直接过滤(或4000rpm离心3min)，取ImL 滤液或上清液于小烧杯中，用酸性调节剂调节PH值为4~5之间。
[0010] 铁观音、茉莉花、乌龙、普洱、红茶样品：取3mL浸泡液加入反应管中，摇匀；静置 3min，取ImL上清液或滤液于小烧杯中，用酸性调节剂调节pH值为4~5之间。
[0011] (3)过柱 先取ImL纯净水加入层析柱中，用针管加压排空后，再取ImL上述处理液加入层析柱 中，用针管缓慢加压，（弃去第一滴）收集无色澄清滤液即为待测液。滴2滴（SOul)待测液 于速测卡白色药片上。
[0012] (4)反应 将速测卡置于40°C恒温装置中放置IOmin进行预反应，预反应后恒温装置恒温3min， 使红色药片与白色药片叠合发生反应，根据白色药片的颜色变化判断结果。每批测定应设 一个纯净水或蒸馏水的空白对照卡。
[0013] 以上两种方法在具体操作时步骤烦琐，国标法使用的试剂繁多，既有有机溶剂，又 有氧化剂和还原剂。许多试剂还须预先配制。而用农药速测卡时其操作要过滤样品提取液， 还须用酸调节待测液的PH，并且要经过层析柱处理。因此在实际应用中不能达到快速简便 的目的。
【发明内容】
[0014] 本发明的目的在于提供一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，针对茶叶或茶青 样品中的内源物质对测试产生特殊干扰，研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药 提取试剂，用此试剂提取茶叶中的农药残留，无需调节PH、过层析柱以及氧化过程，所用 试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂，在检测时直接将其与样 品待测液进行酶抑制反应，使得操作过程中少加一种试剂，检测方法更加简便，并减少实验 器材的使用。该方法简单快速，从样品处理到报告检测结果全流程20分钟，并可实现多通 道同时检测。
[0015] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残 留的检测步骤： (1) 试剂的配制： Et试剂：无需配制，直接开封启用； Sub试剂：在10 mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱，摇勾使之溶解； 农药提取液：在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇，混匀后再 加入100-300mL95wt. %乙醇溶液，混匀； 缓冲液：在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0. 2-0. 8g磷酸二氢钾，混匀； (2) 检测 样品提取： 称取0. 5克茶叶样品，加入1.0 mL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟，底部溶 液即为待测液； 对照测定： 吸取Et试剂100 μ L，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200 μ L农药提取液，摇匀，静置10 分钟，加入100 μ L Sub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，及时放在农药残留测试仪上进行对 照测试； 样品测定： 吸取Et试剂100 μ L，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200 μ L待测液，摇匀，静置10分 钟，加入100 μ LSub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，及时放在农药残留测试仪上进行样品 测试； 测定结果的判定： 当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准， 应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品 进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确 认。
[0016] 所述的Et试剂为胆碱酯酶和5, 5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）的混合液，两者的 重量比为1 : 40~100。
[0017] 本发明的显著优点在于：针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干 扰，研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂，用此试剂提取茶叶中的农 药残留，无需调节pH、过层析柱以及氧化过程，所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱 酯酶与DTNB复合成Et试剂，在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应，使得操作过 程中少加一种试剂，检测方法更加简便，并减少实验器材的使用。该方法简单快速，从样品 处理到报告检测结果全流程20分钟，并可实现多通道同时检测。以3~8通道为例，每样品 平均检测时间只有3-8分钟。
【具体实施方式】
[0018] -种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农 药残留的检测步骤： (1) 试剂的配制： Et试剂：