Treg细胞和Th17细胞的个数之比作为检测指标的用图
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医学领域，涉及一种Treg细胞和一种Thl7细胞，具体来说是一种Treg细胞和Thl7细胞的个数之比作为检测指标的用途。
【背景技术】
[0002]上皮性卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一，死亡率位居妇科肿瘤首位，近70%的患者确诊时已为FIGO分期III或者IV期，其主要表现为腹膜广泛种植和转移。腹膜具有慢性“腹膜炎”的特征。上皮性卵巢癌预后较差，如何有效的提高上皮性卵巢癌患者的预后为目前待解决的问题。
[0003]上皮性卵巢癌的发生发展机制与机体的免疫系统功能状态密切相关。机体的免疫功能在监测和消除肿瘤细胞中起着重要作用，促瘤免疫和抑瘤免疫失衡会导致肿瘤的发生。调节性 T 细胞(Regulatory T cells, Treg cells)和辅助性 T 细胞 17 (Helper T cell17,Thl7cells)在肿瘤免疫中起到重要作用。调节性T细胞为⑶4+Foxp3+细胞，主要起负向调节机体免疫功能，具有免疫抑制和降低机体免疫应答效应。辅助性T细胞17为CD4+IL-17+细胞，是表达白介素17(IL-17)的⑶4+T细胞亚群，主要介导宿主炎症反应。Treg细胞和Thl7细胞在炎症环境中功能不同，有关此两种细胞机制的探索是近年来受到高度重视的研究。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种Treg细胞和Thl7细胞的个数之比作为检测指标的用途，所述的这种用途解决了现有技术中没有有效的方法来评估上皮性卵巢癌预后和诊断良性或者恶性上皮性卵巢癌的技术问题。
[0005]本发明提供了来自离体的血液或者卵巢癌组织中测得的Treg细胞和Thl7细胞的个数之比作为检测指标的用途。
[0006]本发明还提供了 Treg细胞和Thl7细胞作为联合检测指标在制备用于上皮性卵巢癌预后评估或者诊断良恶性上皮性卵巢癌试剂中的用途。
[0007]进一步的，将Treg细胞的个数和Thl7细胞的个数之比作为指标用于上皮性卵巢癌的预后评估。
[0008]进一步的，将Treg细胞的个数和Thl7细胞的个数的比值为1.76作为指标用于上皮性卵巢癌的预后评估。
[0009]进一步的，将Treg细胞的个数和Thl7细胞的个数之比作为指标用于诊断良性或者恶性上皮性卵巢癌的评估。
[0010]进一步的，将Treg细胞的个数和Thl7细胞的个数的比值为1.03作为指标用用于诊断良性或者恶性上皮性卵巢癌的评估。
[0011 ] 本发明还提供了来自离体的血液或者卵巢癌组织中测得的Treg细胞和Thl7细胞的个数的比值在制备用于预后评估上皮性卵巢癌的诊断试剂中的用途，其中所述诊断试剂被制备来测定所述Treg细胞和Thl7细胞细胞的个数，所述Treg细胞和Thl7细胞的个数的比值与预定的指标1.76比较，如果高于1.76，则表明预后不佳，如果低于1.76，则表明预后良好。
[0012]本发明还提供了一组测量来自离体的血液或者卵巢癌组织中Treg细胞和Thl7细胞水平的试剂在制备用于预后评估上皮性卵巢癌的试剂盒中的用途。
[0013]本发明还提供了来自离体的血液或者卵巢癌组织中测得的Treg细胞和Thl7细胞的个数的比值在制备用于诊断良性或者恶性上皮性卵巢癌试剂中的用途，其中所述诊断试剂被制备来测定所述Treg细胞和Thl7细胞细胞的个数，所述Treg细胞和Thl7细胞的个数的比值与预定的指标1.03比较，如果高于1.03，则表明为恶性上皮性卵巢癌，如果低于1.03，则表明为良性上皮性卵巢癌。
[0014]本发明还提供了一组测量来自离体的血液或者卵巢癌组织中Treg细胞和Thl7细胞水平的试剂在制备用于诊断良性或者恶性上皮性卵巢癌的试剂盒中的用途。
[0015]本发明通过流式细胞仪技术检测发现在上皮性卵巢癌患者的外周血中，Treg细胞较良性卵巢肿瘤患者和正常人增多，Thl7细胞较正常人增多。并且，对于上皮性卵巢癌组织进行免疫荧光染色发现其组织中Treg/Thl7细胞比例的表达较良性卵巢肿瘤增高(良性:0.72±0.58，n = 24 ;恶性:2.23±1.47，n = 88，Mann Whitney U test, ρ〈0.001)，而且其比值和上皮性卵巢癌患者的临床分期密切相关，在进展期(FIG0分期III和IV期)患者的组织切片染色可见其表达增高(FIG0分期I和II期:1.78±0.79 ;FIG0分期III和IV期:2.65± 1.80，Mann-Whitney U test, p = 0.010) 0并且，通过计算良恶性上皮卵巢肿瘤中Treg/Thl7比值的ROC曲线发现，其Youden指数为0.784，所对应的Treg/Thl7值=
1.03，即可作为诊断良恶性上皮性卵巢癌的指标(p〈0.001)。进一步发现，通过I期II期患者和III期IV期患者Treg/Thl7比值的ROC曲线，计算出其Youden指数为0.276，所对应的Treg/Thl7值=1.76，即能够作为上皮性卵巢癌预后的一个新指标(P = 0.010)。因此，本发明发现Treg/Thl7细胞的比值与上皮性卵巢癌的预后具有相关性，Treg/Thl7细胞比例的检测能够作为一种新的指标应用于上皮性卵巢癌的预后评估。
【附图说明】
[0016]图1为免疫荧光染色计数Treg细胞和Thl7细胞在卵巢良性肿瘤和上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中的表达。
[0017]图2为Treg/Thl7细胞的比值在上皮性卵巢癌患者中表达增高(p〈0.001)。
[0018]图3为Treg细胞在卵巢良性肿瘤和上皮性卵巢癌患者外周血中的表达。
[0019]图4为Thl7细胞在卵巢良性肿瘤和上皮性卵巢癌患者外周血中的表达。
[0020]图5为Treg/Thl7细胞的比值在FIGO分期I，II期和III，IV期上皮性卵巢癌患者中的表达(P = 0.010)。
[0021]图6为Treg/Thl7细胞的比值与良恶性上皮性卵巢肿瘤的ROC曲线。
[0022]图7为Treg/Thl7细胞的比值与上皮性卵巢癌临床分期的ROC曲线。
【具体实施方式】
[0023]以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0024]以下各实施例中使用的实验材料和试剂如下:
[0025]淋巴细胞分离液购自Lymphprep公司，
[0026]RPM1-1640培养液购自Gibco-BRL生物技术公司，
[0027]胎牛血清，Hank’ s平衡液购自Gibco-BRL生物技术公司，
[0028]Triton X-100 购自 aMResco 公司，
[0029]山羊血清购自武汉博士德，
[0030]DAPI 购自 Santa Cruz B1technology 公司，
[0031]抗人0)4，IL-17，Foxp3抗体均购自Abcam公司，
[0032]AlexFluor488 标记的抗鼠 IgG 购自 Jackson 公司，
[0033]Cy3标记的抗大鼠IgG购自Jackson公司，
[0034]AlexFluor647 标记的抗兔 IgG 购自 Jackson 公司，
[0035]相关同行对照抗体和破膜剂均购自eB1science公司。
[0036]实施例1
[0037]本实施例选用上皮性卵巢癌患者和良性卵巢肿瘤患者冰冻组织切片，通过免疫荧光抗体染色Treg细胞和Th 17细胞的表达。
[0038]具体实施方法为:免疫荧光共聚焦显微镜技术:获得上皮性卵巢癌组织切片后，用4