无需配制，直接开封启用；所述的Et试剂为胆碱酯酶和5, 5'-二硫代双（2-硝 基苯甲酸）的混合液，两者的重量比为1 : 0.002。
[0019] Sub试剂：在10 mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱，摇勾使之溶解； 农药提取液：在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇，混匀后再 加入100-300mL95wt. %乙醇溶液，混匀； 缓冲液：在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0. 2-0. 8g磷酸二氢钾，混匀； (2) 检测 样品提取： 称取0. 5克茶叶样品，加入1.0 mL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟，底部溶 液即为待测液； 对照测定： 吸取Et试剂100 μ L，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200 μ L农药提取液，摇匀，静置10 分钟，加入100 μ L Sub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行对照 测试； 样品测定： 吸取Et试剂100 μ L，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200 μ L待测液，摇匀，静置10分 钟，加入100 μ LSub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行样品测 试； 测定结果的判定： 当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准， 应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品 进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确 认。
[0020] 实施例1 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，茶叶或茶青中有机磷和氨基甲酸酯类农药残 留的检测步骤： (1) 试剂的配制： Et试剂：2mg (或Iku)胆碱酯酶溶解于500ml磷酸盐缓冲溶液(称取磷酸氢二钠5~15g 和磷酸二氢钾0. 2~0. 9g于试剂瓶中加入500mL蒸馏水溶解，混勾；）中，加入2~IOg牛 血清白蛋白和3~15g海藻糖搅拌溶解；另称取80~200mg的DTNB和0. 5~5g的牛磺胆 酸钠加入，并搅拌至完全溶解后即成为Et试剂，将其封装在5ml的安瓿中并置于冰箱（0~ 5°C)保存。使用时取出开封即可。
[0021] Sub试剂：在10 mL蒸馏水中加入30mg碘化硫代乙酰胆碱，摇匀使之溶解； 农药提取液：在50mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入200mL丙三醇，混匀后再加入 200mL95%乙醇溶液，混匀； 缓冲液：在500mL蒸馏水中加入IOg磷酸氢二钠和0. 5g磷酸二氢钾，混匀； (2) 检测 样品提取： 称取0. 5克茶叶样品，加入1.0 mL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟，底部溶 液即为待测液； 对照测定： 吸取Et试剂100 μ L，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200 μ L农药提取液，摇匀，静置10 分钟，加入100 μ L Sub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行对照 测试； 样品测定： 吸取Et试剂100 μ L，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200 μ L待测液，摇匀，静置10分 钟，加入100 μ LSub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，及时在农药残留测试仪上进行样品测 试； 测定结果的判定： 当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准， 应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品 进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确 认。
[0022] 应用上述检测方法，在铁观音茶叶和实验室栽种的无农药的茶青进行农药加样测 定，得到上述方法的不同农药的检测灵敏度如下： CN 105181405 A 说明书 5/5 页
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修 饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1. 一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，其特征在于：茶叶或茶青中有机磷和氨基 甲酸酯类农药残留的检测步骤： (1) 试剂的配制： Et试剂：无需配制，直接开封启用； Sub试剂：在10mL蒸馏水中加入10-60mg碘化硫代乙酰胆碱，摇勾使之溶解； 农药提取液：在20-80mL磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液中加入50-300mL丙三醇，混匀后再 加入100-300mL95wt. %乙醇溶液，混匀； 缓冲液：在500mL蒸馏水中加入5-15g磷酸氢二钠和0. 2-0. 8g磷酸二氢钾，混匀； (2) 检测 样品提取： 称取0. 5克茶叶或茶青样品，加入I.OmL农药提取液，使样品充分浸润并静置10分钟， 底部溶液即为待测液； 对照测定： 吸取Et试剂100yL，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200yL农药提取液，摇匀，静置10 分钟，加入100yLSub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，放入农药残留检测仪及时进行对照 测试； 样品测定： 吸取Et试剂100yL，加入I. 5mL缓冲液，摇匀，加入200yL待测液，摇匀，静置10分 钟，加入100yLSub试剂，摇匀后移入0. 5cm比色皿，放入农药残留检测仪及时进行样品测 试； 测定结果的判定： 当检测结果的酶抑制率读数超过50%时，表明样品农药残留毒性可能超过安全标准， 应当确认操作步骤无误、仪器工作正常、试剂没有污染失效，重新进行对照测试并对此样品 进行2次以上的重复检测，如检测结果重复并仍然超过50%，则需用气相色谱作进一步的确 认。2. 根据权利要求1所述的茶叶或茶青中农药残留的检测方法，其特征在于：所述的 Et试剂为胆碱酯酶和5, 5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）的混合液，两者的重量比为1 : 40-100〇
【专利摘要】本发明公开了一种茶叶或茶青中农药残留的检测方法，针对茶叶或茶青样品中的内源物质对测试产生特殊干扰，研发出一种专用于提取茶叶中的残留农药的农药提取试剂，用此试剂提取茶叶中的农药残留，无需调节pH﹑过层析柱以及氧化过程，所用试剂安全环保且用量少。首创将胆碱酯酶与DTNB复合成Et试剂，在检测时直接将其与样品待测液进行酶抑制反应，使得操作过程中少加一种试剂，检测方法更加简便，并减少实验器材的使用。该方法简单快速，从样品处理到报告检测结果全流程20分钟，并可实现多通道同时检测。
【IPC分类】G01N21/01, G01N1/28, G01N30/02
【公开号】CN105181405
【申请号】CN201510422117
【发明人】黄敏, 蔡琪, 刘薇, 张青松
【申请人】福建省测试技术研究所
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年7月18日